位點特異性標記方法及由此產生的分子的制作方法
【專利摘要】本發明公開內容提供了位點特異地標記抗體的方法，該方法使用具有4’-磷酸泛酰巰基乙胺基轉移酶活性的蛋白，所述蛋白催化并入目標抗體的一個或多個特異性位點的肽序列(“肽標簽”)的翻譯后修飾。酶促標記使得能夠進行并入抗體的肽標簽內特定絲氨酸殘基的定量和不可逆的共價修飾，從而生產所需的抗體綴合物。
【專利說明】位點特異性標記方法及由此產生的分子
[0001] 序列表
[0002] 本申請包含已通過EFS-Web提交的ASCII格式的序列表，其在此通過引用整體 并入本文。所述ASCII副本創建于2013年5月29日，命名為PAT055142_SL_2. txt，大小 1，800, 691 字節。
【技術領域】
[0003] 本發明涉及位點特異性標記方法以及由此產生的分子。
【背景技術】
[0004] 綴合已被廣泛用于優化生物活性蛋白的性質，如蛋白療法、抗體藥物綴合物 (ADC)、疫苗、組織選擇性靶向載體、分子診斷、蛋白核酸綴合物。傳統的綴合方法是利用基 于賴氨酸的共價連接，由于蛋白表面賴氨酸的豐度使其很難實現均質性。
[0005] 蛋白的位點特異性標記可以通過翻譯后的酶促反應來實現，例如，使用人O6-烷基 鳥嘌呤-DNA烷基轉移酶（AGT)，生物素連接酶，轉谷氨酰胺酶，轉肽酶，角質酶，或4' -磷酸 泛酰巰基乙胺基轉移酶將標簽共價附著至蛋白。
[0006] 對于使用人O6-烷基鳥嘌呤-DNA烷基轉移酶的翻譯后酶促反應，AGT融合 到感興趣的靶蛋白，隨后加入標記的〇 6-芐基鳥嘌呤（AGT的自殺底物）（Keppler等 人，Nat. BiotechnoL 21:86-89, 2003)。這種方法是稱為SNAP-tag?的技術的基礎， 它米用了 180 個氨基酸的標簽（Tirat 等人，International Journal of Biological Macromolecules, 39:66 - 76, 2006)。然而，使用這種方法的蛋白的標記只發生在C-或N-末 端。
[0007] 對于生物素連接，酶生物素蛋白連接酶（BPL)連接生物素與某些羧化酶或脫羧 酶的生物素運載體結構域。BPL在兩個步驟中催化腺苷_5'_三磷酸（ATP)-依賴性反應， 在生物素羧基和位于高保守的Ala-Met-Lys-MeUSEQ ID N0:1017)識別基序中的特定 賴氨酸殘基的ε-氨基之間翻譯后形成酰胺鍵，所述高保守的Ala-Met-Lys-MeUSEQ ID NO: 1017)識別基序位于生物素運載體結構域內（Tirat等人，International Journal of Biological Macromolecules, 39:66 - 76, 2006)。這種方法可被用來創建在C末端，N末端 或甚至靶蛋白內的融合標簽，且是稱為BioEase?(72個氨基酸標簽）和AviTag?(利用生物 素連接酶，BirA和15個殘基的受體肽標簽（AP))的技術的基礎。
[0008] 轉谷氨酰胺酶催化谷氨酰胺（Gln)和賴氨酸（Lys)側鏈之間穩定的異構肽鍵形 成，伴隨氨的丟失，并且已被用于在體外用熒光團標記蛋白中的谷氨酰胺側鏈（Sato等 人，Biochemistry 35:13072-13080,1996)。此外，細菌和人組織轉谷氨酰胺酶（BTGase 和TG2)也已被用于通過位于IgG重鏈中的Lys或Gln側鏈催化不同的IgG的翻譯后 修飾（Mindt 等人，Bioconjugate Chem. 19:271 - 278, 2008 ;Jeger 等人，Angew. Chem. Int. 49:9995-9997, 2010)。
[0009] 轉肽酶已用于蛋白的C末端和N末端位點特異性修飾，其中轉肽酶A催化轉肽反 應（Antos 等人，JACS, 131:10800-10801，2009)。
[0010] 角質酶是22kDa的絲氨酸酯酶，其與抗水解的膦酸酯配體形成位點特異性共 價加合物。角質酶已被用于抗體C末端和N末端的位點特異性修飾，隨后固定到表面 上（Kwon 等人，Anal. Chem. 76:5713-5720, 2004 ;Hodnel 和等人，Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. ,99:5048-5052,2002)。
[0011] 酰基運載體蛋白（ACP)和肽基運載體蛋白（PCP)的4'-磷酸泛酰巰基乙胺化參 與重要的翻譯后修飾，該翻譯后修飾是分別由聚酮合酶（PKS)和非核糖體肽合成酶（NRPS) 激活代謝物合成所需要的（Fischbach 等人，Chem. Rev. 106(8) :3468-3496, 2006)。ACP 和 PCP的apo至holo的轉換由4' -磷酸泛酰巰基乙胺（ppan)轉移酶催化，其將輔酶A(CoA) 的4'-磷酸-泛酰巰基乙胺基部分附著至蛋白質構域的不變的絲氨酸殘基（Lambalot等 人，Chem. Biol. 3(11) :923-936, 1996)。由于運載體蛋白可比較的小尺寸以及4'-磷酸 泛酰巰基乙胺基轉移酶接受功能化的CoA類似物作為底物的能力，研究人員利用運載體 蛋白作為融合標簽用多種小分子探針來標記革巴蛋白（例如，參見La Clair等人，Chem. Biol. 11 (2) : 195-201，2004 ;Yin 等人，J. Am. Chem. Soc. 126 (25) :7754-7755, 2004)。在 嘗試進一步減小運載體蛋白標簽尺寸中，Walsh和同事使用噬菌體展示來鑒定8至 12個殘基的肽，其作為有效的底物被細菌4'-磷酸泛酰巰基乙胺基轉移酶Sfp (先前 鑒定為負責表面活性素生產的基因座）和ACPS (Yin等人，Proc. Natl. Acad. Sci. USA 102(44):15815-15820, 2005 ;Zhou 等人，ACS Chem. Biol. 2(5):337-346, 2007 ;Zhou 等 人，J. Am. Chem. Soc. 130 (30) : 9925-9930, 2008)識別。
[0012] 抗體藥物綴合物（ADC)已用于癌癥治療中細胞毒性劑的局部遞送（例如參見， Lambert, Curr. Opinion In Pharmacology 5:543-549,2005)。ADC 允許藥物部分的革巴向 遞送，其中可以實現具有最小毒性的最大功效。隨著越來越多的ADC顯示有希望的臨床結 果，對開發穩定的工程化抗體的需要增加了，該工程化抗體提供能夠綴合，特別地位點特異 性綴合至多種活性劑的反應基團，從而可以以限定的藥物比抗體比產生均質化的免疫綴合 物，用于癌癥治療中。
【發明內容】
[0013] 本發明提供了修飾的抗體或其片段，其包含至少一種肽標簽，所述肽標簽是 4'_磷酸泛酰巰基乙胺基轉移酶的底物，且位于所述抗體或抗體片段的結構環內。本發明進 一步提供了包含這種修飾的抗體或抗體片段，以及末端基團的免疫綴合物。本發明還提供 了制備這種修飾的抗體，抗體片段和免疫綴合物的方法，以及使用這類組合物的方法。
[0014] 在一些實施方案中，本發明提供了修飾的抗體或其片段，其包含至少一種肽標簽， 所述肽標簽是4' -磷酸泛酰巰基乙胺基轉移酶的底物，且位于所述抗體或抗體片段的結構 環內，并且其中4'-磷酸泛酰巰基乙胺基轉移酶是Sfp，AcpS,海棲熱袍菌（T. maritime) PPTase，人PPTase或保留4' -磷酸泛酰巰基乙胺基轉移酶活性的其突變體或同源物 形式。在某些實施方案中，肽標簽選自⑶SLSWLLRLLN(SEQ ID N0:1),⑶SLSWL(SEQ ID N0:2)，ffl)SLSWLVRCLN(SEQIDN0:3)，GDSLSWLLRCLN(SEQIDN0:4)，（；DSLSWLVRLLN(SEQ ID NO :5), GDSLSffLLRSLN(SEQ ID NO :6),GSQDVLDSLEFIASKLA(SEQ ID N0:7)，VLDSLEFIASKLA(SEQ ID N0:8)，DSLEFIASKLA(SEQ ID N0:9)，ffl)SLDMLEWSLM(SEQ ID N0:10)，⑶SLDMLEWSL(SEQ ID N0:11)，GDSLDMLEWS(SEQ ID N0:12)，GDSLDMLEW(SEQ ID NO:13), DSLDMLEff(SEQ ID NO:14), GDSLDM(SEQ ID NO:15), L〇SVRMMALAAR(SEQ ID NO:16), LDSLDMLEffSLR(SEQ ID NO:17), DSLEFIASKL(SEQ ID NO:18), DSLEFIASK(SEQ ID NO:19),DVLDSLEFI(SEQ ID N0:20),VLDSLEFIAS(SEQ ID NO:21)和 DSLDMLEWSL(SEQ ID NO: 1132)。本發明還提供了包含這種修飾的抗體或其片段的免疫綴合物。
[0015] 在某些實施方案，本發明提供了修飾的抗體或其片段，其包含至少一種肽標簽，所 述肽標簽是4' -磷酸泛酰巰基乙胺基轉移酶的底物，且位于抗體或其片段的VH、VL、CH1、 CH2、CH3或Q區域的結構環內。在某些實施方案中，肽標簽插入列于表1的任何兩個氨基 酸之間。在某些實施方案中，本發明提供了修飾的抗體或抗體片段，其包含至少一種肽標 簽，所述肽標簽是4' -磷酸泛酰巰基乙胺基轉移酶的底物，且位于抗體或其片段的CHl區的 結構環內。本發明進一步提供了包含這種修飾的抗體或其片段的免疫綴合物。
[0016] 在某些實施方案中，肽標簽被插入親本抗體或其片段的Vh或 '結構域的氨基酸殘 基2和3之間，或Vh結構域的氨基酸殘基63和64之間，或Vh結構域的氨基酸殘基65和66 之間，或CHl結構域的138和139之間，或CHl結構域的197和198之間，或CH3結構域的 359和360之間，或CH3結構域的388和389之間，或CH3結構域的447之后。本發明進一 步提供包含這種修飾的抗體或其片段的免疫綴合物。
[0017] 在某些實施方案中，肽標簽被插入親本抗體或其片段的Vh或 '結構域的氨基酸殘 基2和3中之間，或輕鏈的氨基酸殘基110和111之間，或CHl結構域的119和120之間， 或120和121之間，或135和136之間，或136和137之間，或138和139之間，或162 和163之間，或164和165之間，或165和166之間，或194和195之間，或195和196 之間，或CH3結構域的388和389之間，或445和446之間，或446和447之間。本發明 進一步提供包含這種修飾的抗體或其片段的免疫綴合物。
[0018] 在某些實施方案中，肽標簽被插入親本抗體或其片段的輕鏈的氨基酸殘基110和 111之間，或CHl結構域的119和120之間，或120和121之間，或135和136之間，或 136和137之間，或138和139之間，或162和163之間，或164和165之間，或165和 166之間，或194和195之間，或195和196之間，或CH3結構域的388和389之間。本發 明進一步提供包含這種修飾的抗體或其片段的免疫綴合物。
[0019] 在某些實施方案中，肽標簽移植于Vh結構域的氨基酸殘基62至64之間或62至 65之間，或CHl結構域的氨基酸殘基133和138之間，或CHl結構域的189和195之間，或 CHl結構域的190和197之間。本發明進一步提供包含這種修飾的抗體或其片段的免疫綴 合物。
[0020] 在某些實施方案中，本發明提供了修飾的抗體或其片段，其包含SEQ ID NO:103, SEQ ID NO:109, SEQ ID NO:113, SEQ ID NO:121, SEQ ID NO:122, SEQ ID NO: 127, SEQ ID NO: 129, SEQ ID NO: 130, SEQ ID NO: 131,和 / 或 SEQ ID NO: 141。本發明 進一步提供包含這種修飾的抗體或其片段的免疫綴合物。
[0021] 在某些實施方案中，本發明提供了修飾的抗體或其片段，其包含SEQ ID NO:26, SEQ ID NO:27, SEQ ID NO:32, SEQ ID NO:63, SEQ ID NO:94, SEQ ID NO:95, SEQ ID N0:96, SEQ ID NO:126, SEQ ID NO:127, SEQ ID NO:129, SEQ ID NO:130, SEQ ID NO:131, SEQ ID NO:132, SEQ ID NO:139, SEQ ID NO:149, SEQ ID NO:151, SEQ ID NO:152, SEQ ID NO:157, SEQ ID NO:158, SEQ ID NO:160,SEQ ID NO:166,SEQ ID NO:168,SEQ ID NO:169, SEQ ID NO:178, SEQ ID NO:179, SEQ ID NO:248,SEQ ID NO:250, SEQ ID NO:251, SEQ ID NO:256,SEQ ID NO:257,SEQ ID NO:259, SEQ ID NO:265, SEQ ID N0:267, SEQ ID N0:268, SEQ ID N0:277,SEQ ID N0:278, SEQ ID N0:348, SEQ ID NO:349, SEQ ID NO:356, SEQ ID NO:358,SEQ ID NO:359,SEQ ID NO:364,SEQ ID N0:365, SEQ ID N0:367, SEQ ID N0:371, SEQ ID N0:373, SEQ ID N0:374, SEQ ID NO:380, SEQ ID NO:381, SEQ ID NO:384, SEQ ID NO:386, SEQ ID NO:387,或 SEQ ID NO: 388。本發明進一步提供包含這種修飾的抗體或其片段的免疫綴合物。
[0022] 在某些實施方案中，本發明提供了修飾的抗體或其片段，其包含SEQ ID NO:32,SEQ ID NO:63,SEQ ID NO:127,SEQ ID NO:129,SEQ ID NO:132,SEQ ID NO:151，SEQ ID NO:152,SEQ ID NO:157,SEQ ID NO:158,SEQ ID NO:160,SEQ ID NO:166,SEQ ID NO:168, SEQ ID NO:169, SEQ ID NO:178, SEQ ID NO:179, SEQ ID NO:250,SEQ ID N0:251,SEQ ID N0:256, SEQ ID N0:257, SEQ ID N0:259, SEQ ID N0:265, SEQ ID N0:267, SEQ ID N0:268, SEQ ID N0:277, SEQ ID N0:278, SEQ ID N0:358, SEQ ID NO:359, SEQ ID NO:364, SEQ ID NO:365, SEQ ID NO:367, SEQ ID NO:371, SEQ ID NO:373, SEQ ID NO:374, SEQ ID NO:380, SEQ ID NO:381,或 SEQ ID NO:384。本發明進一 步提供包含這種修飾的抗體或其片段的免疫綴合物。
[0023] 在某些實施方案中，本發明提供了修飾的抗體或其片段，其包括至少 一種肽標簽，所述肽標簽是Sfp的底物，且位于所述抗體或其片段的結構環 內，并且其中肽標簽是⑶SLSWLLRLLN(SEQ ID N0:1),⑶SLSWLVRCLN(SEQ ID N0:3)，ffl)SLSWLLRCLN(SEQIDN0:4)，（；DSLSWLVRLLN(SEQIDN0:5)，a)SLSWLLRSLN(SEQ ID NO :6) , GSQDVLDSLEFIASKLA (SEQ ID NO :7) , VLDSLEFIASKLA (SEQ ID N0:8)，DSLEFIASKLA(SEQ ID N0:9)，GDSLDMLEWSLM(SEQ ID N0:10)，ffl)SLDMLEWSL(SEQ ID NO:11), GDSLDMLEffS(SEQ ID NO:12), GDSLDMLEff(SEQ ID NO:13), DSLDMLEff(SEQ ID NO:14), LDSLDMLEffSLR(SEQ ID NO:17), DSLEFIASKL(SEQ ID NO:18), DSLEFIASK(SEQ ID N0:19),或DSLEFIAS(SEQ ID N0:1116)。在另一個實施方案中，肽標簽是⑶SLSWLLRLLN(SEQ ID NO:I), GDSLSffL(SEQ ID NO:2), DSLEFIASKLA(SEQ ID NO:9), GDSLDMLEffSLM(SEQ ID NO :10) ,DSLEFIASKL(SEQ ID NO :18) ,DSLEFIASK(SEQ ID NO:19)，或DSLDMLEWSL(SEQ ID NO: 1132)。本發明進一步提供包含這種修飾的抗體或其片段的免疫綴合物。
[0024] 在某些實施方案中，本發明的修飾抗體或抗體片段是選自IgG，IgM，IgE和IgA的 同種型。在一些其他實施方案中，本發明的修飾的抗體或抗體片段是選自IgGl，IgG2，IgG3 和IgG4的IgG亞型。在某些實施方案中，本發明的修飾抗體或抗體片段是人或人源化抗 體或抗體片段。在具體的實施方案中，本發明的修飾的抗體或抗體片段是抗-HER2抗體或 抗-HER2抗體片段。本發明進一步提供了包含這種修飾的抗體或其片段的免疫綴合物。
[0025] 本發明提供編碼本文所描述的修飾的抗體或抗體片段的核酸，以及包含此類核酸 的宿主細胞。
[0026] 本發明提供包含修飾的抗體或其片段，以及末端基團的免疫綴合物，其中修飾的 抗體或抗體片段包含至少一個肽標簽，所述肽標簽是4' -磷酸泛酰巰基乙胺基轉移酶的 底物，且位于抗體或抗體片段的結構環內。在某些實施方案中，修飾的抗體或抗體片段還 包含一個或多個正交綴合位點。在具體的實施方案中，每個正交綴合位點獨立地選自Sfp 4'-磷酸泛酰巰基乙胺基轉移酶的底物，AcpS 4'-磷酸泛酰巰基乙胺基轉移酶的底物，賴 氨酸，半胱氨酸，酪氨酸，組氨酸，甲酰基甘氨酸，非天然氨基酸，吡咯賴氨酸和吡咯啉-羧 基賴氨酸。
[0027] 在另一方面，本發明提供包含修飾的抗體或抗體片段，以及末端基團（TG)的免疫 綴合物，所述末端基團通過具有根據式（I-b)的結構的接頭附著于修飾的抗體或抗體片段 中的肽標簽。
[0028]
【權利要求】
1. 修飾的抗體或其片段，其包含至少一種肽標簽，所述肽標簽是4' -磷酸泛酰巰基乙 胺基轉移酶的底物，且位于所述抗體或其片段的結構環內。
2. 權利要求1的修飾的抗體或其片段，其中所述4'-磷酸泛酰巰基乙胺基轉移酶是 Sfp、AcpS、海棲熱袍菌（T. maritime)PPTase、人PPTase或保留4' -磷酸泛酰巰基乙胺基轉 移酶活性的其突變體或同源物形式。
3. 權利要求1或權利要求2的修飾的抗體或其片段，其中肽標簽選自由以下組成的 組： ⑶SLSWLLRLLN(SEQ ID N0:1)， ⑶SLSWL(SEQ ID NO:2)， ⑶SLSWLVRCLN(SEQ ID N0:3)， ⑶SLSWLLRCLN(SEQ ID N0:4)， ⑶SLSWLVRLLN(SEQ ID N0:5)， ⑶SLSWLLRSLN(SEQ ID N0:6)， GSQDVLDSLEFIASKLA(SEQ ID NO :7), VLDSLEFIASKLA(SEQ ID NO :8), DSLEFIASKLA(SEQ ID NO :9), ⑶SLDMLEWSLM(SEQ ID N0:10)， ⑶SLDMLEWSL(SEQ ID N0:11)， ⑶SLDMLEWS(SEQ ID N0:12)， ⑶SLDMLEW(SEQ ID NO:13)， DSLDMLEff(SEQ ID NO:14), ⑶SLDM(SEQ ID NO:15)， LDSVRMMALAAR(SEQ ID NO:16), LDSLDMLEffSLR(SEQ ID NO:17), DSLEFIASKL(SEQ ID NO:18), DSLEFIASK(SEQ ID NO:19), DVLDSLEFI(SEQ ID NO :20), VLDSLEFIAS(SEQIDN0:21)JP DSLDMLEWSL(SEQ ID N0:1132)。
4. 權利要求1-3中任一項的修飾的抗體或其片段，其中肽標簽位于抗體或其片段的 VH、VL、CH1、CH2、CH3或Q區的結構環內。
5. 權利要求1-4中任一項的修飾的抗體或其片段，其中所述肽標簽位于抗體或其片段 的CHl區的結構環內。
6. 權利要求1-4中任一項的修飾的抗體或其片段，其中所述肽標簽插入列于表1中的 任何兩個氨基酸之間。
7. 權利要求1-4中任一項的修飾的抗體或其片段，其中肽標簽插入親本抗體或其片段 的VH或VL結構域的氨基酸殘基2和3之間，或輕鏈的氨基酸殘基110和111之間，或CHl 結構域的119和120之間，或120和121之間，或135和136之間，或136和137之間， 或138和139之間，或162和163之間，或164和165之間，或165和166之間，或194 和195之間，或195和196之間，或CH3結構域的388和389之間，或445和446之間， 或446和447之間。
8. 權利要求1-4中任一項的修飾的抗體或其片段，其中肽標簽插入親本抗體或其片段 的輕鏈的氨基酸殘基110和111之間，或CHl結構域的119和120之間，或120和121之 間，或135和136之間，或136和137之間，或138和139之間，或162和163之間，或 164和165之間，或165和166之間，或194和195之間，或195和196之間，或CH3結構 域的388和389之間。
9. 權利要求1-4中任一項的修飾的抗體或其片段，其中肽標簽移植于Vh結構域的氨基 酸殘基62至64之間或62至65之間，或CHl結構域的氨基酸殘基133和138之間，或CHl 結構域的189和195之間，或CHl結構域的190和197之間。
10. 權利要求1-4中任一項的修飾的抗體或其片段，其中所述抗體包含SEQ ID NO:26, SEQ ID NO:27, SEQ ID NO:32, SEQ ID NO:63, SEQ ID NO:94, SEQ ID NO:95, SEQ ID NO:96, SEQ ID NO:126, SEQ ID NO:127, SEQ ID NO:129, SEQ ID NO:130, SEQ ID NO:131, SEQ ID NO:132, SEQ ID NO:139, SEQ ID NO:149, SEQ ID NO:151, SEQ ID NO:152, SEQ ID NO:157, SEQ ID NO:158, SEQ ID NO:160, SEQ ID NO:166, SEQ ID NO:168, SEQ ID NO:169,SEQ ID NO:178,SEQ ID NO:179, SEQ ID NO:248,SEQ ID NO:250,SEQ ID N0:251,SEQ ID N0:256, SEQ ID N0:257,SEQ ID N0:259, SEQ ID N0:265, SEQ ID N0:267, SEQ ID N0:268, SEQ ID N0:277, SEQ ID N0:278,SEQ ID N0:348, SEQ ID N0:349, SEQ ID N0:356,SEQ ID N0:358, SEQ ID N0:359, SEQ ID N0:364, SEQ ID N0:365, SEQ ID N0:367, SEQ ID N0:371,SEQ ID N0:373, SEQ ID N0:374, SEQ ID NO:380, SEQ ID NO:381, SEQ ID NO:384, SEQ ID NO:386, SEQ ID NO:387,或 SEQ ID NO:388。
11. 權利要求1-4中任一項的修飾的抗體或其片段，其中所述抗體包含SEQ ID NO:32,SB9 ID NO:63,SEQ ID NO:127,SEQ ID NO:129,SEQ ID NO:132,SEQ ID NO:151，SEQ ID NO:152, SEQ ID NO:157, SEQ ID NO:158, SEQ ID NO:160, SEQ ID NO:166, SEQ ID NO:168, SEQ ID NO:169, SEQ ID NO:178, SEQ ID NO:179, SEQ ID NO:250, SEQ ID NO:251, SEQ ID NO:256, SEQ ID NO:257, SEQ ID NO:259,SEQ ID NO:265, SEQ ID N0:267, SEQ ID N0:268,SEQ ID N0:277,SEQ ID N0:278, SEQ ID N0:358, SEQ ID NO:359, SEQ ID NO:364, SEQ ID NO:365,SEQ ID NO:367, SEQ ID NO:371, SEQ ID N0:373,SEQ ID N0:374,SEQ ID N0:380,SEQ ID N0:381,或 SEQ ID N0:384。
12. 權利要求1-11中任一項的修飾的抗體或其片段，其中具有4'-磷酸泛酰巰基乙胺 基轉移酶活性的酶是Sfp，并且肽標簽是⑶SLSWLLRLLN(SEQ ID NO: 1)，⑶SLSWLVRCLN(SEQ ID N0:3),⑶SLSWLLRCLN(SEQ ID N0:4),⑶SLSWLVRLLN(SEQ ID N0:5),⑶SLSWLLRSLN(SEQ ID NO :6) , GSQDVLDSLEFIASKLA (SEQ ID NO : 7) , VLDSLEFIASKLA(SEQ ID N0:8)，DSLEFIASKLA(SEQIDN0:9)，ffl)SLDMLEWSLM(SEQIDN0:10)，（；DSLDMLEWSL(SEQ ID NO:11), GDSLDMLEffS(SEQ ID NO:12), GDSLDMLEff(SEQ ID NO:13), DSLDMLEff(SEQ ID NO:14), LDSLDMLEffSLR(SEQ ID NO:17), DSLEFIASKL(SEQ ID NO:18), DSLEFIASK(SEQ ID N0:19),DSLEFIAS(SEQ ID N0:1116),或DSLDMLEWSL(SEQ ID N0:1132)。
13. 權利要求1-12中任一項的修飾的抗體或其片段，其中具有4' -磷酸泛酰巰基乙 胺基轉移酶活性的酶是3邙，并且肽標簽是0^1^11^1^1^(3￡〇10勵：1)，0)31^'^(3￡〇10 N0:2)，DSLEFIASKLA(SEQIDN0:9)，ffl)SLDMLEWSLM(SEQIDN0:10)，DSLEFIASKL(SEQID N0:18),或DSLEFIASK(SEQ ID N0:19)。
14. 權利要求1-11中任一項的修飾的抗體或其片段，其中具有4'-磷酸泛酰巰基乙胺 基轉移酶活性的酶是AcpS，并且肽標簽是⑶SLDMLEWSLM(SEQ ID NO: 10)，⑶SLDMLEWSL(SEQ ID N0:11)，GDSLDMLEWS(SEQ ID N0:12)，⑶SLDMLEW(SEQ ID N0:13)，DSLDMLEW(SEQ ID N0:14)，GDSLDM(SEQ ID N0:15)，LDSLDMLEWSLR(SEQ ID N0:17),或 DSLDMLEWSL(SEQ ID NO:1132)。
15. 權利要求1-14中任一項的修飾的抗體或其片段，其中抗體或其片段是選自IgG， IgM，IgE和IgA的同種型。
16. 權利要求1-15中任一項的修飾的抗體或其片段，其中抗體或其片段是選自IgGl， IgG2, IgG3 和 IgG4 的 IgG 的亞型。
17. 權利要求1-16中任一項的修飾的抗體或其片段，其中抗體或其片段是人或人源化 的抗體或其片段。
18. 權利要求17的修飾的抗體或其片段，其中抗體或其片段是抗HER2抗體或抗HER2 抗體片段。
19. 免疫綴合物，其包含權利要求1-18中任一項的修飾的抗體或片段，以及末端基團。
20. 權利要求19的免疫綴合物，其中所述末端基團通過具有根據式（I-b)的結構的接 頭附著于修飾的抗體或抗體片段：
其中： L1是鍵、非酶促可切割的接頭、非可切割的接頭；酶促可切割的接頭、光穩定的接頭或 光可切割的接頭； L2是鍵、非酶促可切割的接頭，非可切割的接頭；酶促可切割的接頭、光穩定的接頭或 光可切割的接頭； L3是鍵、非酶促可切割的接頭、非可切割的接頭；酶促可切割的接頭、光穩定的接頭或 光可切割的接頭； L4是鍵、非酶促可切割的接頭、非可切割的接頭；酶促可切割的接頭、光穩定的接頭、光 可切割的接頭或自消間隔子， *表示在此處4' -磷酸泛酰巰基乙胺基部分附著至肽標簽， 并且其中末端基團是藥物部分，親和探針，螯合劑，光譜探針，放射性探針，成像試劑， 脂質分子，聚乙二醇，聚合物，納米顆粒，量子點，脂質體，PLGA顆粒，多糖，乙酰基，或表面。
21. 權利要求20的免疫綴合物，其中 L1 是-A1X2-或-X2-; L2 是鍵，-A2-,或-A2X2-;
A1 是-C ( = 0) NH-，-NHC ( = 0) -，-C ( = 0) NH (CH2) n-，-C ( = 0) NH (C (R4) 2) n-，- (0 (CH2) n) m_. _ (0 (C (R4) 2) n) m-, - ((CH2) n0) m-, - (((C (R4) 2) n0) m-, - ((CH2) n0) m (CH2) n~, - (((C (R4) 2) n0)mC (R4) 2) n_, - (CH2) nC ( = 0) NH-, - (C (R4) 2) nC ( = 0) NH-, - (CH2) nNHC ( = 0) -，- (C (R4) 2) nNHC (= 0)-，-NHC( = 0) (CH2) n-，-NHC ( = 0) (C(R4)2) n-，-C ( = 0) NH (CH2)nS-,-C ( = 0) NH (C(R4)2)nS-，-S (CH2) nC ( = 0) NH-，-S (C (R4) 2) nC ( = 0) NH-，-C ( = 0) NH (CH2) nNHC ( = 0) (CH2)n-，-C ( = 0) NH (C(R4)2) nNHC( = 0) (C(R4)2)n-, -C ( = 0) (CH2)n-, -C ( = 0) (C(R4)2)n-, -(CH2)nC( = 0)-，-(C(R4)2) nC( = 0)-，-(CH2)n (O(CH2) n)mNHC( = 0) (CH2)n-,-(C(R4)2)n (O(C(R4)2)n)mNHC( = 0) (C(R4)2) n-，_ (CH2) nNHC( = 0) (CH2) n-，_ (C(R4)2) nNHC( = 0) (C(R4)2)n-,-(CH2)nNH ((CH2) n0) m (CH2) n-, - (C (R4) 2) nNH ((C (R4) 2) n0) m (C (R4) 2) n-, - (0 (CH2) n) mNHC ( = 0) (CH2) n-, 或-(0 (C (R4) 2) n) mNHC ( = 0) (C (R4) 2) n-; A2 是-C ( = 0) NH-, -C ( = 0) NH (CH2) n_, -C ( = 0) NH (C (R4) 2) n_, - (0 (CH2) n) m-，- (0 (C (R4) 2) n) m_> _ ((CH2) n0) m-, - (((c (R4) 2) n0) m-, - ((CH2) n0) m (CH2) (C (R4) 2) n0) mC (R4) 2) n-, - (CH2) nC( = 0)NH-，_ (C(R4)2) nC( = 0) NRS-(CH2) nNHC( = o)-，-(C(R4)2) nNHC( = 0)-，-NHC (= 0)(CH2)n-，-NHC( = OMC(R4)2) n-，-C ( = 0) NH (CH2)nS-,-C ( = 0) NH (C(R4)2)nS-,-S (CH2)nC( = 0)NH-，-S (C(R4)2) nC( = 0)NH-，-(CH2)nS-,-(C(R4)2) nS-,-S (CH2)n-,-S (C(R4)2)n-，- (CH2) nNH-，- (C (R4) 2) nNH-，-C ( = 0) NH (CH2) nNHC ( = 0) (CH2) n-，-C ( = 0) NH (C (R4) 2)nNHC( = 0) (C(R4)2)n-,-C( = 0) (CH2)n-,-C ( = 0) (C (R4) 2) n-, - (CH2) nC ( = 0)- (C (R4) 2)nC( = 0)-，-(CH2)n (O(CH2) n)mNHC( = 0) (CH2) n-，_ (C(R4)2) n (O(C(R4)2) n)mNHC( = 0) (C(R4)2)n-，- (CH2) n (0 (CH2) n) m0C ( = 0) NH (CH2)n-, - (C(R4)2) n (O(C(R4)2) n)m0C( = 0) NH (C(R4)2)n-，- (CH2) nNHC ( = 0) (CH2) n-，- (C (R4) 2) nNHC ( = 0) (C (R4) 2) n-，- (CH2) nNH ((CH2) n0) m (CH2)n-，- (C (R4) 2) nNH ((C (R4) 2) n0) m (C (R4) 2) n-，- (0 (CH2) n) mNHC ( = 0) (CH2) n-，- (0 (C (R4) 2) n)
A3 是-C ( = 0) NH-，-C ( = 0) NH (CH2) n-，-C ( = 0) NH (C (R4) 2) n-，- (0 (CH2) n) m-，- (0 (C (R4) 2) n) m_> _ ((CH2) n0) m-, - (((c (R4) 2) n0) m-, - ((CH2) n0) m (CH2) (C (R4) 2) n0) mC (R4) 2) n-, - (CH2) nC ( = 0) NH-, - (C (R4) 2) nC ( = 0) NH-, - (CH2) nNHC ( = 0) -，- (C (R4) 2) nNHC ( = 0) -，-NHC ( = 0) (CH2) n-，-NHC ( = 0) (C (R4) 2) n-，-C ( = 0) NH (CH2) nS-，-C ( = 0) NH (C (R4) 2) nS-，-S (CH2) nC (= 0)NH-，-S(C(R4)2)nC( = 0)NH-，_ (CH2)nS-, - (C(R4)2) nS-，-S (CH2)n-,-S (C(R4)2) n-，-C (= 0)NH(CH2)nNHC( = 0) (CH2)n-,-C ( = 0) NH (C(R4)2) nNHC( = OMC(R4)2) n-，-C ( = 0) (CH2)n-，-C ( = 0) (C (R4) 2) n-，- (CH2) nC ( = 0) -，- (C (R4) 2) nC ( = 0) -，- (CH2) n (0 (CH2) n) mNHC ( = 0) (CH2) n-，- (C (R4)2)n(0(C(R4)2) n)mNHC( = OMC(R4)2) n-，_ (CH2)n (O(CH2) n)m0C( = 0) NH (CH2)n-，-(C(R4)2)n(0(C(R 4)2)n)m0C( = 0) NH (C(R4)2) n-，_ (CH2)n (O(CH2) n)m0C( = 0)-，-(C(R4)2)n(0(C(R4)2)n)m0C( = 0)-，-(CH2)n (O(CH2) n)mC( = 0)-，-(C(R4)2) n (O(C(R4)2) n)mC(= 0)-，-(CH2) nNHC( = 0) (CH2) n-，_ (C(R4)2) nNHC( = 0) (C(R4)2) n-，-(0 (CH2) n)mNHC( = 0) (CH2)
A4 是-C ( = 0) NH-，-C ( = 0) NH (CH2) n-，-C ( = 0) NH (C (R4) 2) n-，- (0 (CH2) n) m-，- (0 (C (R4) 2) n) m_> _ ((CH2) n0) m-, - (((c (R4) 2) n0) m-, - ((CH2) n0) m (CH2) (C (R4) 2) n0) mC (R4) 2) n-, - (CH2) nC ( = 0) NH-, - (C (R4) 2) nC ( = 0) NH-, - (CH2) nNHC ( = 0) -，- (C (R4) 2) nNHC ( = 0) -，-NHC ( = 0) (CH2) n-，-NHC ( = 0) (C (R4) 2) n-，-C ( = 0) NH (CH2) nS-，-C ( = 0) NH (C (R4) 2) nS-，-S (CH2) nC (= 0)NH-,-S (C(R4)2) nC( = 0)NH-,-C( = 0) NH (CH2) nNHC ( = 0) (CH2)n-,-C ( = 0) NH (C(R4)2)nNHC( = 0) (C(R4)2)n-,-C( = 0) (CH2)n-,-C ( = 0) (C (R4) 2) n-, - (CH2) nC ( = 0)- (C (R4) 2)nC( = 0)-，-(CH2)n (O(CH2) n)mNHC( = 0) (CH2) n-，_ (C(R4)2) n (O(C(R4)2) n)mNHC( = 0) (C(R4)2)n-，- (CH2) nNHC ( = 0) (CH2) n-，- (C (R4) 2) nNHC ( = 0) (C (R4) 2) n-，- (CH2) nNH ((CH2) n0) m (CH2)n-，- (C (R4) 2) nNH((C(R4)2)n0)m (C(R4)2)n-,-(0 (CH2) n)mNHC( = 0) (CH2)n-,或-(0 (C(R4)2)n)mNHC( = 0) (C(R4)2)n-；
NH-和-NHC ( = 0)-; 每個R4獨立地選自H，Ch烷基，-C ( = 0) OH和-0H， 每個R5獨立地選自H，Cp4烷基，苯基或1至3個-OH基團取代的Cp4烷基； 每個R6獨立地選自H，氟代，-C( = 0)OH取代的芐氧基，-C( = 0)OH取代的芐 基，-C ( = 0) OH取代的Cp4烷氧基和-C ( = 0) OH取代的Cp4烷基； R7獨立地選自H，苯基和吡啶； R8獨立地選自
R9獨立地選自H和CV6鹵代烷基； 每個n獨立地選自1，2, 3, 4, 5, 6, 7, 8和9,和 每個m獨立地選自1，2, 3, 4, 5, 6, 7, 8和9。
22.權利要求20-21的免疫綴合物，其中 L1 是-A1X2-或-X2-; L2 是鍵，-A2-,或-A2X2-; L3 是鍵，-A3-,或-A3X2-;
A1 是-C ( = 0) NH-，-C ( = 0) NH (CH2) n-，-C ( = 0) NH (CH2) nS-，- (0 (CH2) n) m-，- ((CH2) nO)m (CH2) n-，-NHC ( = 0) (CH2) n-，- (CH2) nNHC ( = 0) -，-C ( = 0) NH (CH2) nNHC ( = 0) (CH2) n-，- (CH2)nNH ((CH2) n0) m (CH2) n- ^ - (0 (CH2) n) mNHC ( = 0) (CH2) n-； A2 是-C ( = 0) NH-，-C ( = 0) NH (CH2) n-，-C ( = 0) NH (CH2) nS-，- (0 (CH2) n) m-，- ((CH2) n0)m (CH2) n-，-NHC ( = 0) (CH2) n-，- (CH2) nNHC ( = 0) -，-C ( = 0) NH (CH2) nNHC ( = 0) (CH2) n-，- (CH2)
L2 是鍵；L3 是鍵；L4 是-A4-,其中 A4 是-(CH2)nC( = 0)-。
26. 權利要求21-22的免疫綴合物，其中
27. 權利要求21-22的免疫綴合物，其中 L1 是-A1X2-,其中 A1 是-C ( = 0) NH (CH2) nS-并且 X2 是-(CH2) nC ( = 0) NH-; L2是鍵-;L3是-A3-,其中A3是-(CH 2) nC ( = 0)-，并且L4是鍵。
28. 權利要求21-22的免疫綴合物，其中 L1 是-A1X2-,其中 A1 是-C ( = 0) NH (CH2)nS-, X2 是-CHR4 (CH2) nC( = 0) NH-并且 R4是-C( = 0)0H; L2是鍵；L3是-A3-,其中A3是-(CH 2)nC( = 0)-并且L4是鍵。
29. 權利要求21-22的免疫綴合物，其中 L1 是-A1X2-,其中 A1 是-C ( = 0) NH (CH2) nS-并且 X2 是-(CH2) C ( = 0) NH-; L2是鍵；L3是鍵，并且L4是-A4-其中A 4是-(CH2)nNHC ( = 0) _。
30. 權利要求21-22的免疫綴合物，其中 L1 是-A1X2-,其中 A1 是-C ( = 0) NH (CH2) nS-并且 X2 是-(CH2) C ( = 0) NH-; L2 是鍵；L3 是鍵；L4 是-A4-,其中 A4 是-(CH2)nC( = 0)-。
31. 權利要求21-22的免疫綴合物，其中 L1 是-A1X2-,其中 A1 是-C ( = 0) NH (CH2) nS-并且 X2 是-(CH2) C ( = 0) NH-; L2 是-A2-,其中 A2 是-(CH2) nC ( = 0 ;
32. 權利要求21-22的免疫綴合物，其中 L1 是-A1X2-,其中 A1 是-C ( = 0) NH (CH2) nS-并且 X2 是-(CH2) C ( = 0) NH-; L2是鍵-;L3是-A3-,其中A3是-(CH 2) nC ( = 0)-，并且L4是鍵。
33. 權利要求21-22的免疫綴合物，其中 L1 是-A1X2-,其中 A1 是-C ( = 0) NH (CH2)nS-, X2 是-CHR4 (CH2) nC( = 0) NH-并且 R4是-C( = 0)0H; L2是鍵；L3是-A3-,其中A3是-(CH 2)nC( = 0)-并且L4是鍵。
34. 權利要求19至33中任一項的免疫綴合物，其中末端基團是選自抗炎劑，抗癌劑，抗 真菌劑，抗細菌劑，抗寄生蟲劑，抗病毒劑和麻醉劑的部分。
35. 權利要求34的免疫綴合物，其中末端基團選自V-ATPase抑制劑，HSP90抑制劑， IAP抑制劑，mTor抑制劑，微管穩定劑，微管去穩定劑，阿里他汀，多拉司他汀，類美登素， MetAP (甲硫氨酸胺基肽酶），蛋白CRMl的核輸出抑制劑，DPPIV抑制劑，在線粒體中磷酰基 轉移反應的抑制劑，蛋白合成抑制劑，CDK2抑制劑，CDK9抑制劑，Eg5抑制劑，HDAC抑制劑， DNA損傷劑，DNA烷基化劑，DNA嵌入劑，DNA小溝結合劑，蛋白酶體抑制劑，RNA聚合酶抑制 齊[J，和DHFR抑制劑。
36. 權利要求19至33中任一項的免疫綴合物，其中末端基團選自熒光團，生色團，量子 點，磁探針，放射性探針，成像試劑，或對比試劑。
37. 權利要求19至33中任一項的免疫綴合物，其中親和探針是生物素。
38. 權利要求19至37中任一項的免疫綴合物，其中所述修飾的抗體或其片段還包含一 個或多個正交綴合位點。
39. 權利要求38的免疫綴合物，其中每個正交綴合位點獨立地選自Sfp 4'-磷酸泛酰 巰基乙胺基轉移酶的底物，AcpS 4'-磷酸泛酰巰基乙胺基轉移酶的底物，賴氨酸，半胱氨 酸，酪氨酸，組氨酸，甲酰甘氨酸，非天然氨基酸，吡咯賴氨酸和吡咯啉-羧基賴氨酸。
40. 藥物組合物，其包含有效量的權利要求19-39中任一項的免疫綴合物，或其可藥用 的鹽，和可藥用的稀釋劑，運載體或賦形劑。
41. 根據權利要求1-18中任一項的修飾的抗體或其片段，或根據權利要求19-39中任 一項的免疫綴合物，其用作藥物。
42. 根據權利要求1-18中任一項的修飾的抗體或其片段，或根據權利要求19-39中任 一項的免疫綴合物，其用于治療癌癥，炎性疾病或感染性疾病。
43. 根據權利要求1-18中任一項的修飾的抗體或其片段，或根據權利要求19-39中任 一項的免疫綴合物，其用于治療癌癥。
44. 治療癌癥的方法，所述方法包括向有需要的哺乳動物施用有效量的根據權利要求 19-39中任一項的免疫綴合物，或權利要求40的藥物組合物。
45. 權利要求44的方法，其中所述的哺乳動物是人。
46. 核酸，其編碼權利要求1-18中任一項的修飾的抗體或其片段。
47. 宿主細胞，其包含權利要求46的核酸。
48. 權利要求1-18中任一項的修飾的抗體或其抗體片段，其還綴合到抗癌劑。
49. 生產權利要求19-39的免疫綴合物的方法，所述方法包括在合適的條件下孵育權 利要求1-18中任一項的修飾的抗體或抗體片段、4'-磷酸泛酰巰基乙胺基轉移酶，和連接 到CoA的末端基團或連接到CoA類似物的末端基團，從而促進形成包含抗體或抗體片段和 末端基團的免疫綴合物，所述抗體或抗體片段與末端基團通過包含4' -磷酸泛酰巰基乙胺 或4' -磷酸泛酰巰基乙胺類似物的接頭連接在一起。
50. 生產權利要求19-39的免疫綴合物的方法，所述方法包括 i) 在合適的條件下，用4' -磷酸泛酰巰基乙胺基轉移酶和CoA或CoA類似物孵育權利 要求1-18中任一項的抗體或抗體片段，從而將4' -磷酸泛酰巰基乙胺或4' -磷酸泛酰巰基 乙胺類似物附著至抗體或抗體片段，其中4' -磷酸泛酰巰基乙胺和4' -磷酸泛酰巰基乙胺 類似物包含官能團， 和 ii) 使4' -磷酸泛酰巰基乙胺或4' -磷酸泛酰巰基乙胺類似物與任選地連接末端基團 的反應性基團反應，從而形成免疫綴合物，所述免疫綴合物包含通過接頭連接在一起的抗 體或抗體片段和末端基團，所述接頭包含4' -磷酸泛酰巰基乙胺或4' -磷酸泛酰巰基乙胺 類似物。
51. 生產權利要求19-39的免疫綴合物的方法，所述方法包括 i) 在合適的條件下，用4' -磷酸泛酰巰基乙胺基轉移酶和CoA或CoA類似物孵育權利 要求1-18中任一項的抗體或抗體片段，從而將4' -磷酸泛酰巰基乙胺或4' -磷酸泛酰巰基 乙胺類似物附著至抗體或抗體片段，其中4' -磷酸泛酰巰基乙胺和4' -磷酸泛酰巰基乙胺 類似物包含被保護的官能團； ii) 使4' -磷酸泛酰巰基乙胺或4' -磷酸泛酰巰基乙胺類似物的被保護的官能團脫保 護， 和 iii) 使4' -磷酸泛酰巰基乙胺或4' -磷酸泛酰巰基乙胺類似物的脫保護的官能團與 任選地連接末端基團的反應性基團反應，從而形成免疫綴合物，所述免疫綴合物包含通過 接頭連接在一起的抗體或抗體片段和末端基團，所述接頭包含4' -磷酸泛酰巰基乙胺或 4' -磷酸泛酰巰基乙胺類似物。
52. 權利要求49-51中任一項的方法，其中所述合適的條件包括4°C至37°C之間的溫 度，以及PH6. 5至pH9. 0。
53. 包含權利要求1-18中任一項的修飾的抗體或抗體片段的免疫綴合物，其中所述修 飾的抗體或抗體片段中的肽標簽的絲氨酸殘基綴合到具有式（D_a)、式（E-a)、式（F-a)或 式（G-a)的結構的4'-磷酸泛酰巰基乙胺基團：
L1 是-A1X2-或 _X2_ ; L2 是鍵，-A2-,或-A2X2-; L3 是鍵，-A3-,或-A3X2-;
： A1 是-C ( = 0) NH-，-NHC ( = 0) -，-C ( = 0) NH (CH2) n-，-C ( = 0) NH (C (R4) 2) n-，- (0 (CH2) n) m_，_ (〇 (C (R4) 2) n) m_，_ ((CH2) n0) m-，- (((C (R4) 2) n0) m-，- ((CH2) n0) m (CH2) n-，- (((C (R4) 2) n0)mC (R4) 2) n-，- (CH2) nC ( = 0) NH-，- (C (R4) 2) nC ( = 0) NH-，- (CH2) nNHC ( = 0) -，- (C (R4) 2) nNHC (= 0)-，-NHC( = 0) (CH2) n-，-NHC ( = 0) (C(R4)2) n-，-C ( = 0) NH (CH2)nS-,-C ( = 0) NH (C(R4)2)nS-，-S (CH2) nC ( = 0) NH-，-S (C (R4) 2) nC ( = 0) NH-，-C ( = 0) NH (CH2) nNHC ( = 0) (CH2)n-，-C ( = 0) NH (C(R4)2) nNHC( = 0) (C(R4)2)n-, -C ( = 0) (CH2)n-, -C ( = 0) (C(R4)2)n-, -(CH2)nC( = 0)-，-(C(R4)2) nC( = 0)-，-(CH2)n (O(CH2) n)mNHC( = 0) (CH2)n-,-(C(R4)2)n (O(C(R4)2)n)mNHC( = 0) (C(R4)2) n-，_ (CH2) nNHC( = 0) (CH2) n-，_ (C(R4)2) nNHC( = 0) (C(R4)2)n-,-(CH2)nNH ((CH2) n0) m (CH2) n-, - (C (R4) 2) nNH ((C (R4) 2) n0) m (C (R4) 2) n-, - (0 (CH2) n) mNHC ( = 0) (CH2) n-, 或-(0 (C (R4) 2) n) mNHC ( = 0) (C (R4) 2) n-; A2 是-C ( = 0) NH-，-C ( = 0) NH (CH2) n-，-C ( = 0) NH (C (R4) 2) n-，- (0 (CH2) n) m-，- (0 (C (R4) 2) n) m_> _ ((CH2) n0) m-, - (((c (R4) 2) n0) m-, - ((CH2) n0) m (CH2) (C (R4) 2) n0) mC (R4) 2) n-, - (CH2) nC( = 0) NH-,-(C(R4)2) nC( = 0) NRS-(CH2) nNHC( = 0)-，-(C(R4)2) nNHC( = 0)-，-NHC (= 0)(CH2)n-，-NHC( = OMC(R4)2) n-，-C ( = 0) NH (CH2)nS-,-C ( = 0) NH (C(R4)2)nS-,-S (CH2)nC( = 0)NH-，-S (C(R4)2) nC( = 0)NH-，-(CH2)nS-,-(C(R4)2) nS-,-S (CH2)n-,-S (C(R4)2)n-，- (CH2) nNH-，- (C (R4) 2) nNH-，-C ( = 0) NH (CH2) nNHC ( = 0) (CH2) n-，-C ( = 0) NH (C (R4) 2)nNHC( = 0) (C(R4)2)n-,-C( = 0) (CH2)n-,-C ( = 0) (C (R4) 2) n-, - (CH2) nC ( = 0)- (C (R4) 2)nC( = 0)-，-(CH2)n (O(CH2) n)mNHC( = 0) (CH2) n-，_ (C(R4)2) n (O(C(R4)2) n)mNHC( = 0) (C(R4)2)n-，- (CH2) n (0 (CH2) n) m0C ( = 0) NH (CH2)n-, - (C(R4)2) n (O(C(R4)2) n)m0C( = 0) NH (C(R4)2)n-，- (CH2) nNHC ( = 0) (CH2) n-，- (C (R4) 2) nNHC ( = 0) (C (R4) 2) n-，- (CH2) nNH ((CH2) n0) m (CH2)n-，- (C (R4) 2) nNH ((C (R4) 2) n0) m (C (R4) 2) n-，- (0 (CH2) n) mNHC ( = 0) (CH2) n-，- (0 (C (R4) 2) n)
A3 是-C ( = 0) NH-，-C ( = 0) NH (CH2) n-，-C ( = 0) NH (C (R4) 2) n-，- (0 (CH2) n) m-，- (0 (C (R4) 2) n) m_> _ ((CH2) n0) m-, - (((c (R4) 2) n0) m-, - ((CH2) n0) m (CH2) (C (R4) 2) n0) mC (R4) 2) n-, - (CH2) nC ( = 0) NH-, - (C (R4) 2) nC ( = 0) NH-, - (CH2) nNHC ( = 0) -，- (C (R4) 2) nNHC ( = 0) -，-NHC ( = 0) (CH2) n-，-NHC ( = 0) (C (R4) 2) n-，-C ( = 0) NH (CH2) nS-，-C ( = 0) NH (C (R4) 2) nS-，-S (CH2) nC (= 0)NH-，-S(C(R4)2)nC( = 0)NH-，_ (CH2)nS-, - (C(R4)2) nS-，-S (CH2)n-,-S (C(R4)2) n-，-C (= 0)NH(CH2)nNHC( = 0) (CH2)n-,-C ( = 0) NH (C(R4)2) nNHC( = OMC(R4)2) n-，-C ( = 0) (CH2)n-，-C ( = 0) (C (R4) 2) n-，- (CH2) nC ( = 0) -，- (C (R4) 2) nC ( = 0) -，- (CH2) n (0 (CH2) n) mNHC ( = 0) (CH2) n-，- (C (R4)2)n(0(C(R4)2) n)mNHC( = OMC(R4)2) n-，_ (CH2)n (O(CH2) n)m0C( = 0) NH (CH2)n-，-(C(R4)2)n(0(C(R 4)2)n)m0C( = 0) NH (C(R4)2) n-，_ (CH2)n (O(CH2) n)m0C( = 0)-，-(C(R4)2)n(0(C(R4)2)n)m0C( = 0)-，-(CH2)n (O(CH2) n)mC( = 0)-，-(C(R4)2) n (O(C(R4)2) n)mC(= 0)-，-(CH2) nNHC( = 0) (CH2) n-，_ (C(R4)2) nNHC( = 0) (C(R4)2) n-，-(0 (CH2) n)mNHC( = 0) (CH2)
A4 是-C ( = 0) NH-，-C ( = 0) NH (CH2) n-，-C ( = 0) NH (C (R4) 2) n-，- (0 (CH2) n) m-，- (0 (C (R4) 2) n) m_> _ ((CH2) n0) m-, - (((c (R4) 2) n0) m-, - ((CH2) n0) m (CH2) (C (R4) 2) n0) mC (R4) 2) n-, - (CH2) nC ( = 0) NH-, - (C (R4) 2) nC ( = 0) NH-, - (CH2) nNHC ( = 0) -，- (C (R4) 2) nNHC ( = 0) -，-NHC ( = 0) (CH2) n-，-NHC ( = 0) (C (R4) 2) n-，-C ( = 0) NH (CH2) nS-，-C ( = 0) NH (C (R4) 2) nS-，-S (CH2) nC (= 0)NH-,-S (C(R4)2) nC( = 0)NH-,-C( = 0) NH (CH2) nNHC ( = 0) (CH2)n-,-C ( = 0) NH (C(R4)2)nNHC( = 0) (C(R4)2)n-,-C( = 0) (CH2)n-,-C ( = 0) (C (R4) 2) n-, - (CH2) nC ( = 0)- (C (R4) 2)nC( = 0)-，-(CH2)n (O(CH2) n)mNHC( = 0) (CH2) n-，_ (C(R4)2) n (O(C(R4)2) n)mNHC( = 0) (C(R4)2)
每個R4獨立地選自H，Ch烷基，-C ( = 0) OH和-OH, 每個R5獨立地選自H，Cp4烷基，苯基或1至3個-OH基團取代的Cp4烷基； 每個R6獨立地選自H，氟代，-C( = 0)OH取代的芐氧基，-C( = 0)OH取代的芐 基，-C ( = 0) OH取代的Cp4烷氧基和-C ( = 0) OH取代的Cp4烷基； R7獨立地選自H，苯基和吡啶；
R9獨立地選自H和CV6鹵代烷基； 每個n獨立地選自1，2, 3, 4, 5, 6, 7, 8和9， 每個m獨立地選自1，2, 3, 4, 5, 6, 7, 8和9,和 R1是巰基，馬來酰亞胺，鹵代乙酰胺，炔烴，三芳基膦，環辛烯，氧雜降冰片二烯，疊氮化 物，二芳基四嗪，降冰片烯，單芳基四嗪，羥胺，肼，NH2-NH-C( = 0)-，醛或酮。
54. 權利要求53的免疫綴合物，其中4' -磷酸泛酰巰基乙胺基團是
55. 權利要求53的免疫綴合物，其中綴合的絲氨酸具有選自以下的結構：
56. 權利要求55的免疫綴合物，其中綴合的絲氨酸是
57.包含權利要求1-18中任一項的修飾的抗體或抗體片段的免疫綴合物，其中所述修 飾的抗體或抗體片段中的肽標簽的絲氨酸殘基綴合到修飾的4' -磷酸泛酰巰基乙胺基團， 且具有選自以下的結構：
每個R4獨立地選自H，Ch烷基，-C ( = 0) OH和-OH， 每個R5獨立地選自H，Cp4烷基，苯基或1至3個-OH基團取代的Cp4烷基； 每個R6獨立地選自H，氟代，-C( = 0)OH取代的芐氧基，-C( = 0)OH取代的芐 基，-C ( = 0) OH取代的Cp4烷氧基和-C ( = 0) OH取代的Cp4烷基； R7獨立地選自H，苯基和吡啶；
R9獨立地選自H和CV6鹵代烷基； 每個n獨立地選自1，2, 3, 4, 5, 6, 7, 8和9， 每個m獨立地選自1，2, 3, 4, 5, 6, 7, 8和9,和 TG是藥物部分，親和探針，螯合劑，光譜探針，放射性探針，成像試劑，脂質分子，聚乙二 醇，聚合物，納米顆粒，量子點，脂質體，PLGA顆粒，多糖，乙酰基，或表面。
58.權利要求57的免疫綴合物，其中綴合的絲氨酸是
【文檔編號】C07K16/00GK104334576SQ201380029560
【公開日】2015年2月4日 申請日期:2013年5月31日 優先權日:2012年6月4日
【發明者】B·H·蓋爾斯坦格爾, J·格魯內瓦爾德, B·布爾蘇拉亞 申請人:Irm責任有限公司