一種核酸熒光探針及其制備方法
【專利摘要】本發明公開了一種新型核酸熒光探針，將胺基引入到四苯乙烯上，胺基為堿性基團，可以與核酸結合，從而限制分子的旋轉，抑制非輻射的激發態弛豫，熒光顯著增強，即實現對核酸的檢測。上述熒光探針無論是對雙鏈DNA，還是單鏈DNA都有較高靈敏度。將此類探針應用于凝膠電泳或生物樣品中核酸的檢測和顯色具有較好的應用前景。
【專利說明】一種核酸熒光探針及其制備方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種核酸熒光探針及其制備方法，屬于生物檢測【技術領域】。
【背景技術】
[0002]核酸是生命的遺傳物質，在生命活動中起重要作用。核酸的檢測在疾病診斷、環境微生物鑒定、適配體等領域有重要應用。因此，發展核酸的熒光檢測探針意義重大。傳統的核酸熒光探針有EB、YOYO, T0T0、Sybr Green、DAPI及Hoechst染料，用于雙鏈的DNA的檢測，靈敏度很高，但是對于單鏈DNA，特別是短鏈單鏈DNA的檢測效果很差。目前對于單鏈DNA還沒有足夠靈敏的熒光染料以取代熒光標記或同位素標記的DNA探針，特別是在核酸電泳的應用中，熒光標記或者同位素標記的核酸探針成本高，操作復雜。另外，傳統的核酸染料中，以EB為代表的嵌入劑具有強的致癌性；而低致癌性的染料，如Sybr系列等，其合成過程復雜，導致價格昂貴，其應用遠不及EB廣泛。因而發展低毒的、低成本、合成簡單的單鏈核酸的熒光染料意義重大。
【發明內容】
[0003]本發明要解決的問題在于針對現有技術的不足，提供一類高靈敏度的核酸探針，具體方法是將胺基引入到四苯乙烯分子上；制備了一系列胺類分子。這類分子的合成簡單，其檢測核酸分子的原理是:中心核四苯乙烯為熒光分子，其在溶液中游離時，分子內的單鍵自由旋轉導致激發態能量以熱的方式消耗，因而不發光；而將胺基共價連接到四苯乙烯上后，不論胺基連接在什么位置，不論連接的胺基數量是多少，胺基都可以與核酸結合，從而使四苯乙烯分子錨定在核酸上，限制分子內的旋轉，因而激發態以輻射方式躍遷到基態，即熒光增強。由于胺基質子化后，主要以靜電力和氫鍵的協同作用結合核酸上的磷酸，也可以以氫鍵結合核酸上的堿基，因而這類化合物無論對單鏈還是雙鏈核酸都有高靈敏度的檢測效果。
[0004]本發明所提供的核酸熒光探針為胺類化合物，這類化合物的結構通式如下所示:
【權利要求】
1.一類含有胺基的化合物，結構式如下:
2.如權利要求1所述的化合物，其結構是:
3.權利要求1所述的化合物形成的銨鹽。
4.如權利要求3所述的銨鹽，其結構是:
5.權利要求1所述的化合物的制備方法為:以含一Br的四苯乙烯化合物為原料，先與疊氮化鈉反應生成疊氮化物，再用三苯基膦還原得伯胺產物。
6.權利要求1所述的化合物的制備方法為:以含一Br的四苯乙烯化合物為原料，與伯胺或仲胺原料在堿性條件下回流反應即得到相應的腫胺或叔胺產物。
7.權利要求1所述的化合物用作核酸的檢測試劑。
8.權利要求1所述的化合物用作核酸凝膠電泳或細胞成像的顯色劑。
【文檔編號】C07C217/18GK103772203SQ201410033466
【公開日】2014年5月7日 申請日期:2014年1月24日 優先權日:2014年1月24日
【發明者】楊楚羅, 朱策澤, 徐黎 申請人:武漢大學