一種水酶法-半仿生法提取茶葉籽中黃酮的方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種水酶法-半仿生法提取茶葉籽中黃酮的方法，包括以下步驟：（1）茶葉籽干燥、去殼，粉碎過(guò)篩；（2）稱(chēng)取茶葉籽粉，加部分水，加熱滅酶，然后冷卻至室溫，加入酶液及水，攪拌均勻，酶解0.5-2.0h；（3）在酶解后的茶葉籽粉混合液加入乙醇和水，使料液比為1:25、乙醇濃度為60%；調(diào)節(jié)pH值為1.5-2.0，回流提取25-40min，然后離心，將離心后的上清液取出備用；濾渣用60%乙醇清洗，再分別調(diào)節(jié)pH至7-7.5和8.0-8.5重復(fù)上述的回流提取、離心分離步驟；合并三次離心液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)、干燥即得目的產(chǎn)物。本發(fā)明通過(guò)將酶法-半仿生法技術(shù)相結(jié)合，茶葉籽粉的總黃酮得率遠(yuǎn)高于現(xiàn)有技術(shù)，說(shuō)明采用該方法提取茶葉籽粉黃酮具有明顯優(yōu)勢(shì)。
【專(zhuān)利說(shuō)明】一種水酶法-半仿生法提取茶葉籽中黃酮的方法【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于黃酮的提取領(lǐng)域，具體涉及一種水酶法集合半仿生法提取茶葉籽中黃酮的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]我國(guó)是產(chǎn)茶大國(guó)，種植面積及產(chǎn)量均居于世界首位，茶樹(shù)資源豐富，每年茶籽產(chǎn)量約8億多公斤，但長(zhǎng)期以來(lái)人們對(duì)于茶葉籽的開(kāi)發(fā)利用不足，大部分茶葉籽都被白白浪費(fèi)掉了，國(guó)內(nèi)外對(duì)茶葉籽的研究主要集中在茶葉籽油的提取精煉和茶皂素的提取上，而對(duì)黃酮類(lèi)物質(zhì)的研究開(kāi)發(fā)較少，開(kāi)發(fā)茶葉籽黃酮，避免資源浪費(fèi)有著十分重要的意義和廣闊的前景。
[0003]水酶法提取黃酮是一種較為高效環(huán)保的方法，但是水酶法的提取率還不太理想，一定程度上造成黃酮資源浪費(fèi)，而且由于茶籽中的兩性大分子物質(zhì)蛋白質(zhì)等物質(zhì)的存在，使富含油/水的水酶法提黃酮體系中不可避免的形成o/w型乳狀液(emulsion)，這不但給體系分離帶來(lái)極大的挑戰(zhàn)，而且嚴(yán)重限制了提取率。
[0004]由于茶葉籽黃酮的提取純化工藝還不完善，因此尋找更為高效的提取方法提取茶葉籽黃酮具有重要意義。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0005]本發(fā)明的目的是提供一種水酶法-半仿生法提取茶葉籽中黃酮的方法，將水酶法和半仿生技術(shù)相結(jié)合，顯著提高了茶葉籽中黃酮的提取率。
[0006]本發(fā)明采用如下的技術(shù)方案:
[0007]—種水酶法-半仿生法提取茶葉籽中黃酮的方法，包括以下步驟:
[0008](I)茶葉籽粉制備:茶葉籽干燥去殼，粉碎過(guò)篩，得到茶葉籽粉；
[0009](2)水酶法提取:按照茶籽粉與反應(yīng)液的料液重量/體積比為1:3_6，稱(chēng)取茶葉籽粉，在此茶葉籽粉中先加入部分水，加熱3-8分鐘以消滅茶葉籽粉自身酶活性，然后冷卻至室溫，加入已配置好的酶液及剩余的水，得到茶葉籽粉混合液，攪拌均勻，在51-55°C、攪拌條件下酶解0.5-2.0h ；
[0010](3)半仿生法提取:在酶解后的茶葉籽粉混合液中加入乙醇和水，使料液重量/體積比為1:25、乙醇的體積百分比濃度為60%，調(diào)節(jié)pH值為1.5-2.0，在80°C水浴中回流提取25-40min,然后在3500_4500r/min下離心5_15min,將離心后的上清液取出備用；濾洛用體積百分比濃度為60%的乙醇清洗，再分別調(diào)節(jié)pH至7-7.5和8.0-8.5重復(fù)上述的回流提取、離心分離步驟；合并三次離心液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)、干燥即得目的產(chǎn)物。
[0011]優(yōu)選地，所述步驟(2)中酶液為纖維素酶溶解于部分蒸餾水中制成，纖維素酶的用量為6-12mg/g茶葉籽粉；所述酶液配制時(shí)在0-5°C條件下快速進(jìn)行。
[0012]進(jìn)一步地，水酶法-半仿生法提取茶葉籽中黃酮的方法，包括以下步驟:
[0013](I)茶葉籽粉制備:茶葉籽去殼，粉碎過(guò)篩，烘干至恒重，得到茶葉籽粉；[0014](2)水酶法提取:按照茶籽粉與反應(yīng)液的料液重量/體積比為1:4，稱(chēng)取茶葉籽粉，先加入部分水，加熱4分鐘以消滅茶葉籽粉自身酶活性，然后冷卻至室溫，加入已配置好的酶液及剩余的水，得到茶葉籽粉混合液，攪拌均勻，在53°C、攪拌條件下酶解0.85h ;所述酶液為纖維素酶溶解于部分蒸餾水中在0-5°C條件下快速制成，纖維素酶的用量為10mg/g茶葉籽粉；
[0015](3)半仿生法提取:在酶解后的茶葉籽粉混合液加入乙醇和水，使料液重量/體積比為1:25、乙醇的體積百分比濃度為60%，調(diào)節(jié)pH值為2.0，在80°C水浴中回流提取30min，然后在4000r/min下離心lOmin，將離心后的上清液取出備用；濾渣用體積百分比濃度為60%的乙醇清洗，再分別調(diào)節(jié)pH至7.4和8.0重復(fù)上述的回流提取、離心分離步驟；合并三次離心液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)、干燥即得目的產(chǎn)物。
[0016]采用上述方案后，本發(fā)明達(dá)到的有益效果為:通過(guò)酶法耦合半仿生法技術(shù)相結(jié)合，茶葉籽粉的總黃酮得率遠(yuǎn)高于按照農(nóng)業(yè)部行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)測(cè)出的茶葉籽粉黃酮得率，說(shuō)明采用該方法提取茶葉籽粉總黃酮具有明顯優(yōu)勢(shì)。
[0017]以下通過(guò)下列實(shí)驗(yàn)來(lái)具體說(shuō)明本發(fā)明的效果:
[0018]試驗(yàn)例1:提取方法篩選
[0019]在茶葉籽黃酮提取過(guò)程中，本發(fā)明人對(duì)提取工藝進(jìn)行了設(shè)計(jì)和選擇，以提取時(shí)間、茶葉籽黃酮含量為考察指標(biāo)，充分考慮水劑法、水酶法、水酶法-半仿生法三種方法對(duì)提取時(shí)間及黃酮含量的影響，進(jìn)行了一系列的選擇試驗(yàn)。
[0020]樣品A:按照農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)NY/T1295-2007《蕎麥及其制品中總黃酮含量的測(cè)定》中“7.1試樣制備”及“7.2 試料溶液的制備”的方法制備樣品，即簡(jiǎn)單工藝為:茶葉籽去殼一粉碎一一加入甲醇溶液在(65± 2) °〇下恒溫振蕩提取2小時(shí)一過(guò)濾一即得；
[0021]樣品B:按照文獻(xiàn)“茶葉籽中總黃酮的提取及結(jié)構(gòu)的初步鑒定”(王華清等，食品工業(yè)科技，2012年第7期)中最佳工藝條件制備，即工藝條件為:料液比1:26 (g:ml)、乙醇體積分?jǐn)?shù)58%、提取溫度82 °C、提取時(shí)間2h ；
[0022]樣品C:按照本發(fā)明實(shí)施例1方法制備；
[0023]樣品D:按照本發(fā)明實(shí)施例1方法，去除半仿生法步驟3)制備，即僅采用水酶法提取，其中酶解時(shí)間為1.5h ；
[0024]上述方法中茶葉籽粉原料均為10g，根據(jù)相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)總黃酮含量，得到的目的產(chǎn)物的考察結(jié)果見(jiàn)表1。
[0025]表1工藝選擇實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[0026]
【權(quán)利要求】
1.一種水酶法-半仿生法提取茶葉籽中黃酮的方法，其特征在于:包括以下步驟: (1)茶葉籽粉制備:茶葉籽干燥去殼，粉碎過(guò)篩，得到茶葉籽粉； (2)水酶法提取:按照茶籽粉與反應(yīng)液的料液重量/體積比為1:3-6，稱(chēng)取茶葉籽粉，在此茶葉籽粉中先加入部分水，加熱3-8分鐘以消滅茶葉籽粉自身酶活性，然后冷卻至室溫，加入已配置好的酶液及剩余的水，得到茶葉籽粉混合液，攪拌均勻，在51-55°C、攪拌條件下酶解 0.5-2.0h ； (3)半仿生法提取:在酶解后的茶葉籽粉混合液中加入乙醇和水，使料液重量/體積比為1:25、乙醇的體積百分比濃度為60%，調(diào)節(jié)pH值為1.5-2.0，在80°C水浴中回流提取25-40min,然后在3500_4500r/min下離心5_15min,將離心后的上清液取出備用；濾洛用體積百分比濃度為60%的乙醇清洗，再分別調(diào)節(jié)pH至7-7.5和8.0-8.5重復(fù)上述的回流提取、離心分離步驟；合并三次離心液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)、干燥即得目的產(chǎn)物。
2.如權(quán)利要求1所述的水酶法-半仿生法提取茶葉籽中黃酮的方法，其特征在于:所述步驟(2)中酶液為纖維素酶溶解于部分蒸餾水中制成，纖維素酶的用量為6-12mg/g茶葉籽粉；所述酶液配制時(shí)在0-5°C條件下快速進(jìn)行。
3.如權(quán)利要求1-2任一所述的水酶法-半仿生法提取茶葉籽中黃酮的方法，其特征在于:包括以下步驟: (O茶葉籽粉制備:茶葉籽去殼，粉碎過(guò)篩，烘干至恒重，得到茶葉籽粉； (2)水酶法提取:按照茶籽粉與反應(yīng)液的料液重量/體積比為1:4，稱(chēng)取茶葉籽粉，先加入部分水，加熱4分鐘以消滅茶葉籽粉自身酶活性，然后冷卻至室溫，加入已配置好的酶液及剩余的水，得到茶葉籽粉混合液，攪拌均勻，在53°C、攪拌條件下酶解0.85h ;所述酶液為纖維素酶溶解于部分蒸餾水中在0-5°C條件下快速制成，纖維素酶的用量為10mg/g茶葉籽粉；` (3)半仿生法提取:在酶解后的茶葉籽粉混合液加入乙醇和水，使料液重量/體積比為1:25、乙醇的體積百分比濃度為60%，調(diào)節(jié)pH值為2.0，在80°C水浴中回流提取30min，然后在4000r/min下離心lOmin，將離心后的上清液取出備用；濾渣用體積百分比濃度為60%的乙醇清洗，再分別調(diào)節(jié)PH至7.4和8.0重復(fù)上述的回流提取、離心分離步驟；合并三次離心液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)、干燥即得目的產(chǎn)物。
【文檔編號(hào)】C07G99/00GK103509062SQ201310435228
【公開(kāi)日】2014年1月15日 申請(qǐng)日期:2013年9月23日 優(yōu)先權(quán)日:2013年9月23日
【發(fā)明者】王曉琴, 林莉 申請(qǐng)人:華僑大學(xué), 貴州周以晴生物科技有限公司