一種制備內源性逆轉錄病毒多克隆抗體的方法
【專利摘要】本發明公開了一種制備內源性逆轉錄病毒多克隆抗體的方法。步驟如下：首先將PCR擴增P15E基因與GEX-4T-1載體混合，其后進行T載體連接測序以及構件GST重組載體；所述重組載體后將其轉化BL-21DE3宿主菌；其后進行IPTG的誘導表達；對P15E進行蛋白純化；純品蛋白與佐劑混合；其后對動物進行免疫注射；獲取血清；Western-blot印跡法；最后進行Elisa檢測。其中脫色液使用如下比例配制：甲醇：水：冰甲酸為20:15:6；脫色液中可以加入90ml超純水。本發明的有益效果是，實驗簡單，費用較低，抗體的制備為將來檢測臨床器官和人工肝中的PERV的表達及傳播具有重要意義。
【專利說明】一種制備內源性逆轉錄病毒多克隆抗體的方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種實驗方法，具體來說，一種制備內源性逆轉錄病毒多克隆抗體的方法。
【背景技術】
[0002]界種移植在治療人類疾病方面提供了極為豐富的器官、組織和細胞來源。因為豬來源方便，易于繁育，與人體解剖和生現有很高的相似性，可選擇合適大小的器官和豐富且功能以好肝細胞，成為了奸種移植和生物人工肝的首選。然而，對于異種移植和生物人工肝而言，作為異種來源的豬器官、組織和細胞，其內存在豬內源性逆轉求病毒(porcineendogenous retrovirus, PERV), PERV是一種Y逆轉錄病毒,它整合于豬的染色體屮；根據詁種的不同，其PERV拷貝數和mRNA的表達貴岜有很大差異。抑制PERV表達的豬成纖維細胞均來源子只有高PERVmRNA表達背貴的德國人白豬，經RNA干擾技術行基W沉默后，111然其表達量下降，但足山于RNA [ 二擾技術存在“脫靶效應”，所以這種有PERV mRNA高表達背景的核供體細胞在-定程度上仍然ft有較高的潛在感染風險。
【發明內容】
[0003]為克服上述技術問題，我們提出了以下技術方案:
一種制備內源性逆轉錄病毒多克隆抗體的方法，步驟如下:首先將PCR擴增P15E基因與GEX-4T-1載體混合，其后進行T載體連接測序以及構件GST重組載體；所述重組載體后將其轉化BL — 21DE3宿主菌；其后進行IPTG的誘導表達JfP15E進行蛋白純化；純品蛋白與佐劑混合；其后對動物進行免疫注射；獲取血清；Western-blot印跡法；最后進行Elisa檢測。
[0004]本發明中，其中脫色液使用如下比例配制:甲醇:水:冰甲酸為20:15:6。
[0005]本發明中，脫色液中可以加入90ml超純水。
[0006]本發明的有益效果是，實驗簡單，費用較低，抗體的制備為將來檢測臨床器官和人工肝中的PERV的表達及傳播具有重要意義。
【具體實施方式】
[0007]—種制備內源性逆轉錄病毒多克隆抗體的方法，步驟如下:首先將PCR擴增P15E基因與GEX-4T-1載體混合，其后進行T載體連接測序以及構件GST重組載體；所述重組載體后將其轉化BL — 21DE3宿主菌；其后進行IPTG的誘導表達；對P15E進行蛋白純化；純品蛋白與佐劑混合；其后對動物進行免疫注射；獲取血清；Western-blot印跡法；最后進行Elisa檢測。
[0008]其中脫色液使用如下比例配制:甲醇:水:冰甲酸為20:15:6。
[0009]本發明中，脫色液中可以加入90ml超純水。
[0010]以上所述，僅為本發明較佳的【具體實施方式】，但本發明的保護范圍并不局限于此，任何熟悉本【技術領域】的技術人員在本發明披露的技術范圍內，根據本發明的技術方案及其發明構思加以等同替換或改變， 都應涵蓋在本發明的保護范圍之內。
【權利要求】
1.一種制備內源性逆轉錄病毒多克隆抗體的方法，其特征在于，步驟如下:首先將PCR擴增P15E基因與GEX-4T-1載體混合，其后進行T載體連接測序以及構件GST重組載體；所述重組載體后將其轉化BL — 21DE3宿主菌；其后進行IPTG的誘導表達；對P15E進行蛋白純化；純品蛋白與佐劑混合；其后對動物進行免疫注射；獲取血清；Western-bl0t印跡法；最后進行Elisa檢測。
2.如權利要求1所述的一種制備內源性逆轉錄病毒多克隆抗體的方法，其特征在于，其中脫色液使用如下比例配制:甲醇冰:冰甲酸為20:15:6。
3.如權利要求1所述的一種制備內源性逆轉錄病毒多克隆抗體的方法，其特征在于，脫色液中可以加入90ml超純水。
【文檔編號】C07K16/06GK103601804SQ201310522218
【公開日】2014年2月26日 申請日期:2013年10月30日 優先權日:2013年10月30日
【發明者】徐麗 申請人:徐麗