一種生物活性小肽、其合成方法及其作為畜禽飼料添加劑的用途
【專利摘要】本發明涉及一種生物活性小肽、其合成方法及其作為畜禽飼料添加劑的用途,生物活性小肽為線型五肽Tyr-Gly-Gly-Trp-Leu，是用逐步接鏈和片段接鏈結合的方法合成,所得肽純度高，能在極低添加濃度下即可發揮作用，可調節動物胃腸菌群，促進動物消化功能，預防消化道疾病；刺激動物的免疫功能，增強動物對多種疫病的抗病力，大幅降低發病率和死淘率，降低生產成本，促進生長、增加體重，生產成本低。
【專利說明】一種生物活性小肽、其合成方法及其作為畜禽飼料添加劑的用途
發明領域
[0001]本發明涉及一種生物活性小肽飼料添加劑，具體地說是涉及生物活性小肽飼料添加劑及其制備方法。
【背景技術】
[0002]近年來，有些養殖場(戶)為了片面追求利潤，從促生長、控制疾病和提高瘦肉率等目的出發，濫用飼料添加劑，不僅影響療效而且會帶來一些不良反應:如注射胸腺素制劑、轉移因子制劑可致發熱和過敏反應；大劑量的脂多糖可引起免疫耐受作用；左旋咪唑可致食欲不振、惡心、嘔吐、嗅覺異常、嗜睡乏力、發熱、過敏反應、粒細胞減少、肝功能異常等。發達國家“綠色技術壁壘”已嚴重制約我國動物產品進入國際市場，我國出口歐美的畜禽產品屢屢受阻，同時在國內消費市場上，隨著國民經濟的發展和人民生活水平的提高，畜禽產品在人們日常膳食結構中的比例愈來愈大，畜禽產品的安全和衛生問題已成為社會共同關注的焦點，必須著眼于提高數量的同時，生產出質量較高的畜禽產品。此外，許多疾病的發生與機體免疫系統功能的缺陷和失調有著密切聯系。因此研制出一種既能促進和調節免疫應答功能又能提高抗病能力、減輕應激反應、提高疫苗免疫效果、改善生產性能等作用的飼料添加劑就顯得尤為重要。
[0003]目前市場上可見到的作為飼料添加劑的生物活性小肽是由動物的小腸和腸粘膜加工而成的肽蛋白或是含有一定量的小肽的肽蛋白飼料，而不是真正意義上的生物活性小肽純品，雖然也能提高動物的生產性能，降低腹瀉率，但是大都存在以下缺陷:(I)產品的添加量較大0.1~1.5% ; (2)為多種材料的混合物，產品功能不明確，功效不明顯；(3)肽的分子量較大，一般為6000左右，仍然具有抗原性，對動物不利，易引起抗原過敏反應；(4)制備成本高或產品成本高，不適于動物養殖使用。而且這些飼料產品主要用于代替飼料中的部分魚粉，使用范圍并不大。
[0004]生物活性小肽飼料添加劑的傳統制備方法主要是酶法，如使用木瓜蛋白酶、菠蘿蛋白酶等植物蛋白酶，或是使用胰蛋白酶、胃蛋白酶等動物蛋白酶，但容易產生令人難以接受的腥味或苦味，且生產成本高；其次是從原料中直接提取法，產率低、成本高；第三是DNA重組技術法，該法因許多消費者反對使用由遺傳改性生物所生產的食物產品，并擔心有生物安全性和生物污染，而受到限制。
【發明內容】
[0005]本發明的目的在于為了克服現有技術的不足，提供一種生物活性小肽，添加量低、功能明確，能提高動物對營養素(如蛋白質、礦物質、維生素等)吸收利用率、提高奶、肉、蛋的產量和生產能力，改善肉、蛋、奶的品質和風味，刺激動物免疫器官發育、提高抗病力、減少發病率，并能明顯改善水產動物養殖水質，提高水產動物生長速度和存活率，廣泛用于禽、牛、羊、豬、水產和經濟動物，可作為抗生素的替代品。[0006]本發明的另一目的在于提供生物活性小肽飼料添加劑的合成方法，所得生物活性小肽飼料添加劑為純品。
[0007]本發明的再一目的在于提供所述生物活性小肽飼料添加劑的用途。
[0008]本發明的目的是通過如下技術方案實現的:
[0009]生物活性小肽飼料添加劑的合成方法，包括GE-B5生物活性肽的合成和純化，其中GE-B5生物活性肽合成路線如下:
【權利要求】
1.生物活性小肽，其特征在于為線型五肽Tyr-Gly-Gly-Trp-Leu。
2.權利要求1所述的生物活性小肽的合成路線如下:
3.權利要求2所述的生物活性小肽的合成方法，步驟如下: 在冰浴條件下，以DIEA為縛酸劑，DCC與HOBt為混合縮合劑，二氯甲烷為溶劑，亮氨酸甲酯鹽酸鹽與Boc-色氨酸反應得到純Boc-Trp-Leu-OMe，然后同樣在(TC下將所得的Boc-Trp-Leu-OMe與三氟醋酸反應，得到Trp-Leu-OMe三氟醋酸鹽； 按照合成Boc-Trp-Leu-OMe的方法，以Boc-Tyr-OH和Gly-Gly-OMe鹽酸鹽為原料,合成Boc-Tyr-Gly-Gly-OMe,然后在冰浴條件下,在Boc-Tyr-Gly-Gly-OMe中加入NaOH和甲醇使其皂化，然后用HCl酸化得到Boc-Tyr-Gly-Gly-OH ； 同理，按照合成Boc-Trp-Leu-OMe的方法以Trp-Leu-OMe三氟醋酸鹽和Boc-Tyr-Gly-Gly-OH 為原料合成 Boc-Tyr-Gly-Gly-Trp-Leu-OMe，然后用 NaOH 將其水解，最后用三氟醋酸處理脫去Boc保護基,得到Tyr-Gly-Gly-Trp-Leu-OH。
4.權利要求1所述的生物活性小肽作為畜禽飼料添加劑的用途。
5.權利要求1所述的生物活性小肽作為畜禽飼料添加劑的用途，其特征在于所述的畜禽為豬、雞，鴨。
【文檔編號】C07K7/06GK103613643SQ201310651786
【公開日】2014年3月5日 申請日期:2013年12月4日 優先權日:2013年12月4日
【發明者】周業飛, 周梅仙, 張敦林, 劉維周, 張李陽, 華春 申請人:南京曉莊學院