一種自厚樸粗提物中提取和厚樸酚與厚樸酚的方法
【專利摘要】本發明公開了一種自厚樸粗提物中提取和厚樸酚與厚樸酚的方法。目前對厚樸粗提物進行分離和厚樸酚與厚樸酚的方法中，有的成本太高，而且生產量小，大規模生產不易實現。本發明利用厚樸粗提物中含有的厚樸酚與和厚樸酚在弱極性溶液中與一定濃度的堿性條件下能達到完全分離的特點，首先使用弱堿性溶劑從混合溶液中提取出厚樸酚，和厚樸酚保留在溶液中，再以強堿溶液萃取出和厚樸酚，將一些油類雜質保留在有機溶劑層，然后分別調酸，析出沉淀，這時所得的粗晶中厚樸酚與和厚樸酚含量有大幅度提高。本發明分離、純化工藝簡單易行，適合工業化大生產，所制得的厚樸酚、和厚樸酚可用于開發單一成分新藥。
【專利說明】一種自厚樸粗提物中提取和厚樸酚與厚樸酚的方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及自植物提取浸膏中制備天然化學品的方法，具體地說是一種從厚樸粗提物中提取出單一成分和厚樸酚與厚樸酚的方法。
【背景技術】
[0002]厚樸酌'(Magnolol)與和厚樸酌'(Honokiol)是中藥厚樸的主要化學成分。藥理試驗表明，厚樸酚具有特殊的、持久的肌肉松弛作用及較強的抗菌作用，可抑制血小板聚集，臨床上主要用作抗菌、抗真菌藥。在抗菌作用方面，厚樸酚對格蘭氏陽性菌、耐酸性菌、絲狀真菌有顯著的抗菌活性，對變形鏈球菌有更加顯著的抗菌作用，對葡萄球菌的抑制作用最強。臨床上主要用作消除胸腹滿悶、鎮靜中樞神經、運動員肌肉松弛、抗真菌、抗潰瘍等藥。和厚樸酚在抗腫瘤治療方面存在著巨大的潛力，有文獻報道，和厚樸酚的抗腫瘤作用具有多靶點、多環節、多效應的特點，并且毒副作用低，不僅對常見的腫瘤細胞有明顯的細胞毒作用，對于一些有藥物抵抗的腫瘤細胞(如多發性骨髓瘤細胞)也有一定的治療效果。
[0003]中國專利申請號201310217604.7公開了厚樸酚作為CYP2E1酶抑制劑的用途，研究結果表明厚樸酚對高脂高糖飼料喂養-低劑量STZ誘導的二型糖尿病大鼠的肝臟CYP2EI酶活性具有顯著的抑制作用，對CYP2E1酶高表達所導致的大鼠肝臟氧化應激損傷具有明顯保護作用，能明顯降低糖尿病大鼠的血糖與血脂水平。這些實驗依據和理論基礎，都提示厚樸酚作為單一 成分開發既有很強的科學性和創新性，又有很高的開發應用價值。
[0004]目前對厚樸粗提物進行分離和厚樸酚與厚樸酚的工藝主要是大孔樹脂吸附法、TLC制備分離法、高速逆流萃取法、硅膠柱層析法、高效液相色譜制備法等，高速逆流萃取法、高效液相色譜制備法設備昂貴，前期投入很大，成本太高，而且操作復雜，生產量小，大規模生產不易實現；硅膠柱層析法、大孔樹脂吸附法雖然可以規模生產但得到的單一成分含量不高，且工作量大，周期長，生產成本太高，產品根本沒有市場競爭力；TLC制備分離法只能用于實驗室的小量制備，不能用于大規模工業生產。
[0005]中國專利申請號201110328031.6公開了一種從厚樸中制備高純度厚樸酚和和厚樸酚的方法，其特點是先用乙醇溶液提取出厚樸總酚，再將厚樸總酚進行硅膠濕法裝柱層析分離，用石油醚-乙酸乙酯-甲醇進行洗脫，得到的厚樸酚含量只有90%左右，而且母液需重新硅膠柱純化，周期長，效率低，成本高，不適合工業化大生產。
【發明內容】
[0006]本發明所要解決的技術問題是克服上述現有技術存在的缺陷，提供一種從厚樸粗提物中提取高純度厚樸酚與和厚樸酚的方法，用于開發新的厚樸單體制劑，提高附加值。
[0007]為此，本發明采用如下的技術方案:一種自厚樸粗提物中提取和厚樸酚與厚樸酚的方法，其步驟如下:
I)加熱溶解:將厚樸粗提物干粉稱重，按重量比加入10-20倍量的有機溶劑低極性烷烴或低極性醚，加熱回流溶解2-4小時，得到的溶液中加入4-6倍溶劑體積的ρΗΙΟ-ll的緩沖溶液，保持溶液溫度60~80°C，充分攪拌均勻，0.5~Ih后靜置，分層；
2)萃取:將步驟I)所得的下層緩沖溶液收集，并乘熱分離干凈上層的有機溶劑；將上層有機層再以4-6倍溶劑體積的ρΗΙΟ-ll的緩沖溶液萃取，共五次，收集下層緩沖溶液；將上層有機層用4-6倍其體積的0.5-1.5%氫氧化鈉溶液萃取I~3次，并乘熱分離，收集下層氫氧化鈉溶液；
3)酸化、沉淀:將步驟2)所得的下層緩沖溶液合并，冷卻后加鹽酸，調pH值為
2.5-3.5，靜置析出沉淀，即 為厚樸酚粗晶；將步驟2)所得的下層氫氧化鈉溶液合并，冷卻后加鹽酸，調pH值為2.5-3.5,靜置析出沉淀，即為和厚樸酹粗晶；
4)重結晶、純化:所述的重結晶是將步驟3)所得厚樸酚粗晶用10~20倍石油醚于60~80°C回流溶解后，析出下層的油層及污物，乘熱分離出上層的石油醚，冷置后析晶，SP為98%以上的厚樸酚；同法，將步驟3)所得和厚樸酚粗晶處理后即得98%以上的和厚樸酚。
[0008]本發明利用厚樸粗提物中含有的厚樸酚與和厚樸酚在弱極性溶劑(即低極性溶劑)中與一定濃度的堿性條件下(即弱堿性溶液)能達到完全分離的特點，首先使用弱堿性溶液(ρΗΙΟ-ll緩沖溶液)從混合溶液中提取出厚樸酚，和厚樸酚保留在溶液中，再以強堿溶液(0.5-1.5%氫氧化鈉)萃取出和厚樸酚，將一些油類雜質保留在有機溶劑層，然后分別調酸，析出沉淀，這時所得的粗晶中厚樸酚與和厚樸酚含量有大幅度提高(從百分之三十提高到百分之九十以上)，而且由于pH值控制到位(ρΗΙΟ-ll，特別ρΗΙΟ.5)，厚樸酚與和厚樸酚分離很徹底，所含雜質主要是一些揮發油，只需一步石油醚處理即可達到98%以上含量，更易進行大生產操作。
[0009]進一步，所述的低極性烷烴為正己烷或者環己烷。
[0010]進一步，所述的低極性醚為石油醚。
[0011]進一步,步驟2)中,萃取所用的緩沖溶液pH值為10.5,可保證厚樸酹與和厚樸酹的最大分離。
[0012]進一步，ρΗΙΟ.5緩沖溶液的配制方法為:碳酸氫鈉2.1g和氫氧化鈉0.712g，加水至1000ml,碳酸氫鈉、氫氧化鈉為分析純,水為純化水；pH10.5緩沖溶液的配制方法也可以為:碳酸氫鈉2.1g和氫氧化鈉0.9g,碳酸氫鈉、氫氧化鈉為工業級,水為飲用水。
[0013]進一步，萃取所用氫氧化鈉溶液的質量百分濃度為1.0%。
[0014]進一步，所述的厚樸粗提物干粉中厚樸酚的含量在35-42%，萃取后所得粗晶中厚樸酚的含量在95%左右；和厚樸酚的含量在38-45%，萃取后所得粗晶中和厚樸酚的含量在93%左右。
[0015]本發明充分利用了厚樸酚與和厚樸酚在ρΗΙΟ~11間能達到完全分離的特點，首先精確配制緩沖溶液使PH穩定在10.5，達到最佳分離點，保證了萃取的選擇性好、處理量大，使萃取完全、徹底；本發明分離、純化工藝簡單易行，適合工業化大生產，所制得的厚樸酚、和厚樸酚可用于開發單一成分新藥。
【具體實施方式】
[0016]下面結合【具體實施方式】對本發明做進一步的說明，但不限于本實施例的范圍。
[0017]實施例1
取厚樸粗提物100g，加環己烷1000ml，置10000ml圓底燒瓶中，于水浴上85°C加熱回流熱溶，待開始回流時反應2小時。取純化水加熱至約80°C左右，分析純碳酸氫鈉2.1g和分析純氫氧化鈉0.712g，加純化水至1000ml，配制成ρΗΙΟ.5緩沖液。按前述方法配成的5000ml緩沖液加入10000ml圓底燒瓶中，開啟攪拌30分鐘使混合充分，靜置10分鐘后置分液漏斗上分層，分取下層緩沖液層，同法操作五次，取殘留液檢測無厚樸酚斑點后加入1%氫氧化鈉溶液萃取和厚樸酚；將下層緩沖液層加入4MHCL (每1000ml緩沖液加入10ml4M鹽酸)，使pH在3左右，充分攪拌后靜置析晶，即得厚樸酚粗晶41.2g ;將下層氫氧化鈉溶液加入4MHCL (每1000ml氫氧化鈉溶液加入70ml4M鹽酸)，使pH在2~3左右，充分攪拌后靜置析晶，即得和厚樸酚粗晶43.1g ;厚樸酚粗晶41.2g加入410ml石油醚(60~90°C )于80°C水浴回流溶解，可看到下層有部分油層和污物，乘熱將上層干凈石油醚傾入結晶皿中，冷置析晶，晶體以80°C干燥，得厚樸酚38.8g，含量99.03% ;和厚樸酚粗晶43.1g加入430ml石油醚(60~90°C)于80°C水浴回流溶解，析出下層油層，乘熱將上層干凈石油醚傾入結晶皿，冷置析晶，晶體以65°C干燥，得和厚樸酚40.llg，含量99.2%。
[0018]實施例2
取厚樸粗提物lOOOg，加環己烷10000ml，于100L反應釜中80°C加熱回流3小時；另取飲用水IOOKg置敞口鍋中加熱至80°C左右，按氫氧化鈉0.9g，碳酸氫鈉2.lg，加飲用水至1000ml的比例加入碳酸氫鈉和氫氧化鈉，攪拌使充分溶解成ρΗΙΟ.5的緩沖液。開啟反應釜攪拌機，邊攪拌邊加入50Kg緩沖液，再攪拌15分鐘后，靜置，分層；同法操作，共萃取五次，取殘留液點樣檢測無厚樸酚斑點，取飲用水配制1%氫氧化鈉溶液，萃取二次即可。將下層緩沖液層加入4MHCL ( 每1000ml緩沖液加入10ml4M鹽酸)，使pH在3左右，充分攪拌后靜置析晶，即得厚樸酚粗晶408g ;將下層氫氧化鈉溶液加入4MHCL (每1000ml氫氧化鈉溶液加入70ml4M鹽酸)，使pH在2~3左右，充分攪拌后靜置析晶，即得和厚樸酚粗晶425g ;厚樸酚粗晶408g加入4000ml石油醚(60~90°C )于80°C水浴回流溶解，可看到下層有部分油層和污物，乘熱將上層干凈石油醚傾入結晶皿中，冷置析晶，晶體以80°C干燥，得厚樸酚381g，含量99.11% ;和厚樸酚粗晶425g加入4200ml石油醚(60~90°C )于80°C水浴回流溶解，析出下層油層，乘熱將上層干凈石油醚傾入結晶皿，冷置析晶，晶體以65°C干燥，得和厚樸酚417.5g，含量98.6%。
[0019]實施例3
取厚樸粗提物10Kg，加環己烷80Kg，于多功能提取罐中加熱回流4小時，使充分熱溶；另取500Kg飲用水置敞口鍋中，蒸汽加熱至80°C左右，按氫氧化鈉0.9g，碳酸氫鈉2.lg，加飲用水至1000ml的比例加入碳酸氫鈉和氫氧化鈉，攪拌使充分溶解成ρΗΙΟ.5的緩沖液。開啟多功能提取罐攪拌機，邊攪拌邊加入500Kg緩沖液，再攪拌15分鐘后，靜置，分層；同法操作，共萃取五次，取殘留液點樣檢測無厚樸酚斑點，取飲用水配制1%氫氧化鈉溶液，萃取二次。將下層緩沖液層加入4MHCL(每1000ml緩沖液加入10ml4M鹽酸)，使pH在3左右，充分攪拌后靜置析晶，即得厚樸酚粗晶4.14Kg ;將下層氫氧化鈉溶液加入4MHCL(每1000ml氫氧化鈉溶液加入70ml4M鹽酸)，使pH在2~3左右，充分攪拌后靜置析晶，即得和厚樸酚粗晶
4.53Kg ;厚樸酚粗晶4.14Kg加入41000ml石油醚(60~90°C )于80°C水浴回流溶解，可看到下層有部分油層和污物，乘熱將上層干凈石油醚傾入結晶皿中，冷置析晶，晶體以80°C干燥，得厚樸酚3.98Kg，含量99.05% ;和厚樸酚粗晶4.53Kg加入45000ml石油醚(60~90°C )于80°C水浴回流溶解，析出下層油層，乘熱將上層干凈石油醚傾入結晶皿，冷置析晶，晶體以65°C干燥，得和厚樸酚4.32Kg，含量99.02%。
[0020]上述實施例中厚樸酚與和厚樸酚的高效液相檢測方法為:高效液相色譜儀Agilent 1260 ;流動相:甲醇一水(78:22);色譜柱:C18柱(4.6 X 250mm);檢測波長選擇294nm ;流速為:1.0ml/min,室溫操作。
[0021]過程控制中TLC方法:硅 膠G薄層板10X 20cm ;展開劑:苯一甲醇(27:1);顯色劑為:1%香草醛硫酸溶液，噴后在100°C加熱至斑點顯色清晰。
【權利要求】
1.一種自厚樸粗提物中提取和厚樸酚與厚樸酚的方法，其步驟如下: . 1)加熱溶解:將厚樸粗提物干粉稱重，按重量比加入10-20倍量的有機溶劑低極性烷烴或低極性醚，加熱回流溶解2-4小時，得到的溶液中加入4-6倍溶劑體積的ρΗΙΟ-11的緩沖溶液，保持溶液溫度60~80°C，充分攪拌均勻，0.5~Ih后靜置，分層； . 2)萃取:將步驟I)所得的下層緩沖溶液收集，并乘熱分離干凈上層的有機溶劑；將上層有機層再以4-6倍溶劑體積的ρΗΙΟ-ll的緩沖溶液萃取，共五次，收集下層緩沖溶液；將上層有機層用4-6倍其體積的0.5-1.5%氫氧化鈉溶液萃取I~3次，并乘熱分離，收集下層氫氧化鈉溶液； 3)酸化、沉淀:將步驟2)所得的下層緩沖溶液合并，冷卻后加鹽酸，調pH值為.2.5-3.5，靜置析出沉淀，即為厚樸酚粗晶；將步驟2)所得的下層氫氧化鈉溶液合并，冷卻后加鹽酸，調pH值為2.5-3.5,靜置析出沉淀，即為和厚樸酹粗晶； 4)重結晶、純化:所述的重結晶是將步驟3)所得厚樸酚粗晶用10~20倍石油醚于60~80°C回流溶解后，析出下層的油層及污物，乘熱分離出上層的石油醚，冷置后析晶，SP為98%以上的厚樸酚；同法，將步驟3)所得和厚樸酚粗晶處理后即得98%以上的和厚樸酚。
2.根據權利要求1所述的自厚樸粗提物中提取和厚樸酚與厚樸酚的方法，其特征在于，所述的低極性烷烴為環己烷或正己烷。
3.根據權利要求1所述的自厚樸粗提物中提取和厚樸酚與厚樸酚的方法，其特征在于，所述的低極性醚為石油醚。
4.根據權利要求1、2或3所述的自厚樸粗提物中提取和厚樸酚與厚樸酚的方法，其特征在于，步驟2)中，萃取所用的緩沖溶液pH值為10.5。
5.根據權利要求4所述的自厚樸粗提物中提取和厚樸酚與厚樸酚的方法，其特征在于，ρΗΙΟ.5緩沖溶液的配制方法為:碳酸氫鈉2.1g和氫氧化鈉0.712g，加水至1000ml，碳酸氫鈉、氫氧化鈉為分析純，水為純化水。
6.根據權利要求4所述的自厚樸粗提物中提取和厚樸酚與厚樸酚的方法，其特征在于，ρΗΙΟ.5緩沖溶液的配制方法為:碳酸氫鈉2.1g和氫氧化鈉0.9g，碳酸氫鈉、氫氧化鈉為工業級，水為飲用水。
7.根據權利要求1、2或3所述的自厚樸粗提物中提取和厚樸酚與厚樸酚的方法，其特征在于，萃取所用氫氧化鈉溶液的質量百分濃度為1.0%。
8.根據權利要求1、2或3所述的自厚樸粗提物中提取和厚樸酚與厚樸酚的方法，其特征在于，所述的厚樸粗提物干粉中厚樸酚的含量在35-42%，和厚樸酚的含量在38-45%。
【文檔編號】C07C37/84GK103922899SQ201410161323
【公開日】2014年7月16日 申請日期:2014年4月22日 優先權日:2014年4月22日
【發明者】呂文輝, 劉法千, 鮑立曾 申請人:浙江得恩德制藥有限公司