專利名稱：一種達托霉素的分離純化方法
技術領域：
本發明涉及化合物的分離純化方法，更確切的說是一種分離、純化達托霉素的方法。
背景技術：
達托霉素(Daptomycin,商品名:Cubicin)是由Lilly (禮來)公司在20世紀80年代末最初研究，1997年由美國Cubist制藥公司開發的一類脂肽類抗生素，是目前全球首個成功開發的環脂肽類抗生素。2003年獲得美國FDA (U.S.Food and Drug Adminstration)批準用于治療革蘭氏陽性菌引起的復雜皮膚感染和結構性皮膚感染，并先后在美國、德國、英國和荷蘭上市。2006年美國FDA又批準了達托霉素的新適應癥，用于治療由金葡菌引起的心臟感染和菌血癥。達托霉素是玫瑰孢鏈霉菌(Streptomyces roseospours)發酵產物脂肽類化合物A21978C的N-葵酰基衍生物，為酸性環脂類抗生素。達托霉素含有13個氨基酸，其中10個氨基酸形成環十脂肽，另外3個氨基酸與癸酰基相連形成側鏈，其化學式=C72HltllN17O26,分子量:1620.67，結構式為:
權利要求
1.一種達托霉素的分離純化方法，其特征在于其包括如下步驟: a、用酸溶液調達托霉素發酵液pH2 5，加入助濾劑，攪拌均勻，過濾，得到菌絲液； b、將菌絲液加入碳原子數為>4的醇溶液中，浸泡I 3h，過濾，收集濾液；濾液中加入1±0.5%破乳劑進行破乳，靜置分層后，收集醇相萃取液； C、向醇相萃取液中加入堿溶液進行萃取,調pH7 10,靜置分層后,收集水相溶液； d、向水相溶液中加入0.1 0.5%活性炭，攪拌30-60min，過濾，得脫碳濾液；調脫碳濾液至pH2.5 5.8,再加入丁醇或正丁醇萃取,收集醇萃取液； e、醇萃取液中加入0.1 0.5%活性炭，攪拌30-60min，過濾，得到醇相脫碳液；減壓濃縮至有晶體析出；抽濾，真空干燥，得到達托霉素粗粉； f、將達托霉素粗粉溶解在純化水中，采用大孔樹脂進行層析，然后使用解析劑進行洗脫、解析；將解析液減壓濃縮后，導入層析介質柱進行吸附，然后使用解析劑進行洗脫、解析，留取解析液； g、濃縮解析液，加入結晶溶劑，結晶，抽濾，得到達托霉素濕粉； h、將達托霉素濕粉用純化水溶解，得達托霉素濕粉溶液；達托霉素濕粉溶液中加入結晶溶劑進行二次結晶、抽濾、干燥，得到高純度的達托霉素。
2.根據權利要求1所述達托霉素的分離純化方法，其特征在于a步驟所述的助濾劑為珍珠巖，其用量按質量體積比計是達托霉素發酵液的1_3%。
3.根據權利要求1所述達托霉素的分離純化方法，其特征在于b步驟所述的醇溶液為丁醇、正丁醇、異丁醇中的任意一種。
4.根據權利要求1所述達托霉素的分離純化方法，其特征在于b步驟所述的破乳劑為氯化鈉。
5.根據權利要求1所述達托霉素的分離純化方法，其特征在于c步驟中向醇相萃取液中加入純化水，其醇相萃取液與純化水的體積比為1:10 1:5。
6.根據權利要求1所述達托霉素的分離純化方法，其特征在于c步驟所述的堿溶液為磷酸氫二鉀、碳酸鈉、碳酸氫鈉或氫氧化鈉溶液中的一種。
7.根據權利要求1所述達托霉素的分離純化方法，其特征在于f步驟所述的大孔徑吸附樹脂D312、HZ801、HZ816或HZ818樹脂中的任意一種；所述解析劑為異丙醇，其加入量為柱體積的10倍。
8.根據權利要求1所述達托霉素的分離純化方法，其特征在于其中g步驟所述的結晶溶劑為異丙醇，其加入量為達托霉素濕粉溶液體積比的2-8倍。
9.根據權利要求1所述達托霉素的分離純化方法，其特征在于其f步驟所述的層析介質為硅藻土、硅膠、三氧化鋁、高分子微球。
全文摘要
本發明公開了一種分離、純化達托霉素的方法，具體步驟是用酸溶液調達托霉素發酵液，得到菌絲液；加入醇溶液中，收集醇相萃取液；向醇相萃取液中加入堿溶液進行萃取，收集水相溶液；向水相溶液中加入活性炭，加丁醇或正丁醇萃取，收集醇萃取液；醇萃取液中加入活性炭，減壓；抽濾，真空干燥，得到達托霉素粗粉；將達托霉素粗粉溶解在純化水中結晶，抽濾，得到達托霉素濕粉；將達托霉素濕粉用純化水溶解，進行二次結晶、抽濾、干燥，得到高純度的達托霉素。本方法工藝簡便，所采用的樹脂均為普通樹脂，所選用的溶劑毒性小、易回收重復利用；生產運行成本低，其所得到的產品的純度高、收率穩定；具有很好的工業化應用前景。
文檔編號C07K1/16GK103224547SQ201310158549
公開日2013年7月31日 申請日期2013年4月28日 優先權日2013年4月28日
發明者仲偉潭, 常亮, 李敏娜, 魏增輝, 王崔巖, 郭月玲, 張雪霞, 王力群, 梁冬, 時蕾 申請人:華北制藥集團新藥研究開發有限責任公司