果子貍抗貍瘟熱高免血清的制備方法
【專利摘要】本發明公開了果子貍抗貍瘟熱高免血清的制備方法。本發明果子貍瘟熱病高免血清是用犬瘟熱狗毒疫苗在豬身上產生抗病血清,再把抗病血清分離提取高抗血清。其特征在于抗原使用犬瘟熱狗毒疫苗和使用犬瘟熱狗毒疫苗皮下或肌肉分多次注射。用本高免血清對預防和可疑感染貍進行緊急預防,可大大的降低CD的發病率。
【專利說明】果子貍抗貍瘟熱高免血清的制備方法
[0001]【技術領域】本發明涉及人工飼養的野生動物防疫血清的制備,特別是果子貍抗貍瘟熱高免血清的制備。
[0002]【背景技術】果子貍又名花面貍,體型似貓如貍,果子貍屬國家二級保護動物,其皮稱為青苕皮,是我國大宗出口毛皮之一;其脂肪在化妝品生產中是難得的高級原料,還是醫治燙傷的良藥。其肉質為野味珍品,因其不凡身價和其獨特的口感風味,長期遭受人類無節制的濫捕和高價收購,目前日漸稀少,瀕臨滅絕。該發明是根據國家針對野生動物資源,“護、養、獵”政策,保護生態平衡,攻克人工馴養繁殖技術,保護野生動物資源,擴大種群和養殖規模,實現特種動物人工馴養,轉野生為家養,實行專業化養殖,向產業化、產業鏈方向發展,滿足人們生產生活需要。
[0003]貍瘟熱是危害果子貍最嚴重的傳染病之一,近年來有的果子貍養殖場常有本病的爆發,造成很大的經濟損失。有的養殖場或專業戶甚至造成毀滅性后果。盡管目前已有研制預防本病的疫苗用于臨床,但因種種原因仍不能完全保證不發本病,免疫失敗時有發生。在免疫過程中往往受到源抗體的影響,不能有效的產生主動免疫,尤其是為了提高生產效益實行年產二胎的種貍場提早斷奶仔貍容易感染本病造成大批死亡,故在臨床上急需要提供抗貍瘟熱高免血清進行治療和緊急預防。而目前國內外末見報道貍抗瘟熱血清抗體的生產。
[0004]
【發明內容】
本發明的目的就是使人工飼養的果子貍克服貍瘟熱病,生產一種對果子貍貍瘟熱有高效免疫功能的疫苗。
[0005]一種果子貍貍瘟熱高免血清的制備方法,包括:
[0006](I)、選擇用豬:選擇營養良好臨床癥狀、體溫、糞便檢查確記為健康的豬;
[0007](2)、抗原選用:使用犬痕熱狗毒疫苗;
[0008](3)、疫苗注射:分五次注射疫苗;
[0009](4)、采血方法:在第五次注射后15天耳靜脈采血;
[0010](5)、分離提純;
[0011](6)、檢驗血清;
[0012]其特征在于:
[0013]使用犬瘟熱狗毒抗原疫苗在營養良好臨床癥狀、體溫、糞便檢查確記為健康體重在40公斤-50公斤的種豬身上產生血清;
[0014]使用犬痕熱狗毒疫苗皮下或肌肉分多次注射,每次注射5個免疫劑量,第一日多點皮下注射犬瘟熱狗毒疫苗50ml加完全佛氏佐劑50ml,第十日多點皮下注射狗毒疫苗50ml,加不完全佛氏佐劑60ml,第二十日多點皮注射瘟熱狗毒疫苗50ml,不加佐劑,第三十日多點皮注射瘟熱狗毒疫苗50ml,不加佐劑,第四十日多點皮注射瘟熱狗毒疫苗50ml,不加佐劑。
[0015]本發明果子貍瘟熱病高免血清是用犬瘟熱狗毒疫苗在豬身上產生抗病血清,再把抗病血清分離提取高抗血清。
[0016]本發明的技術方案是通過下述步驟實現的:
[0017](I)、選擇用豬:選擇營養良好臨床癥狀、體溫、糞便檢查確記為健康體重在40公斤-50公斤的種豬;
[0018](2)、抗原選用:使用犬瘟熱狗毒疫苗;
[0019](3)、疫苗注射:使用犬瘟熱狗毒疫苗皮下或肌肉分多次注射,每次注射5個免疫劑量,第一日多點皮下注射犬痕熱狗毒疫苗50ml加完全佛氏佐劑50ml,第十日多點皮下注射狗毒疫苗50ml,加不完全佛氏佐劑60ml,第二十日多點皮注射瘟熱狗毒疫苗50ml,不加佐劑,第三十日多點皮注射瘟熱狗毒疫苗50ml,不加佐劑,第四十日多點皮注射瘟熱狗毒疫苗50ml,不加佐劑;
[0020](4)、采血方法:在第五次注射后15天耳靜脈采血;
[0021](5)、分離提純;
[0022](6)、檢驗血清。
[0023]果子貍屬稀有動物,人工養殖具有較高的經濟價值,遠比其它特種養殖動物優越,搶先開發占領果子貍養殖市場,將有著巨大的市場潛力。目前已經掌握了繁殖技術,擴大種群,擴大養殖規模,實現專業化發展,形成產業鏈,既可受益千家萬戶,使農民增收,增加財政收入,又可保護野生種群,保護生態平衡。
[0024]【具體實施方式】本發明的果子貍貍瘟熱高免血清是按下述方法制備的:
[0025](I)、選擇用豬:選用本公司飼養的40kg — 50kg /頭,營養良好經臨床癥狀、體溫、糞便檢查確記為健康本地土種豬兩頭。
[0026](2)、抗原選用:使用犬瘟熱狗毒疫苗;中國農科院特產研究所生產。
[0027](3)、疫苗注射:使用犬瘟熱狗毒疫苗皮下或肌肉分多次注射,每次注射5個免疫劑量,第一日多點皮下注射犬痕熱狗毒疫苗50ml加完全佛氏佐劑50ml,第十日多點皮下注射狗毒疫苗50ml,加不完全佛氏佐劑60ml,第二十日多點皮注射瘟熱狗毒疫苗50ml,不加佐劑,第三十日多點皮注射瘟熱狗毒疫苗50ml,不加佐劑,第四十日多點皮注射瘟熱狗毒疫苗50ml,不加佐劑;
[0028](4)、采血方法:在第五次免疫后15天耳靜脈采血,檢測血清抗體效價,血清抗體效價合格后,方可無菌放血分離血清。
[0029](5)、分離提純:采血在上午空腹時進行,前一天下午不喂精料,僅喂粗料和水,以免血中出現糜乳。采取無菌放血清法,于大玻璃瓶內加入滅菌的10%構椽酸鹽鈉液35ml /100ml,采血后在分離血漿前按每毫升加入10%結晶碳酸鈉液和6.6%氯化鈉液各15ml,邊加邊攪,使PH值在7.8-8.0,靜置分層,用虹吸法抽取血漿。按100ml血漿加入30%氯化鈣液1.3ml,混勻后靜放48h,振搖除去纖維制成血清。加入0.5%碳酸或I /萬硫抑汞后抽樣作無菌檢驗。
[0030](6)、檢驗血清:抗血清的質量檢驗、無菌檢驗,物理性狀檢驗等按《成品檢驗有關規定》進行。效力檢驗按各種抗血清規定方法標準進行。安全檢測用18g_22g健康小鼠2只,各皮下注射血清0.5ml,用體重250g — 450g健康鼠,各皮下注射血清10ml,觀察10天均應健活。
[0031]高免血清效價檢測:
[0032]治療試驗:按每公斤體重2_8ml皮下或肌肉注射,每日一次,連用三天。
[0033]緊急預防接種試驗:對以發現并確診為CD流行時,與本病畜有過密切接觸,末進行主動免疫的貍或犬進行緊急預防接種,按每公斤體重2 — 4ml皮下或肌肉注射,并提倡盡應用。
[0034]被動免疫試驗:若果子貍每年產二胎,新生幼貍離開母貍吮乳,只喂牛奶,這時幼貍母源抗體水平低,抗病能力差,需要被動免疫。從出生第10天開始,分別在第10天、第30天、第45天用研制的高免疫血清進行被動免疫。在第60天70天進行主動免疫。在第90日齡統計⑶發病情況。
[0035]CD診斷標準:以臨床癥狀、流行病學調查、結合實驗室瓊脂擴散試驗和酶聯吸附試驗綜合判定為標準。
[0036]試驗結果:
[0037]高免血清效價測定結果為:1:640。
[0038]⑶臨床發病貍治療效果為:治療病貍32只,治愈30只,治愈率為94%。
[0039]緊急預接種試驗結果為:可疑感染貍50只,應用高免血清作緊急預防接種的貍在疫病流行期間均未感染以病。
[0040]對新生幼貍施行被動免疫,可以幫助幼貍安全度過和避免,由于母源抗體缺失和主動免疫失敗而強毒侵害的“危險期”。
[0041 ] 本發明果子貍瘟熱病高免血清是使用犬瘟熱狗毒疫苗加佐劑多點皮下注射經反復多次刺激豬體,產生高效價的特異抗體從而獲得高效價血清抗體。治療貍瘟熱具有非常顯著的療效,是任何藥物不能代替它的作用。用特異性高免血清對可疑感染貍進行緊急預防,可大大的降低CD的發病率。特異性高免血清應用對新生幼貍施行被動免疫可以避免幼貍在人工哺乳期,無母活抗體保護而遭受CDV感染的危害。高免血清治療在早期進行效果更好,除了用特異性血清治療外,還應配合常規抗菌、消炎、補液等輔助療法。特異性高免血清治療對貍食欲減退、營養缺乏,腹瀉等一般性疾病都有較好的療效。
【權利要求】
1.一種果子貍貍瘟熱高免血清的制備方法,包括: (1)、選擇用豬:選擇營養良好臨床癥狀、體溫、糞便檢查確記為健康的豬; (2)、抗原選用:使用犬瘟熱狗毒疫苗; (3)、疫苗注射:分五次注射疫苗; (4)、采血方法:在第五次注射后15天耳靜脈采血; (5)、分離提純; (6)、檢驗血清; 其特征在于: 使用犬瘟熱狗毒抗原疫苗在營養良好臨床癥狀、體溫、糞便檢查確記為健康體重在40公斤-50公斤的種豬身上產生血清; 使用犬瘟熱狗毒疫苗皮下或肌肉分多次注射,每次注射5個免疫劑量,第一日多點皮下注射犬瘟熱狗毒疫苗50ml加完全佛氏佐劑50ml,第十日多點皮下注射狗毒疫苗50ml,加不完全佛氏佐劑60ml,第二十日多點皮注射瘟熱狗毒疫苗50ml,不加佐劑,第三十日多點皮注射瘟熱狗毒疫苗50ml,不加佐劑,第四十日多點皮注射瘟熱狗毒疫苗50ml,不加佐劑。
【文檔編號】C07K16/10GK104513311SQ201310465426
【公開日】2015年4月15日 申請日期:2013年10月8日 優先權日:2013年10月8日
【發明者】王秀松 申請人:王秀松