從中藥山茱萸中制備馬錢苷的方法
【專利摘要】本發明公開了一種從中藥山茱萸中制備馬錢苷的方法。該方法以中藥山茱萸為原料，通過乙醇加熱提取、大孔吸附樹脂純化、普通硅膠柱層析分離、重結晶等步驟得到馬錢苷，產品純度大于95%，提取率70.5~75.2%。
【專利說明】從中藥山茱萸中制備馬錢苷的方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及中藥【技術領域】，具體涉及一種從中藥山茱萸中制備環烯醚萜苷類活性物質的方法。
【背景技術】
[0002]山茱萸(Cbrzw1S officinalis Sieb.& Zucc.)系山茱萸科山茱萸屬的落葉喬木或灌木，廣泛分布于山西、陜西、甘肅、山東、江蘇、浙江、安徽、江西、河南、湖南等地，朝鮮、日本也有分布。其干燥成熟果肉即為中藥山茱萸，又名萸肉、山萸肉等，收載于2010版《中國藥典》，用于治療眩暈耳鳴，腰膝酸痛，陽痿遺精，遺尿尿頻，崩漏帶下，大汗虛脫，內熱消渴等。在臨床上使用廣泛，是六味地黃丸、知柏地黃丸、金匱腎氣丸、左歸丸、杞菊地黃丸、桂附地黃丸、益名地黃丸、濟陰地黃丸等多種復方或成藥的主要藥味，是一味非常具有研究和開發價值的補益肝腎的藥物。
[0003]環烯醚萜苷是中藥山茱萸的主要活性成分之一，其生物活性主要集中于免疫調節、降血糖、抗凝血、改善記憶等方面。通過系統的化學成分研究，目前已從中藥山茱萸中發現環烯醚職苷類化合物19個。馬錢苷(1ganin)是中藥山茱萸中環烯醚職苷類的主要成分，也是六味地黃丸等發揮藥理作用的主要有效成分之一，在藥材中的含量為0.379Γ1.22%，它具有免疫調節、抗炎、抗菌、鎮咳、祛痰等作用，同時，也是一些中成藥的重要原料。
[0004]從中藥山茱萸中制備馬錢苷的方法較少，且多是實驗室方法，步驟繁瑣，制備量低，多為毫克級。中國發明專利“一種從山茱萸中提取莫諾苷和馬錢苷的方法”，申請號N0.201010557777.X，該專利公開使用的方法為乙醇超聲提取，提取液用正丁醇萃取，萃取液用高速逆流色譜儀分離，流出液重結晶，但該方法需要使用特殊設備高速逆流色譜儀進行純化，且單次進樣量低。此外，文獻(趙新燕，周建民，秦學。制備型高效液相色譜法分離純化山茱萸中馬錢苷。機電信息。2011，32，13-14。)報道的方法為乙醇浸泡提取，提取液濃縮離心，取上清液用大孔吸附樹脂分離，流出液用正相硅膠柱層析分離得白色固體，白色固體用制備型高效液相色譜分離，但該方法用乙醇浸泡，提取效率低，且需要特殊設備制備型高效液相色譜儀，制備量低，難以實現規模化生產。
【發明內容】
[0005]本發明的目的是提供一種簡單易行，且適合工業化生產的從中藥山茱萸中制備馬錢苷的方法。
[0006]為了達到上述目的，本發明的技術方案為:
本發明以中藥山茱萸為原料，通過乙醇加熱提取、大孔吸附樹脂純化、普通硅膠柱層析分離、重結晶等步驟得到高純度的馬錢苷。
[0007]—種從中藥山茱萸中制備馬錢苷的方法，其特征在于該方法包括以下步驟:
A、取中藥山茱萸，粉碎，過40目篩，用8?10倍量的6(T70wt%乙醇加熱回流提取2?3次，各次提取液過濾，濾液合并，經減壓濃縮得總浸膏；
B、總浸膏加入廣3倍量水溶解，過濾，濾液上大孔吸附樹脂柱，先用廣3倍柱體積的水洗脫，棄去水洗脫液，再用廣3倍柱體積的2(T30 wt %乙醇洗脫，收集該洗脫液，減壓濃縮至干，得濃縮物；
C、濃縮物用硅膠柱層析分離，先分別用體積比15:1和12:1的氯仿-甲醇洗脫，每個極性段洗脫廣3個柱體積，棄去洗脫液，再用體積比10:1的氯仿-甲醇洗脫，通過薄層層析法檢測洗脫液，收集含有馬錢苷的洗脫液，減壓濃縮至干，得馬錢苷粗品；
D、馬錢苷粗品用甲醇加熱溶解，加入5?10倍乙酸乙酯，重結晶2?3次，干燥得到馬錢苷。
[0008]在本發明步驟A中，乙醇加熱溫度應低于70 °C。
[0009]在本發明步驟B中，大孔吸附樹脂選自D101、LSA30、HPlO以及AB-8中的任意一種。
[0010]在本發明步驟C中，硅膠為20(Γ300目的正相柱層析硅膠。
[0011]在本發明步驟D中，加熱溫度應低于60 °C。
[0012]使用本發明的方法，最終制備的馬錢苷產品純度大于95%，提取率70.5^75.2%。
[0013]本發明簡單易于操作，所得產品含量高，也不需要高速逆流色譜儀、高效液相制備色譜儀等特殊設備。
[0014]本發明的優點在于:(1)制備的產品純度高，且提取率較高。(2)整個制備過程，無需特殊設備。(2)具體操作簡便，成本低，且穩定可行。
【具體實施方式】
[0015]以下通過實施例來進一步說明本發明，但本發明并不局限于此實施例。
[0016]以下實施例中使用的試劑和儀器，除特別說明以外，均為普通市售。
[0017]實施例1:
取中藥山茱萸50 g，粉碎，過40目篩，用400 mL 65%乙醇加熱回流提取2次，各次提取液過濾，合并，經減壓濃縮得總浸膏27.1 g。總浸膏加入25 mL水溶解，過濾，濾液上大孔吸附樹脂柱，先用I倍柱體積水洗脫，棄去水洗脫液，再用3倍柱體積的30%乙醇洗脫，收集該洗脫液，減壓濃縮至干，得濃縮物3.8 g。用3 g正相柱層析硅膠拌樣，揮干溶劑，另取120g正相柱層析硅膠，用體積比15:1的氯仿-甲醇濕法裝于普通玻璃層析柱，加樣，先用體積比15:1和12:1的氯仿-甲醇梯度洗脫，每個梯度洗脫3個柱體積，再用體積比10:1的氯仿-甲醇洗脫，通過薄層層析法檢測流出液，收集氯仿-甲醇體積比5:1的薄層展開體系下Rf值約0.5，并在硫酸-乙醇顯色劑下顯紫紅色的餾分，減壓濃縮至干，得馬錢苷粗品。馬錢苷粗品用甲醇在50 °C下加熱溶解，加入8倍體積的乙酸乙酯，重結晶2次，干燥，得馬錢苷 158 mg。
[0018]實施例2:
取中藥山茱萸，粉碎，過40目篩，精確稱量200 g，用1800 mL 65%乙醇加熱回流提取2次，每次40分鐘。合并提取液過濾，濾液經減壓濃縮得總浸膏102.7 g。總浸膏加入100mL的純水溶解，過濾，濾液上大孔吸附樹脂柱。先用I倍柱體積水洗脫，棄去水洗脫液，再用3倍柱體積的30%乙醇洗脫，收集該洗脫液，減壓濃縮至干，得濃縮物14.3 g。用14 g正相柱層析硅膠拌樣，揮干溶劑，另取450 g正相柱層析硅膠，用體積比15:1的氯仿-甲醇濕法裝柱于普通玻璃層析柱，加樣，先用體積比15:1和12:1的氯仿-甲醇梯度洗脫，每個梯度洗脫3個柱體積，再用體積比10:1的氯仿-甲醇洗脫，通過薄層層析法檢測流出液，收集氯仿-甲醇體積比5:1的薄層展開體系下Rf值約0.5，并在硫酸-乙醇顯色劑下顯紫紅色的餾分，減壓濃縮至干，得馬錢苷粗品減壓濃縮至干，得馬錢苷粗品。馬錢苷粗品用甲醇在50°C下加熱溶解，加入10倍體積的乙酸乙酯，重結晶2次，干燥即得產品馬錢苷610 mg ο
[0019]實施例3:
取中藥山茱萸，粉碎，過40目篩，精確稱量5.0 kg，用40 L 65%乙醇加熱回流提取2次，每次40分鐘。合并提取液過濾，濾液經減壓濃縮得總浸膏2.4 kg。總浸膏加入2 L的純水溶解，過濾，濾液上大孔吸附樹脂柱。先用I倍柱體積水洗脫，棄去水洗脫液，再用3倍柱體積的30%乙醇洗脫，收集該洗脫液，減壓濃縮至干，得濃縮物0.36 kg。用300 g正相柱層析硅膠拌樣，揮干溶劑，另取10 kg正相柱層析硅膠，用體積比15:1的氯仿-甲醇濕法裝柱于普通玻璃層析柱，加樣，先用體積比15:1和12:1的氯仿-甲醇梯度洗脫，每個梯度洗脫3個柱體積，再用體積比10:1的氯仿-甲醇洗脫，通過薄層層析法檢測流出液，收集氯仿-甲醇體積比5:1的薄層展開體系下Rf值約0.5，并在硫酸-乙醇顯色劑下顯紫紅色的餾分，減壓濃縮至干，得馬錢苷粗品減壓濃縮至干，得馬錢苷粗品。馬錢苷粗品用甲醇在50°C下加熱溶解，加入8倍體積的乙酸乙酯，重結晶2次，干燥即得產品馬錢苷14.8 g0
【權利要求】
1.一種從中藥山茱萸中制備馬錢苷的方法，其特征在于該方法包括以下步驟: A、取中藥山茱萸，粉碎，過40目篩，用8?10倍量的6(T70wt%乙醇加熱回流提取2?3次，各次提取液過濾，濾液合并，經減壓濃縮得總浸膏； B、總浸膏加入廣3倍量水溶解，過濾，濾液上大孔吸附樹脂柱，先用廣3倍柱體積的水洗脫，棄去水洗脫液，再用廣3倍柱體積的2(T30 wt %乙醇洗脫，收集該洗脫液，減壓濃縮至干，得濃縮物； C、濃縮物用硅膠柱層析分離，先分別用體積比15:1和12:1的氯仿-甲醇洗脫，每個極性段洗脫廣3個柱體積，棄去洗脫液，再用體積比10:1的氯仿-甲醇洗脫，通過薄層層析法檢測洗脫液，收集含有馬錢苷的洗脫液，減壓濃縮至干，得馬錢苷粗品； D、馬錢苷粗品用甲醇加熱溶解，加入5?10倍乙酸乙酯，重結晶2?3次，干燥得到馬錢苷。
2.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟A中乙醇加熱溫度應低于70°C。
3.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟B中大孔吸附樹脂選自D101、LSA30、HPlO以及AB-8中的任意一種。
4.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟C中硅膠為20(Γ300目的正相柱層析硅膠。
5.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟D中加熱溫度應低于60°C。
【文檔編號】C07H17/04GK104447910SQ201310415843
【公開日】2015年3月25日 申請日期:2013年9月13日 優先權日:2013年9月13日
【發明者】師彥平, 解笑瑜, 陳娟 申請人:中國科學院蘭州化學物理研究所