提高機體糖原儲備的牦牛皮大分子膠原蛋白的制備方法
【專利摘要】本發明涉及一種提高機體糖原儲備的牦牛皮大分子膠原蛋白的制備方法，該方法包括以下步驟：⑴將新鮮或經浸潤、軟化后的干燥的青藏高原特有牛種牦牛wildyak的牦牛皮清洗干凈，放入水溶液后加酶進行酶解，得到保毛脫毛后的牦牛皮；⑵保毛脫毛后的牦牛皮加水后加熱，經清水沖洗得到滅酶后的牦牛皮；⑶滅酶后的牦牛皮剪切成小塊后用水進行提取，得到濾液；⑷濾液濃縮后加涼水提沫，得到除沫后的濾液；⑸除沫后的濾液用水稀釋后進行分離，即得14~25Kda大分子的牦牛皮膠原蛋白溶液；⑹14~25Kda大分子的牦牛皮膠原蛋白溶液經濃縮、干燥，即得牦牛皮大分子膠原蛋白。本發明方法簡單、效果顯著，所制得的牦牛皮膠原蛋白分子量分布集中，具有提高機體糖原儲備的功能。
【專利說明】提高機體糖原儲備的牦牛皮大分子膠原蛋白的制備方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種膠原蛋白的制備方法，尤其涉及提高機體糖原儲備的牦牛皮大分子膠原蛋白的制備方法。
【背景技術】
[0002]糖原是由多個葡萄糖組成的大分子多糖，是體內糖的貯存形式，主要貯存在肌肉和肝臟中，在肌肉中約占f 2%，肝臟中約占6~8%。
[0003]肌糖原酵解后可提供組織能量，能夠滿足活動時肌肉對能量需要，特點是釋放能量時不需要氧參與，在高海拔缺氧條件下或無氧條件下均可以及時提供機體需要的能量，肌糖原儲備與缺氧、疲勞密切相關。肝糖原是葡萄糖聚合物以糖原的形式儲存于肝臟，當機體需要時，可分解成葡萄糖，轉化為能量。肝糖原和肌糖原都可以調理血糖，不同的是肝糖原分解直接變成葡萄糖，維持血糖均衡，而肌糖原需由肝臟轉換成肝糖原后在分解變成葡萄糖。
[0004]牦牛是中國古老而又原始的牛種之一，是唯一能在青藏高原生態環境下生存繁衍的牛種，是青藏高原特有的優勢畜種，具有獨特的生態學特性及經濟價值。經過千百年的自然選擇與進化，形成了其獨特的遺傳性能和對高寒缺氧惡劣環境的適應能力，具有極強的抗逆能力、抗病能力、耐受性和適應性，能適應一般家畜不能適應的高海拔、高缺氧等嚴酷的高寒惡劣生態環境 。牦牛體內含有許多抗疲勞、抗缺氧的生物活性物質，從牦牛皮中提取純天然的膠原蛋白，提供 人體能量儲備很有必要。
【發明內容】
[0005]本發明所要解決的技術問題是提供一種方法簡單、效果顯著的提高機體糖原儲備的牦牛皮大分子膠原蛋白的制備方法。
[0006]為解決上述問題，本發明所述的提高機體糖原儲備的牦牛皮大分子膠原蛋白的制備方法，包括以下步驟:
⑴將新鮮或經浸潤、軟化后的干燥的青藏高原特有牛種牦牛wild yak的牦牛皮清洗干凈，放入PH值為4、的水溶液中，然后加入質量濃度為0.1-20%的酶，在溫度為1(T50°C的條件下酶解2~20小時，得到保毛脫毛后的牦牛皮；
⑵將所述保毛脫毛后的牦牛皮按其重量的2飛倍加入水，并在溫度為3(T80°C的條件下加熱廣30分鐘后，用清水沖洗2~3次，洗凈殘余毛屑，得到滅酶后的牦牛皮；
⑶將所述滅酶后的牦牛皮剪切成3~5cm的小塊，然后加入其重量5~20倍的水進行提取，提取時間為2~10小時后，過濾，棄去殘渣，得到濾液；
⑷將所述濾液濃縮至比重為1:1.2^1.5時，加入溫度為(T10°C涼水，提沫，并重復:3-8次，得到除沫后的濾液；
(5)將所述除沫后的濾液用其體積的5~50倍水稀釋后，在分離溫度為3(T50°C的條件下進行分離，即得ir25Kda大分子的牦牛皮膠原蛋白溶液；(6)將所述ir25Kda大分子的牦牛皮膠原蛋白溶液經濃縮、干燥，即得牦牛皮大分子膠原蛋白。
[0007]所述步驟⑴中酶為木瓜蛋白酶、胃蛋白酶、堿性蛋白酶、中性蛋白酶中的一種或兩種。
[0008]所述步驟(5)中的濾液分離為離心、膜分離、透析方法中的任意一種。
[0009]所述步驟(6)中的濃縮是指減壓濃縮、吹干濃縮方法中任意一種。
[0010]所述步驟(6)中的干燥條件為噴霧干燥、冷凍干燥、微波干燥、烘箱干燥中的任意一種。
[0011]本發明與現有技術相比具有以下優點:
1、本發明以牦牛皮為原料，通過酶法保毛脫毛處理牦牛皮，經過提取分離得到大分子膠原蛋白。采用該方法制得的牦牛皮膠原蛋白分子量分布集中，其分子量在14~25 KDa，粒徑大小在5.8^8 nm之間，含量大于98%以上(參見表1、表2、圖1、圖2)。
[0012]表1 牦牛皮膠原DLS動態光散射測定結果
【權利要求】
1.提高機體糖原儲備的牦牛皮大分子膠原蛋白的制備方法，包括以下步驟: ⑴將新鮮或經浸潤、軟化后的干燥的青藏高原特有牛種牦牛Wild yak的牦牛皮清洗干凈，放入PH值為4、的水溶液中，然后加入質量濃度為0.1~20%的酶，在溫度為10~50°C的條件下酶解2~20小時，得到保毛脫毛后的牦牛皮； ⑵將所述保毛脫毛后的牦牛皮按其重量的2飛倍加入水，并在溫度為30~80°C的條件下加熱廣30分鐘后，用清水沖洗2~3次，洗凈殘余毛屑，得到滅酶后的牦牛皮； ⑶將所述滅酶后的牦牛皮剪切成3~5cm的小塊，然后加入其重量5~20倍的水進行提取，提取時間為2~10小時后，過濾，棄去殘渣，得到濾液； ⑷將所述濾液濃縮至比重為1:1.2^1.5時，加入溫度為(T10°C涼水，提沫，并重復3~8次，得到除沫后的濾液； (5)將所述除沫后的濾液用其體積的5~50倍水稀釋后，在分離溫度為3(T50°C的條件下進行分離，即得ir25Kda大分子的牦牛皮膠原蛋白溶液； (6)將所述ir25Kda大分子的牦牛皮膠原蛋白溶液經濃縮、干燥，即得牦牛皮大分子膠原蛋白。
2.如權利要求1所述的提高機體糖原儲備的牦牛皮大分子膠原蛋白的制備方法，其特征在于:所述步驟⑴中酶為木瓜蛋白酶、胃蛋白酶、堿性蛋白酶、中性蛋白酶中的一種或兩種。
3.如權利要求1所述的提高機體糖原儲備的牦牛皮大分子膠原蛋白的制備方法，其特征在于:所述步驟(5)中的濾液分離為離心、膜分離、透析方法中的任意一種。
4.如權利要求1所述的提高機體糖原儲備的牦牛皮大分子膠原蛋白的制備方法，其特征在于:所述步驟(6)中的濃縮是指減壓濃縮、吹干濃縮方法中任意一種。
5.如權利要求1所述的提高機體糖原儲備的牦牛皮大分子膠原蛋白的制備方法，其特征在于:所述步驟(6)中的干燥條件為噴霧干燥、冷凍干燥、微波干燥、烘箱干燥中的任意一種。
【文檔編號】C07K14/78GK103805669SQ201410080302
【公開日】2014年5月21日 申請日期:2014年3月6日 優先權日:2014年3月6日
【發明者】杜玉枝, 魏立新, 楊紅霞, 畢宏濤, 庫進良 申請人:中國科學院西北高原生物研究所, 青海信成醫藥集團有限公司