專利名稱：一種檢測硫醇的方法
技術領域：
本發明涉及檢測探針，具體涉及檢測硫醇的方法，更具體地說是基于一種香豆素色烯衍生物檢測硫醇的方法。
背景技術：
硫醇在生物體系中起著關鍵作用。三種結構相似的小分子硫醇半胱氨酸(Cys)、 同型半胱氨酸(Hcy)和谷胱甘肽(GSH)在維持生物系統中扮演著至關緊要的的角色。細胞內硫醇濃度的改變與一些疾病緊密相連，如白血球降低、牛皮癬、肝臟損傷、癌癥和艾滋病。 半胱氨酸(Cys)缺乏會引起很多綜合疾病，如兒童生長緩慢、白化病、水腫、嗜睡癥、肝臟損傷、肌肉和脂肪消損、皮膚損傷、虛弱。血漿中高水平的同型半胱氨酸(Hcy)是Alzheimer 癥、葉酸和維生素B12缺乏癥和心血管疾病的致病因素之一。血漿中總的同型半胱氨酸 (tHcy)濃度與出生缺陷、老年癡呆等疾病有關。谷胱甘肽(GSH)是細胞內含量最高的非蛋白質硫醇(I 10mmol/L),支持許多細胞功能,如維持細胞氧化還原動態平衡、異型生物質的新陳代謝、細胞內的信號傳導以及基因調節。更為重要的是，谷胱甘肽能保持蛋白質中半胱氨酸巰基處于還原態，和通過俘獲傷害DNA和RNA的自由基保護細胞免受氧化傷害。因此，定量檢測生物體系中硫醇的濃度在科研和臨床中具有重要意義，建立快速、準確、靈敏的硫醇檢測方法，也是預防和監測硫醇所引發的疾病的重要措施之一。
目前已報道的用于檢測硫醇的檢測方法有高效液相色譜法、毛細管電泳法、電化學法、傅里葉變換紅外光譜、質譜法等。然而這些方法檢測過程需要大型儀器、檢測過程繁瑣、耗時、設備和藥品比較昂貴等。小型醫院及診所由于缺乏大型設備，而無法把測定病人體液中硫醇的含量作為臨床上的一個常規檢驗。所以，發展一種檢測過程簡單、靈敏、成本低、適合臨床、科研使用的的檢測硫醇的方法非常必要。
發明內容
本發明的目的是提供一種體系簡單、操作方便、選擇性高、靈敏度高、水溶性好的定量檢測硫醇的方法。
本發明提供的快速檢測硫醇的方法，是基于一種香豆素色烯衍生物 8, 9-dihydro-2H-cyclopenta [b] pyrano [2, 3-f] chromene-2, 10 (7AH) -dione (簡稱 CPC,中文名稱為8，9-二氫-2H-環戊二烯并[b]吡喃并[2，3-f]苯并吡喃-2，10 (7AH)-二酮)， 在pH為7. 4的HEPES溶液中定量地檢測硫醇的含量。該檢測方法，對硫醇顯示了高的靈敏性和選擇性，
檢測過程簡便、靈敏、快速，檢測結果準確。
本發明首先提供的一種香豆素色烯衍生物，是8，9-dihydro-2H_cyclopenta[b] pyrano [2, 3-f] chromene-2, 10 (7AH) -dione (簡稱 CPC),其結構式是
權利要求
1.一種香豆素色烯衍生物，其特征在于它是8，9-dihydro-2H-cyclopenta[b] pyrano [2, 3-f] chromene-2, 10 (7aH)-dione,其結構式為
2.如權利要求I所述的一種香豆素色烯衍生物的合成方法，其特征在于，步驟為香豆素醛和環戊烯酮按摩爾比1:1. 1-3溶解在體積比為1:1的四氫呋喃和水的混合溶液中，在室溫下攪拌72小時，用5-10倍體積的IM HCl稀釋，并用乙酸乙酯萃取，有機相濃縮并被減壓蒸干，然后用體積比1:4的乙酸乙酯和石油醚在硅膠色譜柱淋洗，蒸干即可得產品。
3.如權利要求2所述的一種香豆素色烯衍生物的合成方法，其特征在于，所述的香豆素醛和環戊烯酮按摩爾比為1:1.5。
4.一種檢測硫醇的方法其特征在于，步驟為(1)、配制pH=7.4、濃度為IOmM的HEPES緩沖溶液，并用乙醇配制2mM的CPC乙醇溶液；(2)、按體積比400:7將HEPES緩沖溶液和CPC乙醇溶液加到干凈的紫外比色皿中，在紫外可見分光光度儀上檢測，隨著待測樣的加入，372nm出現新的吸收峰并逐漸升高，當吸收峰不再升高時，停止加待測樣，此時加入待測樣的體積計為;(3)、按VcrcX2X10_3/V_W計算出待測樣中硫醇的濃度(mol/L)。
5.一種檢測硫醇的方法其特征在于，步驟為(1)配制pH=7.4、濃度為IOmM的HEPES緩沖溶液，并用乙醇配制2mM的CPC乙醇溶液；(2)按體積比200:1將HEPES緩沖溶液和CPC乙醇溶液加到干凈的紫外比色皿中，在熒光分光光度儀上檢測，隨著待測樣的加入，455nm出現明顯的熒光增強，且隨著硫醇濃度的增大，熒光強度也增大，當強度不再增大時，停止加待測樣，此時加入待測樣的體積計為V待測樣5(3)按VcrcUIX2XlO-Vvitew μ I計算出待測樣中硫醇的濃度(mol/L)。
6.如權利要求I所述的香豆素色烯衍生物在細胞成像中的應用。
全文摘要
本發明提供了一種檢測硫醇的方法，具體地說是基于一種香豆素色烯衍生物檢測硫醇的方法。所述的香豆素色系衍生物，它是8,9-dihydro-2H-cyclopenta[b]pyrano[2,3-f]chromene-2,10(7AH)-dione(簡稱CPC)。檢測方法是基于CPC，在pH為7.4的HEPES溶液中定量地檢測硫醇的含量。該檢測方法，對硫醇顯示了高的靈敏性和選擇性，檢測過程簡便、靈敏、快速，檢測結果準確。
文檔編號C07D493/04GK102977113SQ201210532990
公開日2013年3月20日 申請日期2012年12月11日 優先權日2012年12月11日
發明者陰彩霞, 霍方俊 申請人:山西大學