一種高純蘆丁的制備方法
【專利摘要】本發明公開了一種高純蘆丁的制備方法，以蘆丁粗品為原料，利用有機溶劑熱溶解、熱過濾，將濾液以大孔樹脂/聚酰胺、大孔樹脂/微晶纖維素或微晶纖維素/聚酰胺為混合填料進行色譜柱分離得到高純蘆丁，經HPLC測定其純度最高可達98%以上，產量可達千克量級。本發明工藝穩定快速，操作簡單，成本低廉，適合工業化大規模生產。
【專利說明】一種高純蘆丁的制備方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及天然藥物的制備領域，具體涉及一種高純蘆丁的制備方法。
【背景技術】
[0002]蘆丁(Rutin)又名蕓香葉苷、維生素P，是一種來源很廣的黃酮類化合物。黃酮類化合物在心腦血管疾病的治療上起到舉足輕重的作用，蘆丁便是其中的一個典型代表。同時蘆丁具有抗自由基活性、抗病毒、抗脂質過氧化、抗急性胰腺炎等藥理作用，可用于多種疾病的治療。國內外醫藥行業以蘆丁為原料生產的曲克蘆丁、蘆丁鎂鉻鹽、多維葡萄糖羥丁蘆丁、槲皮素等藥物擴大了蘆丁產品的應用范圍和療效，同時蘆丁還可以作為天然黃色素使用，也是一種理想的天然廣譜防曬劑。
[0003]隨著研究的深入，蘆丁在在各領域的得到了更廣泛應用，這就使其需求量進一步加大。我國是蘆丁的生產和消費大國，目前全球蘆丁原料藥總產量已達3000~3600噸，而我國蘆丁總產量在1200噸左右，約占全球蘆丁總產量的1/3。因此，快速穩定地獲取高純度蘆丁則可以產生更好的經濟效益和社會效益。
[0004]實驗室及工業化生產提取蘆丁時，通常采用的是堿提酸沉法。該方法是利用蘆丁的酸性及溶解度極小的特性，與堿成鹽而易溶于水，酸化后其溶解度驟降而游離析出的原理，再經數次重結晶得到較純的蘆丁。該方法工藝成熟，操作簡單，多年來一直被視為較理想的方法，但該方法得到的蘆丁純度一般僅為80~90%，難以滿足越來越廣泛的應用需求。
[0005]蘆丁是一種黃酮類化合物，其結構中存在有一對鄰二酚羥基，化學性質活潑，由于光照、溫度等的影響，鄰二酚羥基易發生結構變化、氧化或分解。蘆丁在酸性環境其所含雙糖也易被水解而轉化為槲皮素，因此高純蘆丁的制備在技術上存在很大的難度。
[0006]CN1153174A采用分子形態轉變法精制蘆丁所得純品蘆丁收率高、質量好，但是該方法所用粗品蘆丁原料的純度要求在90%左右，若應用于工業化大規模生產，無疑大大增加了生產成本。CN1546506A采用三氯醋酸法脫蛋白及改良的Sevage法脫蛋白來純化蘆丁，該法操作簡單、節省勞力，但是所用試劑毒性較高，而且純度僅為90%，難以滿足當前對高純蘆丁的需求。CN101260132A采用高速逆流色譜法精制高純度蘆丁，該方法所制備蘆丁純度可達98%以上，但是使用多種有機溶劑，對環境有一定影響，同時其制備只有克量級，成本高，不利于工業化生產。CN102718820A采用樹脂進行柱層析精制蘆丁，該方法將所得蘆丁用去離子水淋洗，在80~90°C條件下干燥10~14個小時，因為較高溫度下長時間干燥尤其有空氣或光照存在的情況下易發生部分蘆丁的氧化或分解，因此存在一定的缺陷。鑒于此，尋找一種快速制備高純蘆丁的新方法并使之可以工業化大規模投產，已是目前蘆丁生產工藝研究的當務之急。
【發明內容】
[0007]本發明的目的是提供一種高純蘆丁的制備方法，以解決現有技術在制備高純蘆丁時不能同時達到原料蘆丁純度要求低、產品蘆丁純度高、制備過程穩定快速、制備成本低、試劑毒性低等要求的缺陷。
[0008]為解決上述缺陷，本發明采用以下技術方案:
[0009]一種高純蘆丁的制備方法，包括如下步驟:
[0010]步驟一、以蘆丁粗品為原料，與有機溶劑按1g:6~13mL混合，加熱攪拌至完全溶解，熱過濾得濾液；
[0011]步驟二、將步驟一所得濾液進行柱色譜分離，以大孔樹脂/聚酰胺、大孔樹脂/微晶纖維素或微晶纖維素/聚酰胺為混合填料，有機溶劑濕法裝柱，依次用體積百分比為10~20%有機溶劑水溶液、90~99%有機溶劑水溶液作為洗脫劑，洗脫流速為100~200ml/min，其中，大孔樹脂/聚酰胺、大孔樹脂/微晶纖維素或微晶纖維素/聚酰胺的質量比m/m為 1:3 ~6:1 ;
[0012]步驟三、根據洗脫液顏色由無色變有色開始第一次收集，至棕黃色變為淺黃色收集結束，將第一次收集所得洗脫液靜置析晶；
[0013]步驟四、將步驟三中洗脫液靜置析晶所析出的固體過濾，并用有機溶劑淋洗2~3次，40~50°C條件下真空干燥得到高純蘆丁。
[0014]步驟一、步驟二和步驟四所述的有機溶劑同為甲醇或乙醇。
[0015]步驟一所述加熱攪拌的溫度為70~80°C。
[0016]步驟二所述混合填料的質量是步驟一所述蘆丁粗品質量的6~10倍。
[0017]步驟三還包括:根據洗脫液顏色由淺黃色變棕黃色開始第二次收集，至變為無色收集結束，第二次收集的洗脫液通過減壓蒸餾，回收有機溶劑及獲取蘆丁浸膏，所述蘆丁浸膏在40~50°C條件下真空干燥，所得產物作為制備高純蘆丁的原料。
[0018]本發明的有益效果:
[0019]1、本發明所用的色譜柱填料為首次使用的不同材料的混合填料，價格適中，分離效果好、分離效率高。
[0020]2、本發明對原料蘆丁粗品純度要求低，純度在80%以上均適用，而制備的高純蘆丁的純度最高可達98%以上，產量可達千克量級。
[0021]3、本發明所用試劑僅甲醇低毒，水和乙醇綠色環保且價格低廉。
[0022]4、本發明所制備的高純度蘆丁可用于藥品、食品添加劑、化妝品、蘆丁標準品的研發與應用，同時該制備方法穩定快速，操作簡單，成本低廉，適合大規模工業化生產。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0023]圖1是實施例1制備的高純蘆丁的色譜出峰圖譜。
[0024]圖2是實施例2制備的高純蘆丁的色譜出峰圖譜。
[0025]圖3是實施例3制備的高純蘆丁的色譜出峰圖譜。
[0026]圖4是實施例4制備的高純蘆丁的色譜出峰圖譜。
【具體實施方式】
[0027]下面結合實施例和附圖對本發明做更進一步地解釋。下列實施例僅用于說明本發明，但并不用來限定本發明的實施范圍。
[0028]一種高純蘆丁的制備方法，包括如下步驟:[0029]步驟一、以蘆丁粗品為原料，與有機溶劑按Ig: 6~13mL混合，在70~80°C條件下攪拌至完全溶解，熱過濾得濾液；
[0030]步驟二、將步驟一所得濾液進行柱色譜分離，以大孔樹脂/聚酰胺、大孔樹脂/微晶纖維素或微晶纖維素/聚酰胺為混合填料，有機溶劑濕法裝柱，依次用體積百分比為10~20%有機溶劑水溶液、90~99%有機溶劑水溶液作為洗脫劑，洗脫流速為100~200ml/min，其中，大孔樹脂/聚酰胺、大孔樹脂/微晶纖維素或微晶纖維素/聚酰胺的質量比m/m為1:3~6:1 ;混合填料的質量是蘆丁粗品質量的6~10倍；
[0031]步驟三、根據洗脫液顏色由無色變有色開始第一次收集，至棕黃色變為淺黃色收集結束，將第一次收集所得洗脫液靜置析晶；
[0032]步驟四、將步驟三中洗脫液靜置析晶所析出的固體過濾，并用少量有機溶劑淋洗2~3次，40~50°C條件下真空干燥得到高純蘆丁。
[0033]步驟一、二和四所述的有機溶劑相同，可以為甲醇或乙醇。
[0034]洗脫液第一次收集之后，根據洗脫液顏色由淺黃色變棕黃色開始第二次收集，至變為無色收集結束，第二次收集的洗脫液通過減壓蒸餾，回收有機溶劑及獲取蘆丁浸膏，所述蘆丁浸膏在40~50°C條件下真空干燥，所得產物作為制備高純蘆丁的原料，以提高原料的利用率，降低制備成本。
[0035]以下實施例采用的大孔樹脂是由山東魯抗立科藥物化學有限公司提供的DM-18非極性大孔樹脂。聚酰胺為柱層析用聚酰胺，以下實施例采用的是浙江省臺州市路橋四甲生化塑料廠提供的柱層析用聚酰胺。微晶纖維素為柱層析用微晶纖維素，以下實施例采用的是國藥集團化學試劑有限公司提供的柱層析用微晶纖維素。
[0036]本發明對所用原料蘆丁粗品純度要求不高，純度在80%以上均可適用，以下實施例采用的蘆丁粗品，以槐米為原料按堿提酸沉法提取并重結晶I~2次獲得，純度為80~85%。原料蘆丁粗品和實施例所得產品高純蘆丁的純度按《中華人民共和國藥典》(2010年版)的規定方法測定，測試手段為高效液相色譜法(HPLC)，產品的純度最高可達98%以上。
[0037]實施例1
[0038]步驟一、取純度為83%的蘆丁粗品500g，與甲醇按lg:6mL的比例在75°C條件下攪拌至完全溶解、熱過濾，得濾液。
[0039]步驟二、將步驟一所得濾液進行柱色譜分離，以4500g質量比6:1的大孔樹脂/聚酰胺為混合填料，甲醇濕法裝于直徑為IOcm的柱子中，得到90cm高的柱層，依次用體積百分比10%甲醇水溶液1.5BV(柱體積)、90%甲醇水溶液2.5BV作為洗脫劑，洗脫流速為200ml/min。
[0040]步驟三、根據洗脫液顏色由無色變有色開始第一次收集，至棕黃色變為淺黃色收集結束，將該所得洗脫液靜置析晶；洗脫液由淺黃色變棕黃色開始第二次收集至變為無色收集結束，將該收集的洗脫液減壓蒸餾以回收甲醇及獲取蘆丁浸膏，蘆丁浸膏在45°C條件下真空干燥所得的產物可以作為制備高純蘆丁的原料。
[0041]步驟四、將步驟三中洗脫液靜置析晶所析出的固體過濾，并用少量的甲醇淋洗2次，40°C真空干燥得到高純蘆丁。最終得高純蘆丁 337.5g，產率為67.5%，經HPLC測定其純度為98.26%，如圖1所示。
[0042]實施例2[0043]步驟一、取純度為83%的蘆丁粗品300g，與乙醇lg: 13mL的比例在75°C條件下攪拌至完全溶解、熱過濾，得濾液。
[0044]步驟二、將步驟一所得濾液進行柱色譜分離，以3000g質量比3:1的大孔樹脂/聚酰胺為混合填料，乙醇濕法裝于直徑為IOcm的柱子中，得到62cm高的柱層，依次用體積百分比15%乙醇水溶液1.5BV、95%乙醇水溶液3BV作為洗脫劑，洗脫流速為170ml/min。 [0045]步驟三、根據洗脫液顏色由無色變有色開始第一次收集，至棕黃色變為淺黃色收集結束，將該所得洗脫液靜置析晶；洗脫液由淺黃色變棕黃色開始第二次收集至變為無色收集結束，將該收集的洗脫液減壓蒸餾以回收乙醇及獲取蘆丁浸膏，蘆丁浸膏在45°C條件下真空干燥所得的產物可以作為制備高純蘆丁的原料。
[0046]步驟四、將步驟三中洗脫液靜置析晶所析出的固體過濾，并用少量的乙醇淋洗3次，45°C真空干燥得到高純蘆丁。最終得高純蘆丁 210.6g，產率為70.2%，經HPLC測定其純度為97.99%，如圖2所示。
[0047]實施例3
[0048]步驟一、取純度為85%的蘆丁粗品350g，與乙醇按lg:1OmL的比例在80°C條件下攪拌至完全溶解、熱過濾，得濾液。
[0049]步驟二、將步驟一所得濾液進行柱色譜分離，以3000g質量比4:1的大孔樹脂/微晶纖維素為混合填料，乙醇濕法裝于直徑為IOcm的柱子中，得到57cm高的柱層，依次用體積百分比20%乙醇水溶液1.3BV、99%乙醇水溶液2.5BV作為洗脫劑，洗脫流速150ml/min。
[0050]步驟三、根據洗脫液顏色由無色變有色開始第一次收集，至棕黃色變為淺黃色收集結束，將該所得洗脫液靜置析晶；洗脫液由淺黃色變棕黃色開始第二次收集至變為無色收集結束，將該收集的洗脫液減壓蒸餾以回收乙醇及獲取蘆丁浸膏，蘆丁浸膏在40°C條件下真空干燥所得的產物可以作為制備高純蘆丁的原料。
[0051]步驟四、將步驟三中洗脫液靜置析晶所析出的固體過濾，并用少量的乙醇淋洗3次，40°C真空干燥得到高純蘆丁。最終得高純蘆丁 251g，產率為71.7%，經HPLC測定其純度為97.49%，如圖3所示。
[0052]實施例4
[0053]步驟一、取純度為80%的蘆丁粗品500g，與甲醇按lg:SmL的比例在70°C條件下攪拌至完全溶解、熱過濾，得濾液。
[0054]步驟二、將步驟一所得濾液進行柱色譜分離，以3000g質量比1:3的微晶纖維素/聚酰胺為混合填料，甲醇濕法裝于直徑IOcm的柱子中，得到55cm高的柱層，依次用體積百分比15%甲醇水溶液1.2BV、95%甲醇水溶液3BV作為洗脫劑，洗脫流速為100ml/min。
[0055]步驟三、根據洗脫液顏色由無色變有色開始第一次收集，至棕黃色變為淺黃色收集結束，將該所得洗脫液靜置析晶；洗脫液由淺黃色變棕黃色開始第二次收集至變為無色收集結束，將該收集的洗脫液減壓蒸餾以回收甲醇及獲取蘆丁浸膏，蘆丁浸膏在50°C條件下真空干燥，所得產物可以作為制備高純蘆丁的原料。
[0056]步驟四、將步驟三中洗脫液靜置析晶所析出的固體過濾，并用少量的甲醇淋洗2次，50°C真空干燥得到高純蘆丁。最終得高純蘆丁 318.6g，產率為63.7%，經HPLC測定其純度為97.28%，如圖4所示。
【權利要求】
1.一種高純蘆丁的制備方法，其特征在于，包括如下步驟: 步驟一、以蘆丁粗品為原料，與有機溶劑按Ig:6~13mL混合，加熱攪拌至完全溶解，熱過濾得濾液； 步驟二、將步驟一所得濾液進行柱色譜分離，以大孔樹脂/聚酰胺、大孔樹脂/微晶纖維素或微晶纖維素/聚酰胺為混合填料，有機溶劑濕法裝柱，依次用體積百分比為10~20%有機溶劑水溶液、90~99%有機溶劑水溶液作為洗脫劑，洗脫流速為100~200ml/min，其中，大孔樹脂/聚酰胺、大孔樹脂/微晶纖維素或微晶纖維素/聚酰胺的質量比m/m為1:3 ~6:1 ； 步驟三、根據洗脫液顏色由無色變有色開始第一次收集，至棕黃色變為淺黃色收集結束，將第一次收集所得洗脫液靜置析晶； 步驟四、將步驟三中洗脫液靜置析晶所析出的固體過濾，并用有機溶劑淋洗2~3次，40~50°C條件下真空干燥得到高純蘆丁。
2.根據權利要求1所述的一種高純蘆丁的制備方法，其特征在于，步驟一、步驟二和步驟四所述的有機溶劑同為甲醇或乙醇。
3.根據權利要求1或2所述的一種高純蘆丁的制備方法，其特征在于，步驟一所述加熱攪拌的溫度為70~80°C。
4.根據權利要求1或2所述的一種高純蘆丁的制備方法，其特征在于，步驟二所述混合填料的質量是步驟一所述蘆丁粗品質量的6~10倍。
5.根據權利要求1所述的一種高純蘆丁的制備方法，其特征在于，步驟三還包括:根據洗脫液顏色由淺黃色變棕黃色開始第二次收集，至變為無色收集結束，第二次收集的洗脫液通過減壓蒸餾，回收有機溶劑及獲取蘆丁浸膏，所述蘆丁浸膏在40~50°C條件下真空干燥，所得產物作為制備高純蘆丁的原料。
【文檔編號】C07D311/30GK103570662SQ201310581128
【公開日】2014年2月12日 申請日期:2013年11月19日 優先權日:2013年11月19日
【發明者】廖志新, 賈海洋, 劉世軍, 劉超, 葉潤 申請人:東南大學