一種植物花青素提取工藝的制作方法
【專利摘要】本發明公開一種植物花青素的提取方法，涉及一種花色素的制備方法，屬于分析化學領域。其特征在于：處理步驟包括：加樣、混合萃取劑和分散劑、振蕩形成乳濁體系、離心分離、吸取有機相直接進行HPLC分析。本發明的方法富集能力高，操作簡單，有機溶劑用量少和萃取時間短，集采樣、萃取和濃縮于一體的同時，避免了固相微萃取中可能存在的交叉污染的問題，是一種簡單、快速、成本低、高效且環境友好的樣品前處理新技術，在痕量分析領域具有廣泛的應用前景。
【專利說明】一種植物花青素提取工藝
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種天然色素提取工藝，具體地說是一種植物花青素提取的方法。
【背景技術】
[0002]花青素(Anthocyanidin)，又稱花色素，是自然界一類廣泛存在于植物中的水溶性天然色素，屬類黃酮化合物。也是植物花瓣中的主要呈色物質，水果、蔬菜、花卉等五彩繽紛的顏色大部分與之有關。花青素存在于植物細胞的液泡中，可由葉綠素轉化而來。在植物細胞液泡不同的PH值條件下，使花瓣呈現五彩繽紛的顏色。秋天可溶糖增多，細胞為酸性，在酸性條件下呈紅色或紫色，所以花瓣呈紅、紫色是花青素作用，其顏色的深淺與花青素的含量呈正相關性，可用分光光度計快速測定，在堿性條件下呈藍色。花青素的顏色受許多因子的影響，低溫、缺氧和缺磷等不良環境也會促進花青素的形成和積累。
目前食品工業上所用的色素多為合成色素，幾乎都有不同程度的毒性，長期使用會危害人的健康，因此天然色素就越來越引起了科研領域的關注:由于至今國內市場上還沒有花青素純品，所以提取高純度的花青素對花色苷類色素的深入研究與開發提供必備的表征條件和理論依據，并且有助于它的工業利用。由于沒有市場還沒有出現花青素純品，因此需要攝入花青素，那么目前只能通過食補的方式了，譬如食用:黑枸杞、黑土豆、紫番薯、紫山藥、藍莓、草莓、葡萄、紫玉米等獲得。
[0003]花色素的現有的制備工藝為:用水、稀乙醇、稀丙酮提取，提取液減壓濃縮、過濾或離心除去水不溶雜志后得到水溶液，該水溶液因含有大量的水溶性雜質，需要精制。上述制備工藝中，精制用溶劑萃取，存在下列缺點:花色素在與水不相溶的溶劑中溶解度較低，所以得率較低；等。因此，發展高效、穩定、低成本且環境友好的提取新技術仍是亟待解決的問題。
[0004]分散液液微萃取(DispersiveLiquid-liquid Microextract1n,DLLME)于 2006年首次提出，是一種新型的樣品預處理技術。DLLME結合了 LLE和SPME的特點，所需有機溶劑少，操作單快速，集萃取、純化、濃縮于一體，回收率高，富集效果好。目前，DLLME已能與多種儀器如氣相色譜、氣相色譜一質譜、液相色譜、液相色譜一質譜、原子吸收光譜等聯用，成功用于水樣、土壤、尿樣和水果中不同物質的測定，分析對象涉及農藥殘留、臨床藥物、痕量金屬等。將DLLME用于植物激素的前處理，具有富集能力高，操作簡單，有機溶劑用量少和萃取時間短等優點，是一種簡單可靠、環境友好的樣品預處理技術。
【發明內容】
本發明的目的在于提供一種植物花青素提取方法，用于凈化和富集樣品，該方法富集能力高，操作簡單，有機溶劑用量少和萃取時間短。
[0005]為實現上述目的，本發明所述一種植物花青素提取方法，其特征在于:處理步驟包括:
一、用65?95%的有機溶劑提取粉碎的葡萄籽，然后再在不高于75?85°C的條件下，在真空度0.06?0.09Mpa下減壓蒸發得粗提取物；
二、在1mL帶塞的尖底離心管中，加入5.0mL粗提取物和0.375g NaCl，所述粗提取物的pH為4.0 ;預先將50.0uL萃取劑三氯甲烷和1.0mL分散劑丙酮混勻；
三、用2.0mL注射器吸取步驟二的混合液，迅速注射入步驟一裝有粗提取物和0.375gNaCl的尖底離心管中，輕輕振蕩，形成乳濁體系；
四、將離心試管以4500r/ min離心3min ；
五、用微量液相進樣針吸取尚心管底部的有機相直接進行HPLC分析。
[0006]所述有機溶劑為乙醇、丙酮、甲醇、丙醇、異丙醇、乙酸乙酯。
[0007]本發明所述一種萃取植物花青素的方法，其有益效果在于:本方法能夠有效地對植物樣品進行凈化、濃縮，減少植物基質對檢測信號的干擾；本方法富集效果好，處理后的樣品用高效液相色譜一熒光檢測法分離測定，待測物質的檢測限降低了兩個數量級；未經過柱，減少了樣品中待測物的損失；植物樣品中的IAA不穩定，易分解，本方法操作時間短，有利于減少IAA的分解；消耗有機溶劑少，是一種環境友好的前處理技術；該方法裝置簡單，成本低；該方法可與氣相色譜、液相色譜和原子吸收分光光譜等儀器聯用，適用范圍廣。
[0008]
【具體實施方式】
以下實施例為本發明作進一步出闡述。
[0009]實施例1
一、用75%的乙醇3000ml提取粉碎的葡萄籽500g，然后再在85°C的條件下，在真空度0.06Mpa下減壓蒸發得粗提取物；
二、在1mL帶塞的尖底離心管中，加入5.0mL粗提取物和0.375g NaCl，所述粗提取物的pH為4.0 ;預先將50.0uL萃取劑三氯甲烷和1.0mL分散劑丙酮混勻；
三、用2.0mL注射器吸取步驟二的混合液，迅速注射入步驟一裝有粗提取物和0.375gNaCl的尖底離心管中，輕輕振蕩，形成乳濁體系；
四、將離心試管以4500r/ min離心3min ；
五、用微量液相進樣針吸取尚心管底部的有機相直接進行HPLC分析。
[0010]實施例2
一、用78%的甲醇6000ml提取粉碎的葡萄籽1000g，然后再在80°C的條件下，在真空度0.07Mpa下減壓蒸發得粗提取物；
二、在1mL帶塞的尖底離心管中，加入5.0mL粗提取物和0.375g NaCl，所述粗提取物的pH為4.0 ;預先將50.0uL萃取劑三氯甲烷和1.0mL分散劑丙酮混勻；
三、用2.0mL注射器吸取步驟二的混合液，迅速注射入步驟一裝有粗提取物和0.375gNaCl的尖底離心管中，輕輕振蕩，形成乳濁體系；
四、將離心試管以4500r/ min離心3min ；
五、用微量液相進樣針吸取尚心管底部的有機相直接進行HPLC分析。
[0011]實施例3
一、用60%的丙酮3000ml提取粉碎的葡萄籽500g，然后再在85°C的條件下，在真空度0.09Mpa下減壓蒸發得粗提取物；
二、在1mL帶塞的尖底離心管中，加入5.0mL粗提取物和0.375g NaCl，所述粗提取物的pH為4.0 ;預先將50.0uL萃取劑三氯甲烷和1.0mL分散劑丙酮混勻；
三、用2.0mL注射器吸取步驟二的混合液，迅速注射入步驟一裝有粗提取物和
0.375gNaCl的尖底離心管中，輕輕振蕩，形成乳濁體系；
四、將離心試管以4500r/ min離心3min ；
五、用微量液相進樣針吸取尚心管底部的有機相直接進行HPLC分析。
【權利要求】
1.一種萃取植物花青素的方法，其特征在于:用65?95%的有機溶劑提取粉碎的葡萄籽，然后再在不高于75?85°C的條件下，在真空度0.06?0.09Mpa下減壓蒸發得粗提取物。
2.如權利要求1所述一種萃取植物花青素的方法，其特征在于:在1mL帶塞的尖底離心管中，加入5.0mL粗提取物和0.375g NaCl，所述粗提取物的pH為4.0 ;預先將50.0uL萃取劑三氯甲烷和1.0mL分散劑丙酮混勻。
3.如權利要求1所述一種萃取植物花青素的方法，其特征在于:用2.0mL注射器吸取步驟二的混合液，迅速注射入步驟一裝有粗提取物和0.375g NaCl的尖底離心管中，輕輕振蕩，形成乳池體系；將離心試管以4500r / min離心3min。
4.如權利要求1所述一種萃取植物花青素的方法，其特征在于:所述有機溶劑為乙醇、丙酮、甲醇、丙醇、異丙醇、乙酸乙酯。
【文檔編號】C07D311/62GK104447662SQ201310434449
【公開日】2015年3月25日 申請日期:2013年9月23日 優先權日:2013年9月23日
【發明者】譚斌峰 申請人:青島中人智業生物科技有限公司