居泉沙雷菌多克隆抗血清、制備方法及其在檢測沙門氏菌中的應用的制作方法
【專利摘要】本發明公開了一種居泉沙雷菌多克隆抗血清及其制備方法以及在檢測沙門氏菌中的應用，包括下列步驟：（1）居泉沙雷菌免疫抗原的制備；（2）抗原接種；（3）多克隆抗血清的采集；居泉沙雷菌多克隆抗血清在檢測沙門氏菌中的應用包括含有居泉沙雷菌多克隆抗血清的沙門氏菌選擇性增菌培養基及其沙門氏菌方法。本發明的多克隆抗血清可降低甚至完全抑制增菌液中居泉沙雷菌的數量，從而消除因居泉沙雷菌的存在而給沙門氏菌的檢測帶來的干擾，最終提高沙門氏菌分離鑒定的準確性，適用于現行的包括前增菌和選擇性增菌步驟的沙門氏菌檢測標準。該方法具有操作簡單、結果準確可靠等優點。
【專利說明】居泉沙雷菌多克隆抗血清、制備方法及其在檢測沙門氏菌中的應用
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種居泉沙雷菌多克隆抗血清、制備方法及其在檢測沙門氏菌中的應用，屬于沙門氏菌檢測【技術領域】。
【背景技術】
[0002]沙門氏菌是當前公共衛生上重要的腸道致病菌之一，同時也是引起動物腸道傳染病的致病菌之一。目前對于沙門氏菌的檢測方法多使用常規的細菌分離鑒定，即先采用非選擇性增菌、選擇性增菌、分離和鑒定等步驟。通常在分離過程中會出現干擾菌，居泉沙雷菌即是其中之一，而且出現的幾率較大。居泉沙雷菌的出現會降低沙門氏菌分離鑒定的準確性，因此，如果能夠抑制增菌過程中居泉沙雷菌的生長，則能夠明細提高沙門氏菌分離鑒定的準確性。
【發明內容】
[0003]為了抑制居泉沙雷菌的存在而給沙門氏菌的檢測帶來的干擾，最終提高沙門氏菌分離鑒定的準確性；本發明所要解決的技術問題提供一種改進的沙門氏菌的檢測方法，同時提供居泉沙雷菌的多克隆抗血清及其制備方法，并提供一種含有居泉沙雷菌多克隆抗血清的沙門氏菌選擇性增菌培養基。
[0004]特異性抗血清可在體外特異性地對相應的目標微生物進行抑制并殺滅，該發明即利用該原理展開的沙門氏菌檢測技術的改進。
[0005]通過對臨床145份樣品的應用結果顯示，該方法可提高沙門氏菌分離鑒定的準確性達79%，明顯降低了沙門氏菌的假陽性率。同時，所制備的多克隆抗血清對臨床上常見的26種沙門氏菌沒有抑制作用，結果顯示，該方法可應用于沙門氏菌的分離鑒定。具體結果見下表:
【權利要求】
1.一種居泉沙雷菌多克隆抗血清的制備方法，其特征在于，包括下列步驟: (1)居泉沙雷囷免疫抗原的制備 將居泉沙雷菌接種于營養瓊脂，37°c，12h，刮取菌苔于0.85%的生理鹽水中，加入終濃度為2%(v/v)的甲醛，感作37°C，24h，接甲醛感作的培養物接種營養瓊脂進行無菌檢測，確定甲醛感作的培養物無活菌的情況后，測定培養物蛋白濃度，應確保培養物的蛋白濃度大于2mg/mL，符合上述條件的情況下，以其為抗原； (2)抗原接種 免疫接種新西蘭大白兔，首免的接種劑量為2mg/只，第二次免疫于首免后7天進行，劑量同首免；第三次免疫于第二次免疫后14天進行,劑量為首免的一半；第三次免疫后，采血測定居泉沙雷菌抗血清的效價，抗血清效價不低于1:256時，采血； (3)多克隆抗血清的采集 采集的血液先在室溫放置30min，血液自然凝固后，放于37°C，12h，使血清析出，然后將其放于4°C，lh，使血凝塊收縮，以易于分離血清，隨后將血清無菌分離到滅菌的離心管中，所制備的血清可直接應用于沙門氏菌檢測。
2.利用權利要求1所述的方法制備的居泉沙雷菌多克隆抗血清。
3.一種含有居泉沙雷菌多克隆抗血清的沙門氏菌選擇性增菌培養基。
4.一種檢測沙門氏菌方法，其特征在于，包括下列步驟: (1)待檢樣品的前增菌` 取25g待檢樣品無菌加入到225mL的滅菌緩沖蛋白胨水，37°C，12h ； (2)選擇性增菌 向滅菌的沙門氏菌選擇性增菌培養基加入IOmL樣品的增菌液，隨后加入ImL居泉沙雷菌多克隆抗血清，37°C，培養12h ； (3)選擇性分離 將培養后的選擇性液接種于膽硫乳瓊脂(DHL)和酚紅黃綠瓊脂，37°C，12h ； (4)可疑菌的純培養 從選擇性培養基上挑選可疑的沙門氏菌菌落，接種于營養瓊脂，37°C，12h ； (5)可疑菌的鑒定 對于純培養的培養物，進行生化鑒定或血清學鑒定； (6)結果判定。
【文檔編號】C07K16/06GK103626868SQ201310630974
【公開日】2014年3月12日 申請日期:2013年12月2日 優先權日:2013年12月2日
【發明者】肖西志, 孫敏, 吳振興, 陳煜 , 鄧明俊, 林超, 吳信海, 房保海, 譚樂義, 朱來華 申請人:山東出入境檢驗檢疫局檢驗檢疫技術中心