一種分離純化大豆異黃酮單體化合物的方法
【專利摘要】本發明涉及一種從大豆異黃酮提取物中分離純化大豆異黃酮單體化合物的方法，將大豆異黃酮提取物用甲醇溶解，上SOURCE15RPC柱進行層析分離純化，用甲醇-0.1%磷酸為洗脫液進行洗脫，收集目標組分餾分，將得到的不同餾分減壓濃縮回收溶劑，分別得到黃豆黃苷、大豆苷、染料木苷、大豆苷元、染料木素等五種大豆異黃酮單體化合物，分離純度高。
【專利說明】一種分離純化大豆異黃酮單體化合物的方法
【技術領域】
[0001]本發明屬于化工領域，具體是涉及一種從大豆異黃酮提取物中分離純化多種大豆異黃酮單體化合物的方法，主要是分離純化黃豆黃苷、大豆苷、染料木苷、大豆苷元、染料木素等化合物。
【背景技術】
[0002]大豆異黃酮是存在于大豆等豆科植物中的黃酮類化合物，它是一類重要的生物活性物質。現代藥理學研究表明，大豆異黃酮具有預防和治療癌癥作用，對乳腺癌、結腸癌、肺癌、前列腺癌和皮膚癌及白血病有明顯的治療作用，也可預防卵巢癌、結腸癌、胃癌和前列腺癌的發生； 具有雌激素樣作用，可預防婦女更年期綜合征；具有預防心血管疾病作用，降低膽固醇、調節血脂，預防心血管疾病的發生；具有預防、改善骨質疏松作用，減少骨質流失，同時增加機體對鈣的吸收，增加骨密度；具有預防早老性癡呆癥作用。
[0003]目前，從大豆中分離純化高純度化合物的方法已有報道，但各種方法或采取多步進行分離，操作比較麻煩；或所用分離材料強度差，易損壞，難于多次重復利用；或分離過程僅能得到一種或少數幾種大豆異黃酮成分；或得到的成分純度不高；或分離過程中要使用氯仿有毒溶劑。
【發明內容】
[0004]本發明的目的在于克服現有技術的不足，提供一種強度好、穩定性好、能長期重復使用的分離材料和一種操作簡便、分離量大、綜合成本低、生產周期短的快速制備多種高純度大豆異黃酮化合物的方法，通過一步分離純化即可從大豆異黃酮提取物中得到多種大豆異黃酮單體化合物。
[0005]本發明的方案如下:
一種分離純化大豆異黃酮單體化合物的方法，將大豆異黃酮提取物用甲醇溶解，上層析柱層析分離純化，用洗脫液洗脫，流出液由紫外檢測器在254 nm檢測，收集目標組分餾分，將得到的餾分減壓濃縮回收溶劑，得到黃豆黃苷、大豆苷、染料木苷、大豆苷元、染料木素單體化合物。
[0006]前面所述的方法，優選的方案是，所述層析柱填料為SOURCE 15RPC。
[0007]前面所述的方法，優選的方案是，所述洗脫液為30%_95%甲醇-0.1%磷酸洗脫液。
[0008]前面所述的方法，優選的方案是，所述洗脫液為50%甲醇-0.1%磷酸，等度洗脫。
[0009]前面所述的方法，優選的方案是，所述洗脫液為90%甲醇-0.1%磷酸，等度洗脫。
[0010]前面所述的方法，優選的方案是，所述洗脫液為45%甲醇-0.1%磷酸和90%甲醇-0.1%磷酸，分步洗脫。
[0011]前面所述的方法，優選的方案是，所述洗脫液為40%甲醇-0.1%磷酸和95%甲醇-0.1%磷酸，梯度洗脫。
[0012]前面所述的方法，優選的方案是，洗脫液流速為每小時5-50倍柱體積(優選每小時20倍柱體積)。
[0013]本發明一種從大豆異黃酮提取物中分離純化多種大豆異黃酮單體化合物的方法，具有如下優勢:
(1)所得到的大豆異黃酮單體化合物純度高(從圖2可以看出)。
[0014](2)不需要像已有技術一樣對樣品進行多次分離純化，只需要一個分離步驟即可得到多種高純度化合物，經過一步分離純化就可以同時得到黃豆黃苷、大豆苷、染料木苷、大豆苷元、染料木素等5種單體化合物。方法操作簡單，效率高，工藝周期短，節省試劑，降低了生產成本。
[0015](3)純化過程中不使用對環境危害大的氯仿等有機溶劑，綠色環保。
[0016](4)建立了一個簡便、高效、能實現發明目的的途徑，優化了層析方法的條件(洗脫液組成與洗脫方式)，使純度和效率都大為提高。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0017]圖1是大豆異黃酮提取物的高效液相色譜圖。
[0018]圖2是實施例4層析色譜圖。
【具體實施方式】
[0019]下面結合實施例和附圖詳細說明本發明的技術方案，但保護范圍不被此限制。實施例中所用設備或原料皆可從市場獲得。所用SOURCE 15RPC層析填料購自通用電氣(中國)醫療集團，所用試劑均購自天津試劑四廠，所用水為去離子水。
[0020]實施例:
將大豆異黃酮提取物用甲醇溶解，上SOURCE 15RPC層析柱層析分離，用甲醇-0.1%磷酸為洗脫液進行洗脫，洗脫液流速為每小時20倍柱體積，流出液由紫外檢測器在254 nm檢測，收集目標組分餾分，將得到的餾分減壓濃縮回收溶劑，即得到所要分離的單體化合物。
[0021]發明人通過使用不同比例的甲醇-0.1%磷酸，采用不同洗脫方式，優選出了實現本發明目的的純化條件，有關實驗結果如下:
表一柱層析條件
【權利要求】
1.一種分離純化大豆異黃酮單體化合物的方法，其特征是，將大豆異黃酮提取物用甲醇溶解，上層析柱層析分離純化，用洗脫液洗脫，流出液由紫外檢測器在254 nm檢測，收集目標組分餾分，將得到的餾分減壓濃縮回收溶劑，得到黃豆黃苷、大豆苷、染料木苷、大豆苷元、染料木素單體化合物。
2.根據權利要求1所述的方法，其特征是，所述層析柱填料為SOURCE15RPC。
3.根據權利要求1所述的方法，其特征是，所述洗脫液為30%-95%甲醇-0.1%磷酸洗脫液。
4.根據權利要求3所述的方法，其特征是，所述洗脫液為50%甲醇-0.1%磷酸，等度洗脫。
5.根據權利要求3所述的方法，其特征是，所述洗脫液為90%甲醇-0.1%磷酸，等度洗脫。
6.根據權利要求3所述的方法，其特征是，所述洗脫液為45%甲醇-0.1%磷酸和90%甲醇-0.1%磷酸，分步洗脫。
7.根據權利要求3所述的方法，其特征是，所述洗脫液為40%甲醇-0.1%磷酸和95%甲醇-0.1%磷酸，梯度洗脫。
8.根據權利要求1所述的方法，其特征是，洗脫液流速為每小時5-50倍柱體積(優選每小時20倍柱體積)。
【文檔編號】C07D311/40GK103788156SQ201410061773
【公開日】2014年5月14日 申請日期:2014年2月24日 優先權日:2014年2月24日
【發明者】谷煥芝, 孫愛玲, 柳仁民, 傅崇崗 申請人:聊城大學