N,n-雙取代苯并氮雜環-2-胺類化合物及其用途
【專利摘要】本發明主要涉及N,N-雙取代苯并氮雜環-2-胺類化合物及其用途。所述N,N-雙取代苯并氮雜環-2-胺類化合物為式I所示化合物，或其與可藥用酸或堿所成的鹽。本發明所提供的化合物對與心腦血管疾病密切相關的RhoA蛋白酶表現出較強的抑制活性。這表明本發明化合物有望開發成RhoA蛋白酶小分子抑制劑類心腦血管疾病治療藥物。
【專利說明】N, N-雙取代苯并氮雜環-2-胺類化合物及其用途
【技術領域】
[0001]本發明涉及藥物化學和藥物治療學領域，更具體涉及N，N-雙取代苯并氮雜環-2-胺類化合物及其制備方法和用途。
【背景技術】
[0002]心腦血管疾病是一種嚴重威脅人類，特別是50歲以上中老年人健康的常見病，在我國尤為突出。我國心腦血管疾病的總發病率和死亡率已經接近或超過許多發達國家，而且仍呈上升趨勢。統計資料表明，我國城市人口心腦血管疾病病死率為200/10萬，農村為142/10萬,分別占死亡構成的37%和28%,居死亡原因的首位。因此,心腦血管疾病已經是危害人類特別是老年人生命的第一大殺手。
[0003]據目前研究，血管痙攣是心腦血管疾病重要的病理生理機制之一。開發針對新靶標和具有新作用機制的解除血管痙攣的治療藥物具有重要的市場前景和科學意義。血管痙攣的主要途徑是通過細胞內鈣濃度升高導致細胞收縮，臨床上通過抑制該途徑可達到降血壓、抑制血管痙攣等作用，該類藥物即為被廣泛應用的鈣通道阻滯劑。上世紀九十年代初研究發現細胞內尚存在不依賴于細胞內鈣濃度變化的Rho (主要是RhoA) /ROCK介導途徑，在細胞收縮中也起著重要作用。鈣依賴的細胞收縮是通過鈣離子內流后，促使鈣調素(CaM)途徑激活肌球蛋白輕鏈激酶(MLCK)，導致MLC磷酸化，繼而肌球蛋白與肌動蛋白結合，從而調節細胞骨架，引起血管平滑肌細胞收縮。而RhoA/ROCK則一方面通過抑制肌球蛋白輕鏈磷酸酶(MLCP)活性，降低了對磷酸化的MLC的去磷酸化作用，間接增加磷酸化MLC (MLC-P)的濃度，另一方面利 用其自身磷酸激酶活性直接磷酸化MLC，雙重上調磷酸化MLC (MLC-P)水平，從而達到調節細胞骨架，引起血管平滑肌細胞收縮的作用。
[0004]Rho家族蛋白質是小G蛋白的Ras超家族成員，是一組具有GTP酶活性的鳥苷酸結合蛋白，于1985年作為Ras同源物被首次克隆出來，包含RhoA、RhoB和RhoC三種異構體，其中RhoA被研究的最廣泛。RhoA含有所有小GTP結合蛋白中高度保守的GDP/GTP結合區和GTP酶活性區，有兩種可相互轉換的構像，即與GDP結合的非活化態和與GTP結合的活化態，兩種狀態之間的轉換使其能夠發揮一種類似“分子開關”的作用。這種轉換主要受到三類細胞內蛋白的調節:(1)鳥核苷酸交換因子(guanosine nucleotide exchangefactors, GEFs)，它能促進⑶P/GTP交換反應，激活RhoA蛋白，是RhoA蛋白的正調控因子；
(2)GTP 酶活化蛋白(GTPase - activating proteins,GAPs),它能通過增加 RhoA 內在的 GTP酶活性而使其失活轉為無活性的GDP結合形式，是負調控因子；(3) GDP解離抑制因子(GDPdissociation inhibitors,⑶Is),它能阻抑⑶P從GTP酶上分離，則可穩定RhoA與⑶P的結合，從而使其保持非活性狀態，也是負調控因子。在上述三類蛋白的整體作用下，通過調節RhoA與GTP/⑶P結合的比率，共同調節RhoA的功能。
[0005]RhoA的主要功能是調節肌動蛋白細胞骨架，肌動蛋白細胞骨架在細胞形狀改變、遷移、黏附以及胞質分裂中起重要作用。RhoA分子功能的多樣性與其下游效應分子的多樣性有關，已經發現的RhoA的下游效應分子包括Rho激酶(Rho-associated coiled-coilforming protein serine/threonine kinase, ROCK)、p21 活化激酶(p21_activatedkinase，PAK)、PKN、Citron、PI3K等，這些分子介導了 RhoA的作用。其中ROCK是目前功能研究最為清楚的RhoA下游靶效應分子，屬于絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶家族成員，它以兩種同源性極高的異構體形式存在(Roka/ROCK II和RokP/ROCK I)。近年來研究表明RhoA/ROCK通路在心腦血管疾病中起重要作用，特別是參與了高血壓的發生與發展過程。
[0006]進一步的研究表明，鈣依賴收縮是血管平滑肌細胞收縮的主要觸發因素，而非鈣依賴RhoA/ROCK收縮在血管平滑肌細胞收縮的持久階段更為重要，這直接導致RhoA/ROCK途徑在血管舒縮以及調節血壓的過程中起著重要的作用。通過調控RhoA/ROCK途徑，可改善許多血管疾病的發生及病程，諸如高血壓、肺動脈高壓、動脈粥樣硬化、腦缺血等。
[0007]目前有關RhoA/ROCK調控途徑的藥物開發主要針對的是RhoA下游信號蛋白ROCK(包括ROCK I和ROCK II)，相關抑制劑已有許多文獻報道，當前已有一個此類抑制劑fasudil在包括中國在內的多個國家批準上市，同時還有5個此類抑制劑(INS-117548、K-1152、SNJ-1656、SAR407899和DE-104)正在進行臨床I/II研究，這些臨床候選藥物的適應癥集中在心血管疾病治療、青光眼治療和神經保護等。最初在日本上市的fasudil被用于治療腦血管痙攣，其后的研究表明fasudil對包括心絞痛、高血壓、冠狀動脈痙攣、冠脈再通手術后再狹窄和動脈粥樣硬化在內的心血管疾病均有良好的治療作用。但由于其腦穿透能力較低，因此最近科學家正在研究將其制成脂質體治療蛛網膜下腔出血引發的腦血管痙攣，希望通過定向給藥增加局部藥物濃度，減少不良反應，提高治療效果。
[0008]由于已有的RhoA激酶(ROCK)抑制劑有種種不理想之處，尋找其上游蛋白RhoA抑制劑成為另一種方向，目前僅有的RhoA抑制劑是一類叫做外酶C3轉移酶(exoenzymeC3transferase,C3)的大分子或其衍生物，由于它極差的膜通透性和易于體內降解的缺陷，限制了它的治療用途，Tremblay等人發展的透膜性好的C3融合蛋白BA-210作為神經保護藥正在進行II期臨床研究，Lee等人發展了透膜性好的重組蛋白TAT-C3，用于神經再生治療。這些研究從實驗上支持了 RhoA抑制劑發展成治療藥物的可能。如果我們針對RhoA蛋白的GTP結合域設計一些小分子競爭性抑制劑，可以阻止RhoA活化成RhoA-GTP形式，而只有后者才能與ROCK的RhoA蛋白結合域結合，暴露ROCK的催化活性中心，將ROCK激活，同時發生定向轉位與MLC靠近。因此小分子抑制劑可以起到類似于大分子C3相同的RhoA抑制效果，同時小分子抑制劑可以克服大分子成藥性差的缺陷。發明人已經發現了一類取代苯并氮雜環類衍生物作為小分子RhoA抑制劑，本發明人已就該類化合物申請專利(專利授權號:ZL201010244757.7)，本申請的化合物為苯并氮雜環類化合物的新穎結構衍生物，結構類型突破了苯并氮雜環類化合物，而且RhoA抑制活性也有一定的提高。
[0009]綜上所述,針對RhoA/ROCK通路設計治療心血管疾病藥物是可行的，考慮到目前國際國內有關直接針對RhoA蛋白GTP結合域的抑制劑研究報道很少的狀況。基于RhoA-GTP結合域設計心血管疾病治療藥物具有重要的現實意義。
【發明內容】
[0010]本發明所涉及的化合物具有全新的N，N-雙取代苯并氮雜環-2-胺類結構，對RhoA蛋白酶抑制活性的測試結果顯示，本發明部分化合物對RhoA有較強的抑制活性，為今后進一步設計開發新型RhoA蛋白酶小分子抑制劑類心腦血管疾病治療藥物奠定了結構基礎。[0011]本發明的一個目的是，提供一種N，N-雙取代苯并氮雜環-2-胺類化合物。所述的N, N-雙取代苯并氮雜環-2-胺類化合物為式I所示化合物，或其在藥學上可接受的(與可藥
用酸或堿所成的)鹽。
[0012]
【權利要求】
1.一種N，N-雙取代苯并氮雜環-2-胺類化合物，其特征在于，所述的N，N-雙取代苯并氮雜環-2-胺類化合物為式I所示化合物，或其在藥學上可接受的鹽；
2.如權利要求1所述的一種N，N-雙取代苯并氮雜環-2-胺類化合物，其特征在于，其中R1為C1~C4直鏈或支鏈的烷基，取代的C1~C4直鏈或支鏈的烷基；Χ為CH或N ;Α為取代的苯基； 其中，所述取代的C1~C4的直鏈或支鏈的烷基的取代基選自:苯基，羥基，羧酸基，酰胺基，環丙基，環戍基，環己基，吡啶基，
3.如權利要求2所述的一種N，N-雙取代苯并氮雜環-2-胺類化合物，其特征在于，其中R1為甲基，乙基，異丙基，正丁基，芐基，由羧酸基、環丙基、環戊基、環己基、羥基、吡啶基或酰胺基取代的甲基，或由羥基、
4.如權利要求2所述的一種N，N-雙取代苯并氮雜環-2-胺類化合物，其特征在于，其中A為取代的苯基； 其中，所述取代的苯基的取代基選自:由羧酸基取代的乙烯基或乙基中一種。
5.如權利要求4所述的一種N，N-雙取代苯并氮雜環-2-胺類化合物，其特征在于，其中 A 為
6.如權利要求1所述的一種N，N-雙取代苯并氮雜環-2-胺類化合物，其特征在于，其中R1為H ;Χ為CH或N ;Α為取代的C6~Cltl芳環基；所述取代的C6~Cltl芳環基的取代基選自:羧酸基，三唑基，或由磺酸基、
7.如權利要求6所述的一種N，N-雙取代苯并氮雜環-2-胺類化合物，其特征在于，其中A為取代的苯基或萘基； 所述的取代的苯基或萘基的取代基選自:羧酸基，三唑基，或由磺酸基、
8.如權利要求7所述的一種N，N-雙取代苯并氮雜環-2-胺類化合物，其特征在于，其中A為
9.一種N，N-雙取代苯并氮雜環-2-胺類化合物，其特征在于，所述的N，N-雙取代苯并氮雜環-2-胺類化合物是:3-{3-[N-乙基-N-(喹喔啉-2-基)氨基]苯基}丙酸；(E) -3- {3- [N-乙基-N-(喹喔啉-2-基)氨基]苯基}丙烯酸；(E) -3- {3- [N-乙基-N-(喹啉-2-基)氨基]苯基}丙烯酸；3-{3-[N-乙基-N-(喹啉-2-基)氨基]苯基}丙酸；N-[3-(4-H-l，2，4-三唑-3-基)苯基]喹喔啉-2-胺；N-[3-(4-H-1, 2，4-三唑-3-基)苯基]喹啉-2-胺；6_ [N-(喹喔啉-2-基)氨基]萘-2-甲酸；6_ [N-(喹啉-2-基)氨基]萘-2-甲酸；(E)-3-{3-[N-羧甲基-N-(喹啉-2-基)氨基]苯基}丙烯酸；(E)-3-{3-[N-羧甲基-N-(喹啉-2-基)氨基]苯基}丙酸；(E)-3-{3-[N-羧甲基-N-(喹喔啉-2-基)氨基]苯基}丙烯酸；(E)-3-{3-[N-羧甲基-N-(喹喔啉-2-基)氨基]苯基}丙酸；(E)-N-羥基-3-{3-[N’ _(喹喔啉-2-基)氨基]苯基}丙烯酰胺；(E)-N-羥基-3-{3-[N’ -(喹喔啉-2-基)氨基]苯基}丙酰胺；(E)-N-羥基-3-{3-[N’ -(喹啉-2-基)氨基]苯基}丙烯酰胺；(E)-N-羥基-3-{3-[N’-(喹啉-2-基)氨基]苯基}丙酰胺；2-[3-N-(喹喔啉-2-基)氨基]苯基乙磺酸；2- [3-N-(喹啉-2-基)氨基]苯基乙磺酸；(E) -3- {3- [N-異丙基-N-(喹啉-2-基)氨基]苯基}丙烯酸；(E)-3-{3-[N-芐基-N-(喹啉-2-基)氨基]苯基}丙烯酸；(E)-3-{3-[N-氨甲酰甲基-N-(喹啉-2-基)氨基]苯基}丙烯酸；(E)-3-{3-[N-甲基-N-(喹啉-2-基)氨基]苯基}丙烯酸；(E)-3-{3-[N-(2-羥乙基)-N-(喹啉-2-基)氨基]苯基}丙烯酸；(E)-3-{3-[N-(2-叔丁基二甲基硅氧基乙基)-N-(喹啉-2-基)氨基]苯基}丙烯酸；3_ [N-(喹喔啉-2-基)氨基]苯甲氧基磷酸二乙酯；3_[N-(喹啉-2-基)氨基]苯甲氧基磷酸二乙酯；(E)-3-{3-[N-(3-羥丙基)-N-(喹啉-2-基)氨基]苯基}丙烯酸；(E) -3- {3- [N- (2-(哌啶-1-基)乙基)-N-(喹啉-2-基)氨基]苯基}丙烯酸；(E)-3-{3-[N-正丙基-N-(喹啉-2-基)氨基]苯基}丙烯酸；(E)-3-{3-[N-正丁基-N-(喹啉-2-基)氨基]苯基}丙烯酸；(E)-3-{3-[N-(環丙基甲基)-N-(喹啉-2-基)氨基]苯基}丙烯酸；(E)-3-{3-[N-(環戊基甲基)-N-(喹啉-2-基)氨基]苯基}丙烯酸；(E)-3-{3-[N-(環己基甲基)-N-(喹啉-2-基)氨基]苯基}丙烯酸或(E)-3-{3-[N-((吡啶-2-基)甲基)-N-(喹啉-2-基)氨基]苯基}丙烯酸。
10.如權利要求1~9中任意一項所述的N，N-雙取代苯并氮雜環-2-胺類化合物或其藥學上可接受的 鹽在制備預防或治療RhoA介導的疾病的藥物中的應用。
【文檔編號】C07D241/44GK103787992SQ201410027159
【公開日】2014年5月14日 申請日期:2014年1月21日 優先權日:2014年1月21日
【發明者】李劍, 繆麗燕, 李秀江, 馬晟, 閆兆威 申請人:華東理工大學, 蘇州大學附屬第一醫院