用于特異性調節丙酮酸脫氫酶激酶的組合物和方法

用于特異性調節丙酮酸脫氫酶激酶的組合物和方法【專利摘要】本發明提供一種肽組合物，所述肽組合物特異地抑制δ-蛋白激酶C(δPKC)在缺血條件下磷酸化丙酮酸脫氫酶激酶(PDK)的能力。所述肽組合物對治療和減少由缺血和/或再灌注引起的組織損傷是有用的。【專利說明】用于特異性調節丙酮酸脫氫酶激酶的組合物和方法[0001]對相關申請的交叉引用[0002]本申請要求于2011年8月12日提交的美國臨時申請號61/523，167的優先權，其內容通過引用完整地結合于此。[0003]關于聯邦資助研究的聲明[0004]本發明在由國立衛生研究院授予的合同HL52141下由政府支持完成。政府在本發明中有某些權利。[0005]對序列表的交叉引用[0006]序列表以2012年8月10日創立的文本文件的形式通過EFS電子提交，并命名為586008271W000seqlist.txt(29309字節)，其內容通過引用完整地結合于此。【
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】[0007]本公開總體上涉及δPKC磷酸化丙酮酸脫氫酶激酶(TOK)的肽調節劑及其用于治療心臟缺血(cardiacischemia)和再灌注損傷(reperfusioninjury)的方法。[0008]背景[0009]蛋白-蛋白相互作用對于生物學過程是重要的，決定所有細胞信號傳導事件的特異性，并且因此提供一類重要的藥物靶點。然而，蛋白-蛋白相互作用位點在各個相應的蛋白中形成大而平的界面(750-丨500Λ)而不是小的疏水的，更‘可成藥的(drugable)’口袋。因此，尋找蛋白-蛋白相互作用的小分子抑制劑已被證明是一種挑戰(Arkin等,2004,Nat.Rev.DrugDiscov.,3:301-317)。[0010]PKC同工酶家族的成員依賴于脂-來源的第二信使(對于一些同工酶也依賴于鈣)，所述第二信使誘導構象改變，將酶從無活性狀態改變為活性狀態。PKC激活還與激活的酶向其伴侶蛋白(RACK(對于激活的C-激酶的受體))的遷移有關，所述伴侶蛋白利于酶遷移(Ron等，1999，J.Biol.Chem.，274:27039-27046)到不同的亞細胞位點(Mochly-Rosen,1995，Science,268:247-251)。已確定PKC的調節區中的C2結構域介導至少一些對其RACK的結合(Smith等,1992,Biochem.Biophys.Res.Commun.,188:1235-1240;Johnson等，1996，J.Biol.Chem.，271:24962-24966);每個PKC同工酶中的高度保守的C2結構域內的獨特序列(例如，βC2-4，δVl-1和εV1-2(Ron等，1995，J.Biol.Chem.，270:24180-24187;Chen等，Proc.Natl.Acad.Sc1.USA,98:11114-11119;Gray等，1997，J.Biol.Chem.，272:30945-30951)是這些相互作用位點的一部分。代表這些獨特序列(例如，SV1-1)的肽用作競爭性抑制劑，抑制相應的同工酶與其RACK的結合并因此抑制給定的同工酶的所有功能。另一方面，抑制性分子內蛋白-蛋白相互作用保持酶在失活狀態。已顯示，至少一種這樣的分子內相互作用發生在PKC中的RACK-結合位點和酶中與其RACK同源的被稱為假RACK(ΨRACK)的序列之間(Dorn等，1999，Proc.Natl.，Acad.Sc1.，96:12798-12803)。對應于該WRACK位點的肽與分子內抑制性相互作用競爭，因此充當相應的同工酶的選擇性激活劑。[0011]已知SPKC調節肽在心臟缺血和再灌注損傷(即，心臟病發作誘導的損傷)中起重要作用。以前已顯示，在各種心肌梗塞(myocardialinfarction)的動物模型包括小鼠和大鼠(Chen等，Proc.Natl.Acad.Sc1.USA,98:11114-11119)，豬(Inagakietal,2003，Circulation,108:2304-2307)和可能地人(Bates等，2008，Circulation,117:886-896)中，在缺血事件后用ΨδRACK(δPKC-特異性激活劑)治療，增加δPKC-介導的心臟損傷，而用δVl-1(δPKC特異性抑制劑)治療，阻斷了該損傷(Chen等，Proc.Natl.Acad.Sc1.USA,98:11114-11119)。[0012]很多SPKC的底物已在各種細胞類型中鑒定出并且發現它們在不同的亞細胞位置。進一步，已證明缺血(ischemia)和再灌注誘導一些激活的SPKC遷移到線粒體中(Churchill等，2005，Cir.Res.，97:78-85)，導致增加的線粒體內的酶丙酮酸脫氫酶激酶O3DK)的磷酸化。PDK磷酸化丙酮酸脫氫酶(TOH)引起降低的PDH活性，從而導致TCA循環和ATP再生的抑制。研究已表明心臟效率和缺血后心臟中的收縮功能的恢復可以通過藥理學刺激PDH改善(Lewandowski等,1995,Circulation,91:2017-2079;Schoder等，1998,BiochimBiophys.Acta.，1406:62-72)。然而，不清楚通過SPKC的單獨的PDK的磷酸化是否是造成缺血和再灌注(Ι/R)后心臟損傷的原因。可能的是，任何其它SPKC底物，單獨地或與PDK—起，可能促成該損傷或對該損傷是關鍵的。[0013]為了確定δPKC-介導的PDK磷酸化對于Ι/R導致的心臟損傷的重要性，設計了肽抑制劑，其選擇性抑制通過δPKC的roK磷酸化而不影響該同工酶的其它底物的磷酸化。因為TOK自身的選擇性的抑制劑和激活劑是不可獲得的，所以SPKC的此種功能分離的抑制劑既提供解決上述問題的重要工具也提供作為用于治療至少由缺血和再灌注導致的組織損傷的治療組合物的基礎。[0014]簡要概要[0015]在第一個方面中，提供一種調節肽，其中所述肽包含核心氨基酸序列，其中所述核心序列長度為5個氨基酸殘基，且其中所述核心序列與序列ALSTE(SEQIDNO:1)具有至少60%同一性。[0016]在一個實施方案中，所述核心序列長度為6個氨基酸殘基，且所述核心序列與序列ALSTER(SEQIDNO:2)具有至少60%同一性。[0017]在一個實施方案中，所述調節肽由5-20個氨基酸殘基組成。在另一個實施方案中，所述調節肽由5-15個氨基酸，5-10個氨基酸，6-15個氨基酸，6-10個氨基酸，或6_8個氨基酸組成。在另一個實施方案中，所述調節肽包含5個氨基酸，6個氨基酸，7個氨基酸，8個氨基酸，9個氨基酸，10個氨基酸，11個氨基酸，12個氨基酸，13個氨基酸，14個氨基酸，或15個氨基酸。[0018]在一個實施方案中，所述調節肽與源自丙酮酸脫氫酶激酶(PDK)的相同長度的鄰接的序列具有至少約60%同一性。在另一個實施方案中，所述調節肽與源自PDK的相同長度的鄰接的序列具有至少約70%，80%,85%,90%,95%,96%,97%,98%或99%同一性。[0019]在一個實施方案中，所述調節肽不是ALSTERGKTLV(SEQIDNO:43)，ALSTDRGKTLV(SEQIDNO:44)，ALTTDRGKTLV(SEQIDNO:45)，ALTTDRGRTLV(SEQIDNO:46)，ALTTDRGKSLV(SEQIDNO:47)，ALTSDRGKTLV(SEQIDNO:48)，ALTTDRPKTLV(SEQIDNO:49)，ALTTDKGKTL(SEQIDNO:50)和/或ALTTDRGKLV(SEQIDNO:51)。[0020]在一個實施方案中，所述調節肽抑制δ-蛋白激酶c(δPKC)磷酸化roK。在另一個實施方案中，所述調節肽特異性地抑制SPKC磷酸化TOK。[0021]在一個實施方案中，所述調節肽還包含含硫殘基。在另一個實施方案中，所述含硫殘基是半胱氨酸。在另一個實施方案中，所述含硫殘基是半胱氨酸類似物。[0022]在一個實施方案中，所述含硫殘基位于所述調節肽的N末端和/或C末端。在另一個實施方案中，所述含硫殘基內部殘基。[0023]在一個實施方案中，所述調節肽連接于載體肽。[0024]在一個實施方案中，所述調節肽通過二硫鍵連接于載體肽。在另一個實施方案中，所述調節肽通過肽鍵連接于載體肽，其中所述調節肽和載體形成單一的調節融合肽。[0025]在一個實施方案中，所述載體肽為TAT肽。在另一個實施方案中所述載體肽為TAV57(SEQIDN0:33)。在另一個實施方案中，所述載體肽還包含含硫殘基。在另一個實施方案中，所述含硫殘基為半胱氨酸。在另一個實施方案中，所述含硫殘基為半胱氨酸類似物。在另一個實施方案中，所述載體肽還包含通過肽鍵連接于其C末端(SEQIDNO:52)或N末端(SEQIDN0:53)的半胱氨酸殘基。在另一個實施方案中，存在半胱氨酸殘基，備選的是半胱氨酸殘基在SEQIDNO:33內的任何位置處的存在。[0026]在第二個方面，提供一種方法用于調節I3DK的活性。[0027]在第三個方面，提供一種用于治療受試者的方法，所述方法包括施用選擇性δPKC調節組合物。[0028]在一個實施方案中，所述方法包括向有此需要的受試者施用ΨΡ?Κ調節肽。[0029]在一個實施方案中，所述受試者患有心血管疾病，心臟缺血，心臟缺血/再灌注損傷，心肌梗塞，慢性穩定性咽峽炎(chronicstableangina),或急性冠狀動脈綜合征(acutecoronarysyndrome)。在另一個實施方案中，受試者正經歷或經歷過心臟移植。[0030]當與一下詳細描述一起閱讀時，本發明的這些和其它目的和特征將變得更完全的顯現。[0031]附圖簡述[0032]圖1A示意性顯示關于在存在或不存在第二信使或調節劑肽的情況下PKC遷移和活性的調節的機理。[0033]圖1B顯示源自不同物種的人Η)Κ2的部分序列與人δPKC的部分序列的氨基酸序列比對。[0034]圖1C顯示PDK2的3D結構。[0035]圖1D顯示源自不同物種的δPKC的部分序列的氨基酸序列比對。[0036]圖1E顯示源自不同物種的Η)Κ2的部分序列的氨基酸序列比對。[0037]圖1F顯示ε-，δ-，和Θ-PKCC2結構域的氨基酸序列比對，還顯示每種同工酶的同工酶-特異性抑制劑(頂部)和激活劑(底部)。[0038]圖1G顯示θ-，δ-，和ε-PKC蛋白的二級結構。[0039]圖2Α顯示通過二硫鍵連接于TAT肽(SEQIDNO:33；YGRKKRRQRRR)的ΨΡ?Κ肽(SEQIDNO:2；ALSTER)的化學結構。半胱氨酸殘基存在(通過肽鍵)于SEQIDNO:33的C末端和SEQIDNO:2的C末端。[0040]圖2B顯示通過肽鍵和GSG間隔區(SEQIDNO:42；YGRKKRRQRRRGSGALSTER)連接于TAT肽的ΨΡ?Κ肽的化學結構。[0041]圖2C-D是蛋白質印跡，其顯示各種肽對在野生型成纖維細胞(圖2C)或在源自sPKC敲除小鼠的成纖維細胞(圖2D)中的MARCKS磷酸化的影響。[0042]圖3A-B顯示ΨΗ)Κ肽對通過δPKC的TOK2(圖3Α)或Drpl(圖3Β)的磷酸化的影響。[0043]圖3C-D顯示ΨΡ?Κ肽對通過蛋白酶K(PK)的δPKC(圖3C)，β1-PKC(圖3D)或εPKC(圖3D)蛋白水解的敏感性的影響。[0044]圖4Α是示意圖，其顯示涉及在存在(+)或不存在(_)肽的情況下，模擬心肌梗塞的缺血和再灌注的方案的時間范圍。[0045]圖4Β顯示ΨΗ)Κ肽對Ι/R誘導的δPKC的遷移的影響。[0046]圖4B-C顯示使用蛋白酶K的測定的結果以證明用ΨΡ?Κ肽治療后δPKC進入線粒體。[0047]圖5Α為概述在由Ι/R導致的δPKC激活之后的級聯事件的示意圖。[0048]圖5B-D顯示測量PDK2(圖5Β)，PDH(圖5C)和ALDH2(圖5D)的磷酸化的2_DIEF凝膠測定的結果。[0049]圖5Ε顯示測量在有或沒有ΨΗ)Κ肽的情況下經受Ι/R的心臟中MARCKS(左圖)和Drpl(右圖)的磷酸化的磷酸化測定的結果。[0050]圖6Α顯示用ΨΡ?Κ肽治療對心臟組織中梗塞大小的影響。[0051]圖6Β為顯示在再灌注的頭30分鐘期間由遭受Ι/R損傷的心臟釋放到灌注液中的CPK的水平的圖表。[0052]圖6C-D顯示在再灌注后經受Ι/R損傷的心臟中的磷酸化的JNK和總JNK的蛋白質印跡分析的結果。結果的定量顯示于圖6D中。[0053]圖6Ε顯示對在體外Ι/R模型中對照和實驗肽對δPKC向線粒體的遷移的影響和對心臟保護的影響的概括。[0054]圖7顯示測定的結果，所述測定顯示通過經由二硫鍵(3-4道)或經由肽鍵和間隔區(5-6道)連接于載體肽的ΨΡ?Κ肽的MARCKS的磷酸化。[0055]圖8為概括ΨΗ)Κ肽對δPKC遷移和活性的影響的示意圖。SI表示MARCKS。S2表示F1DK15[0056]詳細描述[0057]在下文中將更充分的描述各個方面。然而這些方面可能以很多不同的形式具體表達并不應該理解為限于在此陳述的實施方案；相反的，提供這些實施方案以至于本公開將徹底和完全，并且將充分的向那些本領域技術人員傳達其范圍。[0058]本公開內容的實施將使用本領域技術范圍內的化學，生物化學，和藥理學的常規方法。這些技術已在文獻中充分解釋。參見，例如；A.L.Lehninger,Biochemistry(WorthPublishers,Inc.,最新版)；Morrison和Boyd,OrganicChemistry(AlIynandBacon,Inc.,最新版)；J.March,AdvancedOrganicChemistry(McGrawHill,最新版)；Remington:TheScienceandPracticeofPharmacy,A.Gennaro,Ed.,20thEd.；Goodman&GiImanThePharmacologicalBasisofTherapeutics,J.GriffithHardman,L.L.Limbird,A.Gilman,第10版。[0059]其中提供了數值范圍，意圖是每個介于所述范圍的上限和下限的中間值或任何其它規定的或在規定范圍內的中間值包括在公開的范圍內。例如，如果范圍規定為1%到8%，意圖是2%，3%，4%，5%，6%和7%也明確地公開了，同樣公開的是大于或等于1%的值的范圍和小于或等于8%的值的范圍。[0060]1.定義[0061]必須指出，除非上下文明確另有指示，當在本文和在所附權利要求中使用時，單數形式〃一個(a)〃，〃一個(an)〃和〃所述(the)〃包括復數所指。[0062]除非另有限定，所有在此使用的技術和科學術語具有與由一個本發明所屬領域中普通技術人員通常的理解相同的含義。盡管類似于或等同于在此描述的那些的所有方法和材料可以用于實施或測試本發明，現在描述優選的方法，裝置和材料。本文提及的所有出版物通過引用結合于此以用于描述和公開在出版物中報道的可能與本發明關聯使用的方法學。[0063]當在本文中使用時，術語“基本上純的”是指這樣的核酸或氨基酸序列，所述核酸或氨基酸序列離開其天然環境，被分開或被分離，并且至少60%，優選75%，更優選90%，并且最優選95%脫離與其天然結合或由于純化過程而與其結合的其它組分。[0064]“肽〃和〃多肽〃在此可互換使用并且指由通過肽鍵連接的氨基酸殘基的鏈組成的化合物。除非另有陳述，肽的序列以從氨基端到羧基端的順序給出。當在本文中使用時，"取代"指一個或多個氨基酸分別由不同的氨基酸替代。"保守氨基酸取代"是不導致選擇的多肽的活性或三級結構的顯著改變的取代。保守氨基酸取代可以在氨基酸序列中進行以獲得肽的衍生物，所述衍生物可以有利地用在本發明中。如本領域已知的和在此涉及的保守氨基酸取代包括用在例如，結構、大小和/或化學性質方面具有類似側鏈的氨基酸取代蛋白質中的氨基酸。例如，以下組中的每個內的氨基酸可以與同組中的其它氨基酸交換如下:具有脂肪族側鏈的氨基酸，包括甘氨酸，丙氨酸，纈氨酸，亮氨酸和異亮氨酸；具有非芳組含羥基側鏈的氨基酸，如絲氨酸和蘇氨酸；具有酸性側鏈的氨基酸，如天冬氨酸和谷氨酸；具有酰胺側鏈的氨基酸，包括谷氨酰胺和天冬氨酸；堿性氨基酸，包括賴氨酸，精氨酸和組氨酸；具有芳香環側鏈的氨基酸，包括苯基丙氨酸，酪氨酸和色氨酸；和具有含硫側鏈的氨基酸，包括半胱氨酸和甲硫氨酸。此外，在此也認為天冬氨酸，谷氨酸和其酰胺可以互換。[0065]當在本文中使用時，〃插入(insertion)〃或〃添加(addition)〃指與天然存在的分子相比，導致增加一個或多個氨基酸殘基的氨基酸序列的改變。[0066]當在本文中使用時〃缺失(deletion)"指導致一個或多個氨基酸殘基缺失的氨基酸序列的改變。[0067]第一氨基酸序列的〃變體(variant)〃指相對于第一氨基酸序列具有一個或多個氨基酸取代或缺失的第二氨基酸序列。[0068]氨基酸序列的〃修飾(modifition)〃或〃修飾的(modified)〃氨基酸序列指由向序列的N末端或C末端中任一增加一個或多個氨基酸殘基產生的氨基酸序列。“修飾”還可以指對在肽序列內一個或多個氨基酸的化學修飾，如氨基酸類似物的摻入。氨基酸類似物可以是天然存在的類似物或合成的。[0069]當在本文中使用時，術語〃調節(modulate)〃或“調節(regulate)”指丙酮酸脫氫酶激酶(F1DK)的活性方面的改變。例如，調節(modulate)或調節(regulate)可能引起F1DK的蛋白質活性、結合特性或任何其它生物的、功能的或免疫學性質方面的增加或減少。[0070]在此涉及的〃氨基酸序列與另一個序列具有'X'百分比同一性〃意味著序列具有如以下陳述所確定的，指定的百分比同一性'X'，并且共享共同的功能活性。為了測定兩條氨基酸序列的百分比同一性，比對序列以為了最佳比較的目的(例如，可以在第一和第二氨基酸序列的一個或兩者中引入間隙(gap)以為了最佳比對且為了比較可以忽略非同源序列)。在優選的實施方案中，用于比較目的的比對的參考序列的長度為參考序列的長度的至少30%，優選至少40%，更優選至少50%，甚至更優選至少60%，和甚至更優選至少70%，75%，80%,85%，90%或95%。對于在此描述的相對短的肽序列，百分比同一性理解為相對于第一和第二序列中更長的那個的殘基總數的第一和第二序列之間相似殘基的數量。序列的比較和兩條序列之間的百分比同一性的確定還可以使用數學算法完成。兩條氨基酸序列之間的百分比同一性可以使用Needleman和Wunsch(J.Mol.Biol.,48:444-453(1970))算法測定，所述算法已整合入GCG軟件包(可在www.gcg.com獲得)中的GAP程序中，使用Blosum62矩陣或PAM250矩陣(且間隙權重為16，14，12，10，8，6或4而長度權重為1,2,3,4，5或6)。兩條氨基酸序列之間的百分比同一性還可以使用E.Meyers和W.Mi11er(CABIOS，4:11-17(1989))的算法測定，所述算法已被整合入ALIGN程序(版本2.0)中，使用PAM120重量殘基表(PAM120weightresiduetable)(間隙長度罰分為12且間隙罰分為4)。蛋白序列可以進一步用作〃查詢序列〃以進行針對公共數據庫的檢索；例如，BLAST蛋白檢索可以用XBLAST程序進行，得分=50,詞長=3。參見www.ncb1.nlm.nih.gov。[0071]〃缺血(ischemia)〃定義為向特定器官或組織供血不足。降低的血液供給的結果是向器官或組織的氧和營養供給不足(缺氧)。延長的組織缺氧可能導致對影響的器官或組織的損傷。[0072]“缺氧(anoxia)〃指在器官或組織中實質上完全不存在氧，其如果被延長，則可能導致器官或組織的壞死。[0073]〃低氧狀態(hypoxiccondition)〃定義為這樣的狀態，在該狀態下特定的器官和組織接收不充足的氧供應。[0074]“缺氧狀態(anoxiccondition)〃指這樣的狀態，在該狀態下向特定的器官或組織的氧供應被切斷。[0075]〃缺血損傷(ischemicinjury)〃指作為缺血期的結果的對器官或組織的細胞的和/或分子的損傷。[0076]〃再灌注(reperfusion)〃指在無流動或減少的流動周期后液流向組織內的返回。例如，在心臟的再灌注中，在除去對液體或血液供給的阻塞后，液體或血液通過供給線如體內冠狀動脈返回至心臟。[0077]術語“丙酮酸脫氫酶激酶”或“PDK”指4種已知TOK同工酶中的任何一種。四種已知的人同工酶包括PDKl(GenBank登陸號NP_002601；SEQIDNO:11)，PDK2(GenBank登陸號NP_002602；SEQIDNO:12)，PDK3(GenBank登陸號NP_001135858；SEQIDNO:13)和PDK4(GenBank登陸號NP_002603；SEQIDNO:14)IDK還可以指源自其它生物的PDK同工酶，其他生物包括但不限于，大鼠，小鼠和雞。在一些實施方案中，PDK可以指具有與人TOK1，PDK2,PDK3或PDK4蛋白序列具有至少60%，65%,70%,75%,80%,85%,90%或95%同一性的序列的蛋白。[0078]“特異性的”或“特異性”指通過ΨΗ)Κ肽或ΨΗ)Κ肽組合物對通過δPKC的δPKC磷酸化的選擇性調節。可以通過以下方式測試WPDK肽的調節(抑制或激活)特異性匕較在存在或不存在ΨΡ?Κ肽或ΨΡ?Κ肽組合物的情況下通過δPKC的PDK的磷酸化的量和其它已知SPKC磷酸化底物的磷酸化的量。在一個實施方案中，向磷酸化測試中添加特異ΨΡ?Κ肽抑制劑以測量在存在和不存在ΨΡ?Κ肽的情況下通過δPKC的PDK的磷酸化導致通過δPKC的TOK的磷酸化的減少。在該實施方案中，通過δPKC的TOK的磷酸化的減少比通過δPKC的已知的非I3DK的δPKC磷酸化底物的磷酸化的減少大至少1.5倍，至少2倍，至少3倍，至少4倍，至少5倍，至少10倍，至少20倍，至少50倍，或至少100倍。[0079]I1.丙酮酸脫氫酶激酶(TOK)調節劑肽的合理設計[0080]先前已經顯示，在多種心肌梗塞的動物模型中，用ΨSRACK(SPKC特異性激活劑)對心臟缺血和再灌注損傷(即，心臟病發作誘發的損傷)的治療增加SPKC介導的心臟損傷，而用SVl-1(SPKC特異性抑制劑肽)的治療阻止了該損傷(Chen等，2001，Proc.Natl.Acad.Sc1.U.S.A.，98:11114-11119)，所述動物模型包括小鼠和大鼠(Chen等，2001，Proc.Natl.Acad.Sc1.U.S.A.,98:11114-11119),豬(Inagaki等，2003,Circulation,108:2304-2307)和可能地人(Bates等，2008，Circulation，117:886-896)。[0081]許多SPKC的底物已經在多種細胞類型中被鑒定出并且發現它們在不同的亞細胞位置。這些包括，但不一定限于，豆蘧酰化富丙氨酸的C-激酶底物(MARCKS)(Disatnik等，2002,J.Cell.Sc1.，115:2151-2163；Myat等，1997，Curr.Biol.7:611-614)，閉合蛋白(Qi等,2008,J.Clin.1nv.,118:173-182),和在質膜上發現的一些離子通道(Barman等，2004，Am.J.Physiol.LungCell.Mol.Physiol.，186:L1275-L1281);c_Abl在內質網上(Qi等，2008，J.CellSc1.，121:804-813);在線粒體上的發動蛋白相關蛋白I(Drp-1)(Qi等，2010，Mol.Biol.Cell.,22:256-265);和在胞質中的丙酮酸激酶和熱休克蛋白(HSP27)(Siwko等，2007,Int.J.Biochem.CellBiol.，39:978-987)。[0082]以下描述涉及鑒定和表征肽調節劑的工作，所述肽調節劑特異地抑制在組織暴露于缺血/再灌注之后通過δPKC的roK的磷酸化。該高度選擇性的肽在減少通常在缺血/再灌注事件之后觀察到的組織損傷方面有效，由此產生新的治療和/或預防缺血損傷的療法。[0083]合理的設計方法用于鑒定SPKC的單一磷酸化功能(PDK的磷酸化)的特異抑制劑。該合理的方法先前已用于鑒定通過干擾PKC錨定于其結合蛋白RACK(如εVl-1和δVl-1；圖la，e)(Johnson等，1996，J.Biol.Chem.，24962-24966；Dorn等，1999，Proc.Natl.Acad.Sc1.U.S.A.,96:12798-12803;Brandman等，2007，J.Biol.Chem.，282:4113-4123)選擇性抑制PKC活性的肽(Chen等，Proc.Natl.Acad.Sc1.U.S.A.，98:11114-11119；Brandman等，2007,J.Biol.Chem.，282:4113-4123)。此外，干擾自抑制性相互作用并因此作為相應的同工酶的激活劑的肽(例如，ΨεRACK和ΨSRACK)已被鑒定(Chen等，Proc.Natl.Acad.Sc1.U.S.A.,98:11114-11119；Ron等，1995,Proc.Natl.Acad.Sc1.U.S.A.，92:492-496)。[0084]該抑制劑隨后用于顯示，缺血事件之后的SPKC依賴性心臟損傷需要SPKC-介導的PDK的磷酸化。該肽抑制劑，在此被稱為ΨΗ)Κ，抑制δPKC介導的PDK的磷酸化，但不磷酸化其它SPKC底物，如MARCKS或Drpl。在缺乏δPKC的細胞中ΨΡ?Κ效應的缺失使得其對SPKC的特異性也是明顯的。[0085]ΨΡ?Κ肽代表PDK2(ALSTD；SEQIDNO:5)(δPKC的直接底物)和δPKC(ALSTE；SEQIDNO:1)之間相似性的短序列。類似ΨΡ?Κ位點，ALSTE，這些肽都源自C2結構域。然而，ΨΡ?Κ的作用不同。[0086]術語“ΨΗ)Κ”指選擇性抑制由SPKC導致的PDK磷酸化的肽序列。換言之，包含ΨΡ?Κ肽的組合物將減少通過δPKC的PDK的磷酸化但不影響任何其它已知由δPKC磷酸化的底物的磷酸化(并在上文描述)。要理解，ΨΡ?Κ將包括這樣的肽，在相同測定條件下，所述肽對這樣的底物(其不是roK)的SPKC磷酸化的作用僅小于所述WPDK肽對通過δPKC的PDK的磷酸化的作用。“較小的”作用可以包括由δPKC導致的磷酸化減少5%_20%，10%-50%，30%-50%，40%-60%，50%_80%，70%_90%，80%_95%，或90_99%。備選的，該“較小的”作用包括由δPKC導致的磷酸化減少至少50%，60%,70%,80%,90%,95%,97%,98%或99%。[0087]ΨΡ?Κ包含核心氨基酸序列，所述核心氨基酸序列類似于如本文所述那樣鑒定的選擇性調節劑肽。該核心氨基酸序列與Η)Κ2序列，ALSTE(SEQIDNO:1)具有至少60%同一性。然而，能夠選擇性抑制通過δPKC的PDK的磷酸化的肽可以顯著長于該5個氨基酸殘基的核心序列。例如，ΨΡ?Κ調節劑肽可以是5-20個氨基酸長度，或6-15個氨基酸長度。在一些實施方案中，可能在核心序列的N端，C端或N端和C端兩者的附加的氨基酸源自TOK序列。因此，ΨΡ?Κ調節劑肽的總長將與在PDK蛋白內的ΨΡ?Κ調節劑肽對其有效的相同長度的序列具有至少60%，70%,80%,85%，90%,95%或99%同一性。盡管肽最初根據源自人類的氨基酸序列描述，當然，肽不限于在此陳述的特異的氨基酸序列。[0088]將理解ΨΡ?Κ肽可以以天然形式或通過綴合于載體修飾(如以下描述的那些)使用。備選地，源自序列的一個或兩個氨基酸可以被替代或缺失并且每個肽的示例性的修飾和衍生物和片段在以下給出。在一些實施方案中，ΨΡ?Κ肽為AISTER(SEQIDNO:6),AVSTER(SEQIDNO:7),ALTTER(SEQIDNO:8),ATSSER(SEQIDNO:9)或ALSTDR(SEQIDNO:10)。[0089]II1.包含載體部分的調節ΨΡ?Κ肽組合物[0090]用于抑制δPKC-特異PDK磷酸化的調節ΨΡ?Κ肽可附于或連接于肽部分，所述肽部分利于調節肽組合物跨細胞膜的遷移。該肽載體可以是很多本領域已知用于促進跨細胞膜轉移的肽載體的任一個，包括Tat，果蠅觸角足蛋白，聚陽離子肽如聚精氨酸或聚賴氨酸)(例如，(R)7),穿透蛋白(penetratin),Tat,VT5,MAP,轉運蛋白(Transportan),轉運蛋白-10(Transportan-10),pVEC,pISL,Pep-1和小鼠PrPC(1-28)(參見Lundberg等，2003，J.Mol.Recognit.，16:227-233，美國專利公布號2003/0104622和2003/0199677)。在優選的實施方案中，載體肽為Tat來源的轉運多肽(美國專利號5，747，647和5，804，604；Vives等J.Biol.Chem.，272:16010-16017(1997))，聚精氨酸(美國專利號4，847，240和6，593，292；Mitchell等，2000；RoIhbard等，2000)或觸角足肽(美國專利號5，888，762)。這些參考文獻的公開內容完整地結合于此。[0091]調節肽可以通過二硫鍵連接于載體肽。在一些實施方案中，二硫鍵在兩個半胱氨酸，兩個半胱氨酸類似物或半胱氨酸和半胱氨酸類似物之間形成。在該實施方案中，調節肽和載體肽二者都包含至少一個半胱氨酸或半胱氨酸類似物。所述半胱氨酸殘基或類似物可以提供為肽的N端或C端殘基或提供為調節肽和載體肽的內部殘基。二硫鍵隨后在半胱氨酸殘基或類似物中任一個上的硫殘基之間形成。因此，所述二硫鍵可以在例如，調節肽的N末端和載體肽的N末端之間,調節肽的C末端和載體肽的C末端之間,調節肽的N末端和載體肽的C末端之間，調節肽的C末端和載體肽的N末端之間，或任何其它的此種組合(包括在調節肽和/或載體肽內的任何內部位置處)之間形成。[0092]備選的，調節肽可以是融合蛋白的部分。典型地，為了形成融合蛋白，肽通過不同于Cys-Cys的鍵結合于另一個肽。從一個肽的C端到另一個的N端的酰胺鍵是在融合蛋白中鍵的實例。該實施方案包括在調節和載體肽之間并連接調節和載體肽的肽鍵的存在以形成包含調節肽和載體肽二者的單線性肽組合物。調節肽可以在載體肽的N端，或載體肽可以在調節妝的N端。[0093]短的接頭肽可以存在于單線性肽組合物內的調節肽和載體肽之間。接頭肽可以包含2到15個氨基酸。備選的，接頭肽可以包含2到10個氨基酸，3到10個氨基酸，4到10個氨基酸，2到8個氨基酸，3到7個氨基酸，或4到6個氨基酸。所述接頭肽可以包含2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14或15個氨基酸。在一些實施方案中，所述接頭肽包含1，2，3，4或5個甘氨酸殘基。在其它的實施方案中，所述接頭肽包含1，2，3，4或5個丙氨酸殘基。在進一步的其它實施方案中，所述接頭肽包含至少I個絲氨酸殘基。在優選的實施方案中，所述接頭為Gly-Ser-Gly。要理解，所述接頭肽可以包含任何氨基酸或氨基酸類似物。所述單線性肽組合物可以備選的具有存在于調節肽和載體肽之間的單氨基酸。[0094]IV.ΨPDK作用方式[0095]圖8提供概括ΨΡ?Κ的作用方式的圖解。ΨΡ?Κ增加胞質中底物(SI，左側綠色框出)的磷酸化，但它抑制roK(S2，右側紅色框出)的磷酸化。ΨΗ)Κ的抑制效果不同于δν?-l，所述δVl-1抑制在任何亞細胞區室中的所有底物的SPKC磷酸化(參見圖1Α，中圖)。ΨΡ?Κ也不同于ΨSRACK(圖1Α，右圖)，所述ΨSRACK增加所有SPKC底物的磷酸化。因此，ΨΡ?Κ為第一δPKC特異性肽調節劑，其區分與線粒體功能的PDK調節相關的SPKC功能而不抑制其它SPKC-介導的功能。重要地，ΨΡ?Κ顯示SPKC-介導的PDK的磷酸化可以是對于缺血事件之后SPKC-依賴的心臟的損傷所需要的主要的或僅有的磷酸化事件。[0096]很多線粒體蛋白具有線粒體靶向信號(MTS)，其由在其N末端的20-50個氨基酸組成，并由線粒體輸入系統識別。因為SPKC不含有此種線粒體靶向序列，做實驗以確定ΨΡ?Κ實質上誘導SPKC進入線粒體。與線粒體部分關聯的SPKC抗蛋白酶K消化(圖4C)，顯示SPKC不進入線粒體。然而，SPKC輸入線粒體的機制仍然有待確定。[0097]線粒體酶丙酮酸脫氫酶(TOH)是對心臟中有氧呼吸的糖解貢獻的關鍵調節劑，因為其將源自糖解的丙酮酸轉變為乙酰輔酶A以進入Krebs循環。部分酶活性分別通過依賴磷酸化和依賴去磷酸化的抑制和激活調節(Patel等，2001，Exp.Mol.Med.，33:191-197)。催化I3DH的磷酸化和調節其活性的酶是TOK。有證據表明，PDH調節缺血后心臟的收縮性功能的恢復(Lewandowski等，1995,Circulation,91:2071-2079;Stanley等，1996,J.Mol.Cell.Cardiol.，28:905-914)。這里，顯示與增加的PDH磷酸化關聯的Ι/R誘導的增加的PDK磷酸化在存在ΨΗ)Κ的情況下被阻斷(圖5)。當δPKC特異性抑制劑δVl-1在再灌注加入時，獲得同樣的結果(圖5)。因為ΤΑΤ47-57肽(本研究中的肽載體)已顯示跨線粒體膜(Rayapureddi等,2010,Biochemistry,49:9470-9479;Gaizo等,2003,Mol.Genet.Metab.，80:170-180)，可能ΨΗ)Κ_ΤΑΤ綴合物跨線粒體膜并阻斷在線粒體內的I3DK/δPKC相互作用。該效果可以是除胞質部分中ΨΡ?Κ與SPKC的相互作用之外的，其導致SPKC遷移和增加的MARCKS磷酸化(圖2，5)。此外，本文證明ΨΗ)Κ減少體外PDK磷酸化，而不影響Drpl(另一種SPKC特異性底物，其在遷移到線粒體后結合SPKC從而介導線粒體分裂)的磷酸化(Qi等，2010,Mol.Biol.Cell.，22:256-265)。因為已顯示ΨΡ?Κ不阻斷δPKC與其胞質底物Drpl，或位于質膜的MARCKS的相互作用，所以結論是ΨΡ?Κ的效果對于通過δPKC的PDK的磷酸化是特異性的。[0098]激酶調節劑對于基礎研究和藥物是非常重要的。早期已開發了許多激酶調節劑。大多數這些調節劑是小分子，很多具有廣泛的活性且其它具有更高的選擇性(Karaman等，2008，Nat.Biotech.，26:127-132)。然而，據我們所知，這是第一次報道對單個信號分子具有特異性的調節劑肽。我們的工作顯示此種特異性調節劑可以被合理地設計并且這些肽提供缺失的工具以測定例如給定的PKC同工酶的若干細胞功能中的一個的作用。該方法可能適用于其它信號蛋白，允許產生其它蛋白-蛋白相互作用的分離功能的調節劑。[0099]V.使用方法[0100]在此描述的調節肽和肽組合物可以施用于有此需要的受試者以預防或減少由于缺血和因而發生的低氧導致的器官，組織，和或細胞損傷。此種肽用于延緩或抑制缺血后的心臟衰竭的進程，延長存活，減少部分縮短，減少左心室重量與體重的比，減少纖維化，導致受試者的EKG/ECG更接近類似于健康動物的該值，和/或其組合。肽可以是在移植過程中保護心臟免受缺血損傷方面特別有價值的。因此，在此描述的肽和肽組合物對于治療患有例如，心血管疾病，心臟缺血，心臟缺血/再灌注損傷，心肌梗塞，慢性穩定性咽峽炎，或急性冠狀動脈綜合征，或正經歷或已經歷心臟移植的受試者是有用的。[0101]在某些實施方案中，提供治療處于確定的心血管疾病風險中的或具有確定的心血管疾病的個體方法。此方法包括向個體施用藥理學有效量的WPDK肽組合物的步驟，所述組合物減少對心臟組織的損傷或破壞。〃有效量〃或〃藥理學有效量〃指對治療的受試者給予治療效果(例如，減少的再灌注損傷等)所需的化合物的量。如本領域技術人員認識到的，有效的劑量也將根據給藥途徑，賦形劑使用，和任選的與其它治療性治療的共同使用而改變。在另一個實施方案中，存在一種保護心臟免受心血管疾病的方法。此種方法包括施用ΨΡ?Κ肽組合物，其中當與在不施用ΨΡ?Κ肽組合物或施用對照肽組合物的情況下的所述結果比較時，所述施用導致心肌梗塞的大小的減小，改善心臟的血液動力學性能，改善心力衰竭癥狀，減少心臟毒性藥物的凋亡效果或其組合。減少可以指缺血和/或再灌注所致的損傷的量(包括但不限于梗塞大小)的10%，20%,30%,40%,50%,60%,70%,80%,90%或100%減少，或介于其間的任何值或范圍。[0102]在一些實施方案中，ΨΡ?Κ肽和肽組合物可以以具有第二治療劑的組合物共同施用。以此方式，本領域技術人員將認識到WPDK肽可以單獨地，組合地或與第二治療劑聯合地用于制備藥物，所述藥物用于延緩或抑制例如，心血管疾病，或源自心臟缺血的損傷，心臟缺血/再灌注，心肌梗塞，慢性穩定性咽峽炎，急性冠狀動脈綜合征，或由于心臟移植引起的并發癥的進展。[0103]V1.制劑[0104]提供包含所述化合物和至少一種藥用賦形劑或載體的藥物組合物。制備此種藥物組合物的方法典型的包括將所述化合物與或不與載體部分和任選的一個或多個助劑相結合的步驟。所述化合物和/或包含其的藥物組合物可以通過本領域技術人員已知的常規方法配制為藥用劑型。典型地，制劑可以通過以下方式制備:均一地和直接地將所述化合物與液體載體或磨碎的固體載體或二者相結合，并隨后，如果需要，成形為產物。適于腸胃外施用的本發明的藥物組合物包含與以下各項結合的一種或多種所述化合物:一種或多種藥用無菌等滲水或非水溶液，分散液，懸浮液或乳液或可以在使用前被重構為無菌注射液或分散液的無菌粉末，其可以含有糖，醇，氨基酸，抗氧化劑，緩沖劑，抑菌劑，使得所述制劑與目的受體的血液等滲的溶質或懸浮劑或增稠劑。[0105]可以用于本發明的藥物組合物的合適的水的和非水的載體的實例包括水，乙醇，多元醇(如甘油，丙二醇，聚乙二醇等)，及其合適的混合物，植物油，如橄欖油，和可注射有機酯，如油酸乙酯。可以維持適當的流動性，例如，通過使用包被材料，如卵磷脂，在分散液的情況下通過維持需要的粒度，和通過使用表面活性劑。[0106]這些藥物組合物還可以含有佐劑，如防腐劑，潤濕劑，乳化劑和分散劑。可以通過包含各種抗菌或抗真菌劑(例如，對羥基苯甲酸甲酯，氯丁醇，苯酚山梨酸等)來確保阻止微生物對所述化合物的作用。同樣理想的是在組合物中包含控制張性的試劑，如糖，氯化鈉等。此外，可注射藥物形式的延長的吸收可以通過包含延長吸收的試劑如單硬脂酸鋁和明膠帶來。[0107]有時，為了延長藥物的效果，理想的是延緩來自皮下或肌肉內注射的藥物的吸收。這可以通過使用具有差的水溶性的結晶或無定形材料的液體懸浮液實現。藥物的吸收率隨后依賴于其溶解率，溶解率又依賴于晶體大小和晶形。備選地，腸胃外施用的藥物形式的延長吸收通過將藥物溶解和懸浮在油載體中實現。[0108]例如，所述化合物可以以溶液的形式遞送到人，所述溶液通過用液體重構固體形式的藥物而制備。該溶液可以進一步用注入液如注射用水，0.9%氯化鈉注射液，5%葡萄糖注射液和乳酸鹽林格注射液(lactatedringer’sinjection)稀釋。優選地,重構和稀釋的溶液在4-6小時內使用以用于遞送最大效力。備選地，所述化合物可以以片劑或膠囊的形式遞送到人。[0109]可注射的儲庫(cbpot)形式通過在生物可降解的聚合物如聚交酯-聚乙交酯(polylactide-polyglycolide)中形成所述化合物的微包封的基質制備。根據藥物與聚合物之比和使用的特定聚合物的性質，可以控制藥物釋放速率。其它生物可降解的實例包括聚(原酸酯)和聚(酐)。儲庫可注射制劑還通過以下方式制備:將藥物包埋在與身體組織相容的脂質體或微乳中。[0110]當所述化合物作為藥物施用于人和動物時，它們可以被單獨地給予或作為藥物組合物被給予，所述藥物組合物含有與藥用載體結合的，例如，0.1到99%(更優選，10到30%)的活性成分。在其它的實施方案中，藥物組合物可以含有0.2-25%，優選0.5-5%或0.5-2%的活性成分。這些化合物可以被施用于人和其它動物以用于通過任何合適的施用途徑的治療，所述合適的施用途徑包括，例如，皮下注射，皮下儲庫，靜脈內注射，靜脈內或皮下灌注。這些化合物可以作為推注快速施用(〈I分鐘內)或在延長的時間內更慢地施用(在數分鐘、小時或天內)。這些化合物可以每天或在多天內，連續或間斷施用。在一個實施方案中，化合物可以透皮施用(例如，使用貼劑，微針，微孔，軟膏劑，微噴射(microjet)或納米噴射(nanojet)。[0111]不管選擇的施用途徑如何，可以以合適的水合形式和/或藥物組合物使用的所述化合物通過本領域技術人員已知的常規方法被配制為藥用劑型。[0112]藥物組合物中的活性成分的實際劑量水平可以改變以至獲得對于特定的患者、組合物、和給藥方式達到想要的治療反應的有效的而對患者無毒的活性成分的量。[0113]選擇的劑型水平依賴于多種因素，包括使用的特定的所述化合物或其酯，鹽或酰胺的活性，給藥途徑，給藥時間，使用的特定化合物的排泄和代謝速率，吸收的速率和程度，治療的持續時間，用于與使用的特定化合物聯合的其它藥物，化合物和/或材料，被治療患者的年齡，性別，體重，狀態，一般健康和既往病史，和在醫學領域公知的類似因素。[0114]具有本領域普通技術的醫生或獸醫能夠容易地測定需要的藥物組合物的有效量并開出處方。例如，醫生或獸醫可以使用于藥物組合物的所述化合物的起始劑量水平低于為了獲得想要的治療效果所需的劑量水平且逐漸增加劑量直到獲得想要的效果。[0115]通常，所述化合物的合適的日劑量將是作為可以有效地產生療效的最低劑量的化合物的量。此有效劑量通常取決于以上描述的因素。通常，當為了指定的效果而使用時，用于患者的所述化合物的靜脈內，肌肉內，透皮，腦室內和皮下劑量為約1.mu.g到約5mg/公斤體重/小時。在其它實施方案中，劑量為約5.mu.g到約2.5mg/公斤體重/小時。在進一步實施方案中，劑量為約5.mu.g到約Img/公斤體重/小時。[0116]如果需要，有效日劑量的所述化合物可以在一天內被施用為以合適的間隔分開施用的二個、三個、四個、五個、六個或更多個亞劑量，任選地，以單位劑量形式。在一個實施方案中，所述化合物作為每天一個劑量施用。在進一步的實施方案中，當通過靜脈內或其它途徑時，所述化合物被連續施用。在其它實施方案中，相比于每日施用，所述化合物以更低頻率施用，如每2-3天一次，與透析治療聯合，每周地或以更低頻率地。[0117]接受該治療的受試者為有需要的任何動物，包括靈長類，特別是人，和其它哺乳動物如馬，牛，豬和羊；和家禽和一般的寵物。[0118]所述化合物可以這樣施用或與藥用載體混合施用并還可以與抗菌劑如青霉素，頭孢菌素，氨基糖苷和糖肽聯合施用。聯合治療因此包括以以下方式的活性化合物的連續、同時和分開的施用:當施用隨后的時，首先施用的那個的療效還未完全消失。[0119]VI1.公開的化合物的給藥途徑[0120]這些化合物可以通過任何合適的給藥途徑施用于人和其它動物以用于治療。當在本文中使用時，術語施用"途徑"意在包括但不限于皮下注射，皮下儲庫，靜脈內注射，靜脈內或皮下灌注，眼內注射，皮內注射，肌肉內注射，腹膜內注射，氣管內給藥，脂內給藥,關節內給藥，鞘內給藥，硬膜外給藥，吸入，鼻內給藥，舌下給藥，口腔給藥，直腸給藥，陰道給藥，腦池內給藥和局部給藥，透皮給藥，或通過局部遞送的給藥(例如通過導管和支架)。[0121]到身體的透皮藥物遞送是用于向受試者全身遞送生物活性物質并且特別地用于遞送具有差的經口生物利用度的物質(如蛋白質和肽)的理想的和方便的方法。利用小的(例如，小于約1，000道爾頓)親脂性化合物的透皮遞送途徑是特別成功的，所述小的親脂性化合物如東莨菪堿和煙堿，其可穿過充當物質進入身體的有效屏障的皮膚的角質層外層。角質層下面是有活力的表皮，其不含有血管，但具有一些神經。更深層的是真皮，其含有血管，淋巴管和神經。穿過角質層屏障的藥物通常能擴散到真皮中的毛細血管以吸收和全身分布。[0122]透皮遞送的技術進步已集中在專注于本領域中的穿過皮膚遞送疏水的，高分子量化合物，如蛋白和肽的需求。一種方法包括使用化學或物理方法破壞角質層以減少由角質層設置的屏障。皮膚微穿孔(miCToporation)技術是更新近的方法，其包括使用最小侵入技術在皮膚中產生微米級的運輸通道(微孔)(尤其是在角質層中的微孔)。在皮膚(角質層)中產生微孔的技術包括熱微穿孔或消融，微針陣列，超聲透入，激光消融和射頻消融(Prausnitz和Langer(2008)Nat.Biotechnologyll:1261_68；Arora等，Int.J.Pharmaceutics,364:227(2008)；Nanda等CurrentDrugDelivery,3:233(2006)；Meidan等AmericanJ.Therapeutics,11:312(2004))。[0123]在一個實施方案中，調節劑肽通過微穿孔遞送。用于微穿孔的很多技術中的任何一個是預期的，且簡述一些。[0124]微穿孔可通過機械裝置和/或外驅動力實現以破壞角質層從而遞送本文所述的擬鈣劑(calcimimeticagent)通過皮膚表面并進入在下面的皮膚層和/或血流。[0125]在第一個實施方案中，微穿孔技術是使用波長，脈沖長度，脈沖能量，脈波數和脈沖重復頻率足以消融角質層而不顯著破壞下面的表皮的脈沖激光消融皮膚的特定區域中的角質層。擬鈣劑隨后被施用到消融區域。被稱為激光誘導的應力波(LISW)的另一種激光消融微穿孔技術包括由大功率脈沖激光器產生的寬帶，單極和可壓縮的波。LISW與組織相互作用以破壞角質層中的脂質，在角質層內瞬時產生細胞間通道。角質層中的這些通道或微孔允許擬鈣劑進入。[0126]超音導入(Sonophoresis)或超聲透入(phonophoresis)是使用超聲能量的另一種微穿孔技術。超聲是頻率高于20KHz的聲波。超聲波可以連續施用或脈沖地施用，并可以以多種頻率和強度范圍施用(Nanda等，CurrentDrugDelivery,3:233(2006))。[0127]其它微穿孔技術包括微針陣列(microneedlearray)的使用。微針陣列在施用于受試者上的皮膚區域時刺穿角質層并不穿透到顯著刺激神經或刺破毛細血管的深度。因此，在施用微針陣列以用于產生通過其遞送調節劑的微孔后，患者感覺不到或感覺到最小的不適或疼痛。[0128]由空心的或實心的微針組成的微針陣列是預期的，其中調節劑可以包被在針的外表面上或從空心針的內部分配。微針陣列的實例已描述，例如，在Nanda等，CurrentDrugDelivery,3:233(2006)和Meidan等AmericanJ.Therapeutics,11:312(2004)中。第一代微針陣列由實心的外表面包被有治療劑的硅微針組成。當針微陣列壓在皮膚上并在約10秒后移開時，容易實現針上的試劑滲入身體。第二代微針陣列由實心的或空心的硅，聚碳酸酯，鈦或其它合適的聚合物微針組成并包被或填充有治療化合物的溶液。更新一代的微針陣列從生物可降解的聚合物制備，其中針頭包被有保留在角質層并緩慢溶解的治療劑。[0129]微針可以由多種材料構成，包括金屬，陶瓷，半導體，有機物，聚合物和復合物。典型的構成材料包括藥物級不銹鋼，金，鈦，鎳，鐵，錫，鉻，銅，鈀，鉬，這些或其它金屬的合金，硅，二氧化硅和聚合物。典型的生物可降解聚合物包括含氧酸的聚合物如乳酸和羥基乙酸聚交酯，聚乙交酯，聚交酯-乙交酯共聚物，和與聚(乙二醇)，聚酐，聚(原酸)酯(poly(ortho)ester),聚氨基甲酸酯,聚(丁酸)，聚(戍酸)，和聚(交酯-共-己內酯)。典型的非生物可降解聚合物包括聚碳酸酯，聚酯，和聚丙烯酰胺。[0130]微針可以具有直的或錐形的軸。在一個實施方案中，微針的直徑在微針的基底最大且向基底遠端處的點漸細。微針還可以被制成具有包括直的(非錐形)部分和錐形的部分的軸。針還可以根本不具有錐形的末端，即可以簡單的為具有鈍或平頭的柱形。具有基本均一直徑，但不向一點漸細的空心微針在本文中被稱為"微管"。當在本文中使用時，除非另有說明，術語"微針"包括微管和漸細的針。[0131]電穿孔是用于在皮膚中產生微孔的另一種技術。該方法使用微秒或毫秒長的高壓電脈沖在角質層內產生瞬時的，可透過的孔的應用。[0132]其它微穿孔技術包括使用無線電波以在皮膚中產生微通道。熱消融是實現更大分子量化合物透皮遞送的另一種方法。[0133]在此提到的所有專利，專利申請，和公開因此以其整體作為參考引入。然而，其中含有明確定義的專利，專利申請或公開作為參考引入，那些明確的定義應該理解以應用所引入的專利，專利申請或公開，其中，發現，且未必對于本申請的正文，尤其本申請的權利要求，在該情況下，在此提供的定義意在取代。[0134]提出以下實施例以至于提供給那些本領域普通技術人員以如何實施本發明的完全的公開和描述，且不意在限制發明人認為其專利的范圍。關于數量(例如，量，溫度等)已做出努力以確保精確性，但一些錯誤和偏差應該說明。除非另有說明，部分為重量份，溫度以。C表示,且壓力為大氣壓或接近大氣壓。實施例[0135]實施例1[0136]材料[0137]細胞培養。成纖維細胞如在前描述的(Disatnik等，2004，J.CellSc1.,117:4469-4479)分離自野生型或δPKC敲除小鼠(由Dr.RobertMessing,GalloCenter,UCSF提供)并保持在20%胎牛血清中。[0138]妝合成。妝通過LibertyMicrowavePeptideSynthesizer(CEMCorporation,Matthews,NC,USA)或AmericanPeptide(CA,USA)使用微波合成。月太如在Chen等(2001,Chem.Biol.,8:1123-1129)描述的，通過二硫鍵綴合到TAT載體或被合成為一條多肽:[0139]N末端-TAT-間隔區-貨物-C末端[0140]肽的C末端使用RinkAmideAM樹脂修飾到C(0)-NH2以增加穩定性(如在Sabatino等(Cur.0pin.1nDrugDisc.&Dev.,11:762-770中描述的)。月太通過分析型反相高壓液相色譜(RP-HPLC)(Shimadzu，MD，USA)和基質輔助激光解吸/電離(MALDI)質譜(MS)分析并通過制備型RP-HPLC(Shimadzu，MD,USA)純化。[0141]成纖維細胞中PKC底物磷酸化。豆蘧酰化富丙氨酸的C激酶底物(MARCKS)(普遍存在的PKC底物)的磷酸化，通過總細胞溶解產物的蛋白質印跡使用抗磷酸化的MARCKS(CellSignaling,Danvers,MA)監控。抗MARCKS和抗δPKC抗體獲自SantaCruzBiotechnology(SantaCruzBiotechnology,CA,USA)。[0142]缺血/再灌注(I/R)的離體心臟保護。使用急性缺血心臟損傷的離體模型，其包括30分鐘平衡期，繼之以30分鐘的整體缺血，其后又是60分鐘的再灌注。心臟用IμMTAT或TAT-綴合肽灌注。含氧量正常的對照心臟在不缺血的情況下進行90分鐘灌注。收集冠狀動脈的流出物以測定在頭30分鐘的再灌注期期間肌酸磷酸激酶(CPK)釋放。在再灌注期的結尾，將心臟切成Imm厚的橫剖面并在三苯基氯化四唑溶液(TTC，1%，在磷酸緩沖液中，PH7.4)中在37°C溫育15分鐘。梗塞大小被表示為風險區的百分數(相當于總LV肌肉質量的)(方法描述在Brandman等，2007，J.Biol.Chem.,282:4113-4123；Inagaki等，2003，Circulation,108:869-875中)。[0143]蛋白質印跡分析和2D分析。大鼠心臟在含有2IOmM甘露醇，70mM蔗糖，5mMMOPS和ImMEDTA的緩沖液中勻漿繼之以線粒體級分的分離(描述在Churchill等，2008，J.Mol.Cell.Cardiol.，46:278-284中)并通過VDAC(MitoSciences，Eugene,OR,USA)的存在鑒定。使用各自的特異性抗體(CellSignaling,Danvers,MA和SantaCruzBiotechnology,CA，USA)分析在總級分中磷酸化和非磷酸化的JNK1/2的水平。[0144]使用大鼠心臟樣品的2-DIEF/SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳如之前所述的進行(Chen等，2008，Science，321:1493-1495)。通過標準方法使用PDK2c_端兔(Abgent,CA,USA)，PDH亞單位Ela單克隆(Invitrogen,CA,USA)和ALDH2山羊(SantaCruzBiotechnology,CA，USA)抗體進行10%SDS凝膠電泳和蛋白質印跡。[0145]體外磷酸化測定。為了測定在ΨΡ?Κ存在下的PDK和Drpl磷酸化的水平，將SPKC重組蛋白(Invitrogen，CA，USA；200ng)與或不與肽溫育10分鐘，隨后在37°C，在20分鐘內，在少量的PKC激活劑磷脂酰絲氨酸(Ρ3，1.25μ0和1，2二油酰sn_甘油(I,2dioleoylsn-glycerol)(DG,0.04μg)存在下，將IOOng重組Η)Κ2(Abnova,Taiwan)或Drpl(Abnova,Taiwan)加入含有5μCi[y32PjATP(4500Ci/mmol,ICN)的40μI激酶緩沖液(20mMTris-HCl，20mMMgCl2，lyMDTT，25yMATP，lmMCaCl2)中。激酶測定通過加入含有5%SDS的上樣Laemmli緩沖液終止且樣品上樣到10%PAGE_SDS聚丙烯酰胺凝膠上，并且磷酸化的TOK2蛋白的水平通過將硝酸纖維素暴露于放射自顯影測定。還使用各自的抗體再探測硝酸纖維素以用于上樣對照。[0146]蛋白酶K消化。為了測定Ι/R損傷后SPKC蛋白是否位于線粒體的內膜或外膜中，我們如上描述地從經受30分鐘缺血繼之以60分鐘再灌注的心臟分離線粒體。各自的線粒體提取物(200μg)用50μg/ml的蛋白酶K(儲存濃度20mg/ml,Invitrogen,CA,USA)處理。消化通過加入5mM苯甲磺酰氟(PMSF)終止。等量的蛋白上樣到10%SDS凝膠并探測δPKC和MFNl(外線粒體標志物)和ALDH2(線粒體基質標志物)。為了確定δPKC對蛋白酶K消化敏感，線粒體級分用l%TritonX-100溶解并在相同測定中用作對照。[0147]在加入在含有IyMDTT的20mMTris-HC，pH7.4中的蛋白酶Κ(0.05μg/ml)之前，將人重組δPKC(Invitrogen,CA,USA；50ng；0.625pmole)與ΨΡ?Κ(未綴合TAT，InmoIe)溫育。根據指示通過加入5mMPMSF終止反應。[0148]統計方法。數據表達為平均土S.E。使用非配對t檢驗以定義2組間的統計學差異(ρ〈0.05)。[0149]實施例2[0150]基于SPKC和PDK之間的同源性的肽的合理設計[0151]合理的是，類似于每個與相應的PKC-相互作用蛋白同源的PKC上的假底物位點(House等，1987，Science,238:1726-1728)和假RACK位點(Dorn等，1999，Proc.Natl.Acad.Sc1.，96:12798-12803；Ron等，1995，Proc.Natl.Acad.Sc1.，92:492-496)，在δPKC中可能存在PDK樣序列。使用Lalign(Huang等，1991,Adv.appl.Math.,12:337-357)的序列同源性檢索在I3DK中鑒定出五個氨基酸的范圍(ALSTD;氨基酸391-395)，其幾乎與SPKC中的序列(ALSTE，氨基酸35-39;圖1B)相同。有趣的是，在PDK結構中的ALSTD序列位于可用于蛋白-蛋白相互作用的暴露區域(圖1B)。一個為鑒別對于蛋白-蛋白相互作用關鍵的序列建立的標準是其在進化中的保守性(Souroujon等，1998,Nat.Biotechnol.,16:919-924；Qvit等，2010,DrugDisc.Today:Dis.Mech.,7:e87_e93)。在δPKC中和在PDK中的ALESTE/D序列在所有具有δPKC同工酶的物種中是保守的(圖1C，D)。由上述理由支持，在缺少SPKC的物種中，所述序列含有額外的負電荷(例如，果蠅，圖1D)或完全缺失(例如，蠕蟲和酵母；圖1D，底部)。[0152]出乎意料地，發現ALSTE在δPKC的C2結構域內，已經發現該結構域在PKC的蛋白-蛋白相互作用中是重要的(Smith等，1992,Biochem.biophys.Res.Commun.,188:1235-1240；Johnson等，1996,J.Biol.Chem.,271:24962-24966；Brandman等，2007，J.Biol.Chem.,282:4113-4123)并且含有同工酶-特異性抑制劑(例如，εV1-2,δVl-1和ΘV1-2；圖1Ε)和激活劑(ΨεRACK,ΨδRACK和ΨΘRACK;圖ΙΕ)。重要的是，未在ePKC或0PKC(0PKC是與SPKC最為同源的同工酶(Baier等，1993，J.Biol.Chem.，268:4997-5004)，圖1E)中發現ALSTE；δPKC中的ALSTE是同樣在ΘPKC中發現的獨特的β發夾的部分，并且在其它PKC同工酶(包括εPKC)中缺失(圖1F，框出的區域)。[0153]為了測定是否該序列涉及TOK的SPKC調節，合成相應的肽。因為先前已觀察到蛋白-蛋白相互作用的生物活性肽抑制劑的最小長度可以是六個氨基酸，我們使ALSTE延長一個氨基酸，R(ALSTER，SEQIDN0:2)。該肽在此被稱為ΨΗ)Κ。合成完成SPKC中的β發夾(圖1E-F，框出的區域)的δV1-5肽作為對照肽(GKTLVQ；SEQIDNO:4)。為了促進將肽遞送到細胞中，將所述肽綴合到源自TAT的細胞滲入肽TAT47-57(SEQIDN0:33)，經由位于調節或對照肽和載體肽中的每個的C末端的半胱氨酸殘基之間的二硫鍵(圖2A)。[0154]實施例3[0155]ΨΡ?Κ對于SPKC是特異性的；在培養的成纖維細胞中的研究[0156]ΨΡ?Κ序列在PDK和TOK-同源蛋白δPKC二者中都發現。因此預測ΨΗ)Κ模擬抑制性分子內相互作用，并且類似于ΨδRACK,ΨΡ?Κ應當與PDK和δPKC的抑制性相互作用競爭，并增加SPKC-介導的功能(圖1Α)。豆蘧酰化富丙氨酸C-激酶底物(MARCKS)的磷酸化用作PKC活性的標志物(Disatnik等，2004，J.Cell.Sc1.，117:4469-4479)。將培養于含有20%血清(其準備PKC用于激活(Disatnik等，2004，J.Cell.Sc1.,117:4469-4479))的培養基中的細胞與ΨΗ)Κ(圖2Α)或與δVl-5(各自綴合于ΤΑΤ47-57以促進其向細胞內的遞送)溫育，相對于對照肽MARCKS磷酸化增加(圖2C，左)。佛波醇12-豆蘧酸鹽13-乙酸鹽(PMA)，一種PKC或ΨδRACK的有效激活劑，用作陽性對照，同樣導致增加的MARCKS磷酸化(圖2C，右)。為了測定肽對于SPKC的選擇性，使用源自SPKC敲除小鼠的成纖維細胞。在這些細胞中δν?-5增加MARCKS磷酸化，而VPDK在缺少SPKC的細胞中不影響MARCKS磷酸化(圖2D，2D插入圖)。這些數據顯示源自δPKC的肽，ΨΡ?Κ和δν?_5，是MARCKS的δPKC磷酸化的激活劑，但是僅ΨΡ?Κ對δPKC具有特異性；δVl_5可能影響多個PKC同工酶。[0157]實施例4[0158]ΨΡ?Κ在體外特異性地抑制通過δPKC的PDK磷酸化[0159]因為ΨΡ?Κ源自δPKC中的PDK樣序列(圖1Β)，合理的是，該肽應該充當對I3DK的SPKC磷酸化具有選擇性的競爭性抑制劑。為了直接測試該假設，使用體外激酶測定，其中測定δPKC磷酸化I3DK的能力。ΨΡ?Κ抑制TOK的δPKC磷酸化達~30%，而對照肽沒有(圖3A)。ΨΡ?Κ對TOK的選擇性通過檢測Drpl(另一種δPKC底物(Qi等，2010，Mol.Biol.Cell.，22:256-265))體外磷酸化測定并發現ΨΡ?Κ不影響Drpl磷酸化(圖3Β)。這些數據一同提示WPDK是通過δPKC的PDK磷酸化的特異性抑制劑。圖3C顯示ΨΡ?Κ直接結合SPKC，因為肽改變了SPKC對蛋白水解的敏感性。蛋白酶K(PK)測定顯示，與沒有肽或對照肽(ΨδRACK)相比，在存在ΨΡ?Κ的情況下，人重組蛋白δPKC對PK消化更穩定。ΨΡ?Κ誘導的δPKC的對PK降解的抗性是特異性的；εPKC或βIPKC對通過PK的蛋白水解的敏感性不受ΨΗ)Κ的存在的影響。[0160]實施例5[0161]ΨΡ?Κ增加在經受缺血和再灌注(Ι/R)的完整心臟中的SPKC到線粒體內的遷移[0162]由δPKC導致的線粒體PDK的磷酸化僅在心肌梗塞后發生。在這些條件下，δPKC轉移入線粒體(Churchill等，2005，Circ.Res.，97:78-85)，在線粒體中它接近Η)Κ。因此首先確定WPDK肽是否影響SPKC遷移入線粒體中。在模擬心肌梗塞的缺血和再灌注(I/R)狀態后(圖4Α)，與用對照肽處理的心臟相比，當心臟用ΨΡ?Κ處理時，與線粒體相關的δPKC增加兩倍(圖4Β)。我們還發現在含氧量正常的條件下ΨΡ?Κ不誘導δPKC遷移到線粒體中。為了測定在ΨΡ?Κ治療后SPKC是否進入線粒體，對以上完整的心臟線粒體進行蛋白酶K處理。外部膜蛋白，線粒體融合素Umitofusionl)(MFNl)，完全被降解(圖4C，下圖)。然而，類似于線粒體基質蛋白，醛脫氫酶(ALDH2)，大部分的SPKC對于由PK導致的蛋白水解不敏感(圖4C;在圖4D中量化)。這些數據表明ΨΡ?Κ增加Ι/R誘導的SPKC向線粒體內的進入。[0163]實施例6[0164]在Ι/R之后ΨΡ?Κ選擇性抑制δPKC底物丙酮酸脫氫酶激酶的磷酸化[0165]如以上描述的，心臟缺血和再灌注后的TOK的δPKC磷酸化導致丙酮酸脫氫酶(PDH)的磷酸化和活性下降(Churchill等，2005，Circ.Res.，97:78-85)。因此，PDH的PDK磷酸化導致乙酰輔酶A生產的減少，所述乙酰輔酶A是TCA循環和ATP產生所需的(圖5A)。因為ψροκ源自δPKC中的roK同源序列，所以接下來測定PDK磷酸化是否受ψρ?κ處理影響。如之前報道的(Churchill等，2005，Circ.Res.,97:78-85)，使用二維等電聚焦(2-DIEF)，發現心臟Ι/R導致增加的TOK2的磷酸化(圖5B;箭頭)和隨后的I3DH的El亞基的磷酸化(圖5C;箭頭)。然而，這兩種酶的磷酸化(通過2-DIEF分析，通過向酸性pH的轉變顯示)在ΨΡ?Κ存在下或在δVl-1(δPKC特異性抑制劑)的存在下不發生(圖5B-C)(Chen等，2001，Proc.Natl.Acad.Sc1.，98:11114-11119)。[0166]為了測定當在線粒體內時ΨΡ?Κ抑制對于SPKC-介導的磷酸化是否是選擇性的，還檢測了εPKC-選擇性線粒體底物醛脫氫酶2(ALDH2)(Chen等，2008,Science,321:1493-1495)的磷酸化狀態。如對于同工酶-特異性肽調節劑所料到的，ΨΗ)Κ和δVl-1兩者都不影響ALDH2磷酸化(圖OT)，證明肽對δPKC的選擇性效果。[0167]最后，在同樣的心臟Ι/R條件下，ΨΡ?Κ不抑制膜結合底物MARCKS的磷酸化；與對照肽相比，在ΨΡ?Κ存在的情況下，觀察到Ι/R誘導的MARCKS磷酸化的增加。此外，ΨΡ?Κ還導致在這些經受Ι/R的心臟中Drpl磷酸化的增加(圖5Ε)。這些數據一起表明，類似于體外激酶測定(圖3Α)，ΨΡ?Κ充當線粒體中PDK磷酸化的抑制劑。重要的是，在相同條件下，ΨΡ?Κ不影響在其它亞細胞區室中的其它δPKC底物的磷酸化(圖3Β，5Ε)。[0168]實施例7[0169]ΨΡ?Κ肽處理在離體心臟病發作模型中誘導心臟保護[0170]因為ΨΡ?Κ抑制δPKC介導的I3DK的磷酸化，但不抑制其它δPKC底物的磷酸化，所以接著測定SPKC介導的ΨΡ?Κ磷酸化在心臟缺血和再灌注損傷中的作用。使用Langendorff制劑(Langendorff,1895,PfilgersArchiv,61:291-382;Hondeghem等，1978,Amer.J.Physiol.，235:H574-H580)，以前已發現δPKC的激活導致對心肌的缺血損傷增加(Chen等，2001，Proc.Natl.，Acad.，Sc1.98:11114-11119)。如果PDK磷酸化對于δPKC介導的功能是重要的，則將預期，選擇性抑制PDK磷酸化而不影響其它δPKC底物的磷酸化的ΨΡ?Κ,將保護心肌免受Ι/R誘導的損傷。[0171]使用三個標準，確定，與對照肽相比，ΨΡ?Κ處理在Ι/R之后誘導心臟保護(圖6)，首先，在用ΨΡ?Κ或δVl-1(Inagaki等，2003，Circulation，108:869-875)處理后Ι/R誘導的梗塞大小，小于用對照肽或用ΨδRACK(δPKC特異性激活劑)或用δV1-5處理的心臟中的梗塞大小(圖6Α)。第二，在確定作為心肌梗塞的標志物的釋放的肌酸磷酸激酶(CPK)的水平時，獲得類似的數據；在ΨΡ?Κ或δVl-1處理的心臟中的CPK水平類似且比用對照肽ΨδRACK或δV1-5處理后的那些更低(圖6B)。最后，測定作為細胞應激和凋亡的已知標志物的JNK蛋白磷酸化的水平(Davis等，2000，Cell，103:239-252))。與其它源自δPKC的肽δV1-5和ψδRACK相比，δVl-1和ΨΡ?Κ減少Ι/R誘導的JNK磷酸化(圖6C和6D)。這些數據一起說明ΨΗ)Κ，PDK磷酸化的選擇性抑制劑，足以抑制Ι/R損傷。[0172]ΨΡ?Κ還被合成為通過酰胺鍵利用在N末端上的TAT和C末端上的貨物(cargo)之間的3個氨基酸(GSG)的間隔區與TAT相連的單一多肽(其稱為ΨPDK-GSG-TAT)。有趣的是，發現在這些條件下，當使用MARCKS磷酸化作為SPKC的活性的指示時，與WPDK-Cs-sC-TAT相比，ΨPDK-GSG-TAT(SEQIDN0:41)是更有效的δPKC調節劑(圖7)。這可能是由于ΨPDK-GSG-TAT(SEQIDN0:41)相對于WPDK-Cs-sC-TAT可釋放肽的改善的向細胞內的遞送，盡管這有待測定。進一步，顯示TAT-GSG-WroK(線性多肽，圖2B，SEQIDNO:42)更具有心臟保護性:其使免受Ι/R損傷從45%保護(由可釋放肽誘導的)顯著增加到73%保護(n=6)。[0173]意外的發現在δPKC中的roK-相關序列與I3DK中的相同(或幾乎相同)(圖1B，D)。這提示序列ALSTE(SEQIDNO:1)的若干或所有氨基酸的重要作用。為了開始測定每個氨基酸對于肽的效果的貢獻，使用丙氨酸掃描(Brunei等，2006，J.Virol.,80:1680-1687；Chen等，J.Pep.Res.，2000，56:147-156；Brems等，1992,Prot.Eng.，5:527-533)(用丙氨酸代替個體氨基酸)。所得的ΨΗ)Κ肽類似物隨后用在同樣的心肌梗塞模型中，使用CPK釋放和JNK磷酸化作為心臟損傷的標志物。在Ι/R之后，在相應的肽存在的情況下，測定釋放到灌注液中的CPI和心臟中的pJNK并與在對照肽存在的情況下經受Ι/R的心臟中的水平比較。具有取代的肽不具有任何顯著的生物活性(表1)。此外，盡管ALSTER中的S和T不代表SPKC的共有序列，接著測定在合成期間將S/T用磷酸化的S/T取代(在表1中分別表示為S(P)和T(P))是否改變肽的生物活性。磷酸化的肽(pl97，198，199)不影響離體Ι/R模型中的心臟保護(參見表1)。因此，觀察到當與描述于表1的其它肽序列相比時，僅ALSTER肽行使心臟保護效果，與這些氨基酸的每個側基在與δPKC相互作用中的作用一致。[0174]表1【權利要求】1.δPKC-選擇性調節肽，所述調節肽包含5個氨基酸殘基的鄰接的核心序列，其中所述鄰接的核心序列與SEQIDNO:1具有至少60%的同一性。2.根據權利要求1所述的調節肽，其中所述調節肽由5-20個氨基酸殘基組成。3.根據權利要求2所述的調節肽，其中所述調節肽與源自全長TOK(SEQIDNO:12)的鄰接的序列具有至少60%的同一性。4.根據權利要求1所述的調節肽，其中所述調節肽抑制S-蛋白激酶C(SPKC)對丙酮酸脫氫酶激酶(I3DK)的磷酸化。5.根據在前的任一項權利要求所述的調節肽，所述調節肽還包含位于所述調節肽的N端或C端的第一半胱氨酸殘基。6.根據權利要求5所述的調節肽，其中所述第一半胱氨酸殘基與載體肽相連，其中所述載體肽在所述載體肽的N端或C端包含第二半胱氨酸殘基。7.δPKC-選擇性調節組合物，所述組合物包含權利要求1-6中任一項所述的肽。8.根據權利要求7所述的組合物，所述組合物還包含藥用賦形劑。9.減少對心臟組織的缺血損傷的方法，所述方法包括向有此需要的受試者施用δPKC-選擇性調節肽。10.根據權利要求9所述的方法，其中所述受試者患有心血管疾病，心臟缺血，心臟缺血/再灌注損傷，心肌梗塞，慢性穩定性咽峽炎，或急性冠狀動脈綜合征。【文檔編號】C07K7/00GK103998457SQ201280050062【公開日】2014年8月20日申請日期:2012年8月10日優先權日:2011年8月12日【發明者】達里婭·莫史里-羅斯,尼爾·奎特,瑪麗-海倫妮·迪薩尼克·杰茨尼克申請人:利蘭斯坦福初級大學信托董事會