專利名稱：快速分離純化丹參藥材中的丹參素的方法
技術領域：
本發明涉及醫藥應用領域，特別是涉及一種快速分離純化丹參藥材中的丹參素的方法。
背景技術：
丹參為唇形科鼠尾草屬植物(Salvia miltiorrhiza Bge.)丹參的干燥根部及根莖，具活血化瘀，涼血消腫，清心除煩之功效。臨床上證實丹參具有擴張血管、降血脂及抗動脈粥樣硬化、抑制血小板凝聚及抗血栓形成、及保護心肌、增加冠脈流量、抗菌消炎、抗腫瘤等作用。丹參中的活性成分可以分為脂溶性的丹參酮類和水溶性的丹酚酸類，其中，丹參素、丹酚酸B，、原兒茶醛、迷迭香酸為丹酚酸類的主要成分，二氫丹參酮，隱丹參酮，丹參酮I，丹參酮IIA為脂溶性的丹參酮類的主要成分，現代藥理學研究表明，丹參中酚酸類和丹參酮類成分均具有顯著的生物活性。丹參素(danshensu,DSS)又名D (+)-β-(3,4_ 二輕基苯基)乳酸,屬于酹酸類化合物，由于分子中具有活潑的羥基，因此，丹參素的溶液很容易發生氧化反應。丹參素的相對分子質量為198.17，分子式為C9HltlO515丹參素味苦，密度1.546，熔點84 86°C，難溶于氯仿、乙醚等有機溶劑，溶于水、乙醇。丹參素是一種藥理活性廣泛、高效、低毒的化合物，藥理學試驗表明，1、丹參素具有縮小心肌梗死范圍、降低心肌梗死程度、減少心肌酶的釋放和縮短病程的作用，同時對心肌缺血/再灌注損傷具有保護作用。2、丹參素可明顯改善腦缺血神經功能缺損體征，減輕腦組織病理形態學損傷，降低神經細胞凋亡百分率。3、抗動脈粥樣硬化、血栓形成作用。4、抗腫瘤作用。5、抗炎作用。總之，丹參素在心腦血管系統疾病和腫瘤防治等方面具有廣闊開發前景和臨床應用價值。
目前，提取分離丹參素的方法較多。其中高純度丹參素的制備方法專利主要有:CN101289385A從丹參中提取高純度丹參素的方法；
CN101434534A 丹參素鈉純品的制備方法；
CN1868994A 一種丹參素鈉的制備方法；
CN101445451A 一種高純度丹參素鈉的制備方法；
CN102336652A 一種規模化制備高純度丹參素鈉的方法；
CN102464581A 一種制備高純度丹參素鈉的方法。上述的六項專利，樣品的預處理過程無太大區別，都是采用常規的方法，即水提(或稀堿)、醇沉、水洗、濃縮成適當比重的清膏。主要的區別在于分離純化所采用的樹脂類型的不同，其中包括大孔吸附樹脂柱，陰陽離子交換樹脂柱等，采用一根柱或兩個性質不同的樹脂柱來串聯完成，主要的作用是對樣品進行吸附，以水為洗脫液，來除去水溶性雜質。單憑上述的手段，無法來達到丹參素的純度要求，而專利的關鍵純化步驟在于最后幾步都采用了色譜分離技術手段，包括使用葡聚糖凝膠柱、硅膠柱、C18、CS、C4等手段，通過重結晶，使丹參素的達到很高的純度。
上述的六項專利的不足之處在于操作過程復雜，實驗條件要求苛刻，操作不易控制，由于多次采用了柱吸附分離過程，損失較大，使得產品收率較低，并在過程中引入了大量的有機溶劑，操作步驟僅限于實驗室，產品不能實現產業化。
發明內容
本發明主要解決的技術問題是提供一種快速分離純化丹參藥材中的丹參素的方法，能夠使得丹參素純化過程的步驟簡化，縮短時間，避免溶劑毒性大的問題，提高產品收率，實現產業化生產。為解決上述技術問題，本發明采用的一個技術方案是:提供一種快速分離純化丹參藥材中的丹參素的方法，所述方法步驟如下:
1)、丹參飲片用常規方法熱提取，時間I小時，提取兩次，合并提取液；
2)、提取液用鹽酸調pH至2，濃縮至相對密度為1.20，冷卻，加乙醇醇沉二次，10°C以下靜置4小時，過濾，濾液回收乙醇至無醇味，濃縮至相對密度為1.20至1.22的清膏；
3)、上述的清膏用聚酰胺樹脂柱吸附分離；
4)、收集丹參素流分，用活性炭吸附后，過濾，濾液用碳酸氫鈉調pH值為5-6，于40-50°C低溫減壓(通氮氣保護)濃縮至相對密度為1.15-1.18，冷凍干燥；
5)、用乙醇重結晶，即得高純度的丹參素。優選的是，所述的步驟I)常規方法是指采用水提醇沉的方法。
優選的是，所述的步驟2)醇沉濃度是第一次使含醇量達60%，第二次使含醇量達80%。優選的是，所述的步驟3)聚酰胺樹脂的粒度為60-100目，用量為:樹脂:清膏=10-20:1，樹脂柱的徑高比為I:20o優選的是，所述的步驟3)吸附分離的洗脫液為10%_50%的甲酸或乙酸。優選的是，所述的步驟4)活性炭的用量為溶液體積的2%_3%。優選的是，所述的步驟4)低溫減壓過程通氮氣保護。本發明的有益效果是:本發明快速分離純化丹參藥材中的丹參素的方法，本方法不需要大孔樹脂的初步提純，由于丹參素是多羥基酚酸類化合物，通過控制色譜分離條件，可以直接進行聚酰胺色譜分離，因此，可以收集到丹參素純品流分，而不是混合物，這樣使分離、純化一步完成，使得操作簡便易行。整個過程中只用了鹽酸、乙醇、乙酸、活性炭，保證了產品安全、無毒。
具體實施例方式下面對本發明的較佳實施例進行詳細闡述，以使本發明的優點和特征能更易于被本領域技術人員理解，從而對本發明的保護范圍做出更為清楚明確的界定。本發明實施例包括:
一種快速分離純化丹參藥材中的丹參素的方法，所述方法步驟如下:
1)、丹參飲片采用水提醇沉的方法熱提取，時間I小時，提取兩次，合并提取液；
2)、提取液用鹽酸調pH至2，濃縮至相對密度為1.20，冷卻，加乙醇醇沉二次，醇沉濃度是第一次使含醇量達60%，第二次使含醇量達80%，IO0C以下靜置4小時，過濾，濾液回收乙醇至無醇味，濃縮至相對密度為1.20至1.22的清膏；
3)、上述的清膏用聚酰胺樹脂柱吸附分離，聚酰胺樹脂的粒度為60-100目，用量為:樹脂:清膏=10-20:1，樹脂柱的徑高比為1:20，吸附分離的洗脫液為10%-50%的甲酸或乙酸；
4)、收集丹參素流分，用溶液體積的2%-3%活性炭吸附后，過濾，濾液用碳酸氫鈉調pH值為5-6，于40-50°C低溫減壓通過通氮氣保護濃縮至相對密度為1.15-1.18，冷凍干燥；
5)、用乙醇重結晶，即得高純度的丹參素。實施例1:
丹參飲片I kg，加8Kg水煎煮2次，每次各I小時，合并煎液。用鹽酸調pH至2并濃縮至相對密度為1.20的清膏，冷卻，加乙醇使含醇量為60%，靜置，過濾，濾液濃縮至相對密度為1.20的清膏，再加乙醇使含醇量為80%，IO0C以下靜置4小時，過濾，濾液回收乙醇至無醇味，濃縮至相對密度為H的清膏。上聚酰胺樹脂柱吸附(樹脂用量為膏重的10倍，柱的徑高比為I =20),以20%甲酸洗脫，高效液相色譜跟蹤監控，收集丹參素流分。加入⑩的活性炭吸附后，過濾，濾液用碳酸氫鈉調PH值為5-6，于40-50°C低溫減壓(通氮氣保護)濃縮至相對密度為1.15 ,冷凍干燥。用乙醇重結晶，即得純度為98.6%的丹參素,收率為1.8%。實施例2:
丹參飲片2 kg，加16Kg水煎煮2次，每次各I小時，合并煎液。用鹽酸調pH至2并濃縮至相對密度為1.20的清膏，冷卻，加乙醇使含醇量為60%，靜置，過濾，濾液濃縮至相對密度為1.20的清膏，再乙醇使含醇量為80%，10°C以下靜置4小時，過濾，濾液回收乙醇至無醇味，濃縮至相對密度為 的清膏。清膏上聚酰胺樹脂柱(樹脂用量為膏重的邊倍，柱的徑高比為1:20)吸附，以10%乙酸洗脫，高效液相色譜跟蹤監控，收集丹參素流分。加入3%的活性炭吸附后，過濾，濾液用碳酸氫鈉調pH值為5-6，于40-50°C低溫減壓(通氮氣保護)濃縮至相對密度為1.15，冷凍干燥。用乙醇重結晶，即得純度為的99.1%丹參素，收率為 1.7%。實施例3:
丹參飲片5 kg，加40Kg水煎煮2次，每次各I小時，合并煎液。用鹽酸調PH至2并濃縮至相對密度為1.20的清膏，冷卻，加乙醇使含醇量為60%，靜置，過濾，濾液濃縮至相對密度為1.20的清膏，再乙醇使含醇量為80%，IO0C以下靜置4小時，過濾，濾液回收乙醇至無醇味，濃縮至相對密度為1.20至1.22的清膏。清膏上聚酰胺樹脂柱(樹脂用量為膏重的邊倍，柱的徑高比為I:20)吸附，以30%乙酸洗脫，高效液相色譜跟蹤監控，收集丹參素流分。加入的活性炭吸附后，過濾，濾液用碳酸氫鈉調PH值為5-6，于40-50°C低溫減壓(通氮氣保護)濃縮至相對密度為1.17，冷凍干燥。用乙醇重結晶，即得純度為的98.8%丹參素,收率為2.0%。實施例4:
丹參飲片5 kg，加40Kg水煎煮2次，每次各I小時，合并煎液。用鹽酸調PH至2并濃縮至相對密度為1.20的清膏，冷卻，加乙醇使含醇量為60%，靜置，過濾，濾液濃縮至相對密度為1.20的清膏，再乙醇使含醇量為80%，IO0C以下靜置4小時，過濾，濾液回收乙醇至無醇味，濃縮至相對密度為1.20至1.22的清膏。清膏上聚酰胺樹脂柱(樹脂用量為膏重的15倍，柱的徑高比為1:20)吸附，以50%乙酸洗脫，高效液相色譜跟蹤監控，收集丹參素流分。加入避的活性炭吸附后，過濾，濾液用碳酸氫鈉調pH值為5-6，于40-50°C低溫減壓(通氮氣保護)濃縮至相對密度為1.18，冷凍干燥。用乙醇重結晶，即得純度為的99.3%丹參素，收率為1.9%。本發明快速分離純化丹參藥材中的丹參素的方法，本方法不需要大孔樹脂的初步提純，由于丹參素是多羥基酚酸類化合物，通過控制色譜分離條件，可以直接進行聚酰胺色譜分離，因此，可以收集到丹參素純品流分，而不是混合物，這樣使分離、純化一步完成，使得操作簡便易行。整個過程中只用了鹽酸、乙醇、乙酸、活性炭，保證了產品安全、無毒。以上所述僅為本發明的實施例，并非因此限制本發明的專利范圍，凡是利用本發明說明書內容所作的等效 結構或等效流程變換，或直接或間接運用在其他相關的技術領域，均同理包括在本發明的專利保護范圍內。
權利要求
1.一種快速分離純化丹參藥材中的丹參素的方法，其特征在于:所述方法步驟如下: 1)、丹參飲片用常規方法熱提取，時間I小時，提取兩次，合并提取液； 2)、提取液用鹽酸調pH至2，濃縮至相對密度為1.20，冷卻，加乙醇醇沉二次，10°C以下靜置4小時，過濾，濾液回收乙醇至無醇味，濃縮至相對密度為1.20至1.22的清膏； 3)、上述的清膏用聚酰胺樹脂柱吸附后洗脫液分離； 4)、收集丹參素流分，用活性炭吸附后，過濾，濾液用碳酸氫鈉調pH值為5-6，于40-50°C低溫減壓濃縮至相對密度為1.15-1.18，冷凍干燥； 5)、用乙醇重結晶，即得高純度的丹參素。
2.根據權利要求1所述的快速分離純化丹參藥材中的丹參素的方法，其特征在于:所述的步驟I)常規方法是指采用水提醇沉的方法。
3.根據權利要求1所述的快速分離純化丹參藥材中的丹參素的方法，其特征在于:所述的步驟2)醇沉濃度是第一次使含醇量達60%，第二次使含醇量達80%。
4.根據權利要求1所述的快速分離純化丹參藥材中的丹參素的方法，其特征在于:所述的步驟3)聚酰胺樹脂的粒度為60-100目，用量為樹脂:清膏=10-20:1，樹脂柱的徑高比為 1:20。
5.根據權利要求1所述的快速分離純化丹參藥材中的丹參素的方法，其特征在于:所述的步驟3)吸附分離的洗脫液為10%-50%的甲酸或乙酸。
6.根據權利要求1所述的快速分離純化丹參藥材中的丹參素的方法，其特征在于:所述的步驟4)活性炭的用量為溶液體積的2%-3%。
7.根據權利 要求1所述的快速分離純化丹參藥材中的丹參素的方法，其特征在于:所述的步驟4)低溫減壓過程通氮氣保護。
全文摘要
本發明公開了一種快速分離純化丹參藥材中的丹參素的方法，其方法步驟如下1)、丹參飲片用常規方法熱提取；2)、提取液加酸調pH后加乙醇醇沉二次，回收乙醇至無醇味；3)、醇提物用聚酰胺樹脂吸附分離；4)、收集丹參素流分，用活性炭吸附后，過濾，濾液用碳酸氫鈉調pH值為5-6，低溫減壓濃縮；5)、用乙醇重結晶，即得高純度的丹參素。通過上述方式，本發明工藝步驟簡便易行，只采用一種樹脂即可達到吸附、分離純化一步完成，所使用的溶劑無毒，安全，可靠，產品純度高、成本低，適合于工業化大生產。
文檔編號C07C51/42GK103145548SQ201310101649
公開日2013年6月12日 申請日期2013年3月27日 優先權日2013年3月27日
發明者劉臣 申請人:蘇州市職業大學