專利名稱：大豆中異黃酮的提取與純化方法
技術領域：
本發明屬于植物提取技術領域，尤其涉及一種從大豆中提取與純化異黃酮的方法。
背景技術：
大豆異黃酮是大豆生長中的次級代謝產物，存在于大豆胚芽及子葉中包括大豆異黃酮甙和大豆異黃酮甙元。經過多年的研究，發現大豆異黃酮有多種重要的生理功能和營養作用，并逐漸成為研 究的一個主要方向，特別是對諸多病癥的預防和抑制作用。流行病學調查研究表明，一些疾病如乳腺癌、前列腺炎、結腸炎、心臟病和骨質疏松癥等在西方國家的發病率遠遠高于東方國家。科學家對這種現象進行了分析后認為東、西方的飲食差異是造成這種疾病發病率的主要原因。亞洲人大量食用豆制品，其人均消費量是西方國家的20-40倍，并發現亞洲人食物中含有大量異黃酮類物質。亞洲人血或尿中的異黃酮類物質及其代謝產物的水平均是西方人的20倍以上。在做了大批對照實驗之后，他們提出飲食中的異黃酮類物質具有防癌和治療乳腺癌、前列腺炎、結腸癌、心血管病和骨質疏松癥等疾病的功效。證實異黃酮類物質是造成這種差異的原因。有關大豆異黃酮提取工藝的研究，如美國專利US5679806公開的分離與純化大豆異黃酮的方法，該方法以大豆糖蜜或脫脂大豆粉為原料，經過三步反應分別得到較純的大豆異黃酮甙和大豆異黃酮甙元，沒有得到純度較高的總大豆異黃酮。且該工藝存在以下不足
I.用甲醇進行浸提，浸提后大豆廢渣不能再做飼料或他用。2.柱層析時用甲醇作淋洗劑，殘留甲醇對人體有害。3.用聚甲基丙烯酸甲酯進行柱層析，價格較高，不易于工業化生產。公開號為CN 1174839A的中國專利公開了從大豆廢糖蜜中回收異黃酮的方法。該方法主要目的是得到大豆異黃酮甙元，但該工藝采用離心分離進行濃縮，用昂貴的酶水解，工業化不易實現。公開號為CN 1211573的中國專利公開了一種提取大豆異黃酮的方法，該方法以大豆粉為原料，用正己烷脫去脂肪，再經兩步水解得到大豆異黃酮甙和大豆異黃酮甙元，主要目的為得到不同的甙和甙元，但是該方法得到的大豆異黃酮純度有待進一步提聞。
發明內容
本發明主要涉及從大豆中提取并純化異黃酮的方法，主要目的是得到和天然大豆成分一致的大豆異黃酮產品，能夠符合國家中藥生產的要求，進而開發出中藥產品。本發明的方法包括以下步驟
(1)原料準備取干燥大豆粉碎成粒徑為40-80目；
(2)醇提按每2000 4000mL50 80%乙醇加入IOkg原料的比例回流提取2 4h，過80^500目孔徑篩，取濾液，上述的提取重復2飛次；
(3)合并濾液，濃縮至乙醇濃度<2. 5%濃縮液；(4)萃取將濃縮液在濃縮體積2飛倍的乙酸乙酯中萃取2 4h，過8(Γ500目孔徑篩，上述萃取重復2飛次；
(5)將所得萃取液濃縮至乙酸乙酯濃度<2. 5% ；
(6)硅膠柱層析按硅膠柱體體積8 12倍量取乙酸乙酯萃取液經硅膠柱層析；所述硅膠粒徑100-300目；
(7)洗脫用丙酮含量為1(Γ50%的石油醚-丙酮混合液洗脫；
(8)收集洗脫液，經過ODS高效液相制備柱，將所得到的流動相脫除石油醚和丙酮即得到大豆中的異黃酮類化合物。(9)干燥、計算大豆異黃酮的提取率。其中上述步驟(6)中的硅膠粒徑優選為100-200目。其中上述步驟(8)中，所述的制備柱直徑和長度分別為直徑為1.5cm長度為70cm
其中上述步驟(8)中的ODS是十八烷基硅烷鍵合硅膠柱，一般直接寫0DS。本發明的有益效果為本發明的提取方法簡單，設備要求低，經醇提后進行萃取并經硅膠柱層析，可以使大豆異黃酮的提取率超過50%，為從大豆中提取異黃酮化合物提供了一種新途徑，對于充分利用植物資源和開發高天然藥物具有重要意義。
具體實施例方式下面結合具體實施例對本發明的技術方案進行詳細的說明。實施例I
取干燥的粉碎的大豆顆粒為原料，按每3000mL60%的乙醇加入IOkg原料回流提取
2.Oh,過80目的孔徑篩，取過濾液，截留物再按10kg/2500mL60%的乙醇比例重復回流提取2次，合并濾液，減壓濃縮并脫醇至乙醇濃度2%得濃縮液，將濃縮液在濃縮體積2倍的乙酸乙酯中萃取2h，過140目篩，截留物重復進行2次萃取，將所得萃取液濃縮至乙酸乙酯濃度2%,按娃膠柱體體積8倍量取乙酸乙酯萃取液經100目娃膠柱層析,用丙酮含量為15%的石油醚-丙酮混合液洗脫，收集洗脫液，經過反相ODS高效液相制備柱，固定相為硅膠，顆粒度為325目，將所得到的流動相脫除石油醚和丙酮即得到大豆中的異黃酮類化合物。干燥、計算大豆異黃酮的提取率為55%，其提取質量為13. 75g。實施例2
取干燥的粉碎的大豆顆粒為原料，按每3000mL65%的乙醇加入IOkg原料回流提取
2.5h，過80目的孔徑篩，取過濾液，截留物再按10kg/2500mL65%的乙醇比例重復回流提取2次，合并濾液，減壓濃縮并脫醇至乙醇濃度2%得濃縮液，將濃縮液在濃縮體積2倍的乙酸乙酯中萃取2. 5h，過500目篩，截留物重復進行2次萃取，將所得萃取液濃縮至乙酸乙酯濃度2%，按硅膠柱體體積10倍量取乙酸乙酯萃取液經120目硅膠柱層析，用丙酮含量為30%的石油醚-丙酮混合液洗脫，收集洗脫液，經過反相ODS高效液相制備柱，固定相為硅膠，顆粒度為500目，將所得到的流動相脫除石油醚和丙酮即得到大豆中的異黃酮類化合物。干燥、計算大豆異黃酮的提取率為63%，其提取質量為15. 75g。實施例3
取干燥的粉碎的大豆顆粒為原料，按每3000mL70%的乙醇加入IOkg原料回流提取2.5h，過80目的孔徑篩，取過濾液，截留物再按10kg/2500mL70%的乙醇比例重復回流提取3次，合并濾液，減壓濃縮并脫醇至乙醇濃度2%得濃縮液，將濃縮液在濃縮體積2. 5倍的乙酸乙酯中萃取3h，過140目篩，截留物重復進行2次萃取，將所得萃取液濃縮至乙酸乙酯濃度2%，按硅膠柱體體積10倍量取乙酸乙酯萃取液經120目硅膠柱層析，用丙酮含量為50%的石油醚-丙酮混合液洗脫，收集洗脫液，經過反相ODS高效液相制備柱，固定相為硅膠，顆粒度為800目，將所得到的流動相脫除石油醚和丙酮即得到大豆中的異黃酮類化合物。干燥、計算大豆異黃酮的提取率為75%，其提取質量為15. 75g。實施例4
取干燥的粉碎的大豆顆粒為原料，按每3000mL75%的乙醇加入IOkg原料回流提取
3.Oh,過100目的孔徑篩，取過濾液，截留物再按10kg/2500mL75%的乙醇比例重復回流提 取3次，合并濾液，減壓濃縮并脫醇至乙醇濃度2%得濃縮液，將濃縮液在濃縮體積2. 5倍的乙酸乙酯中萃取3. 5h，過140目篩，截留物重復進行2次萃取，將所得萃取液濃縮至乙酸乙酯濃度2%，按硅膠柱體體積10倍量取乙酸乙酯萃取液經120目硅膠柱層析，用丙酮含量為50%的石油醚-丙酮混合液洗脫，收集洗脫液，經過反相ODS高效液相制備柱，固定相為硅膠，顆粒度為800目，將所得到的流動相脫除石油醚和丙酮即得到大豆中的異黃酮類化合物。干燥、計算大豆異黃酮的提取率為90%，其提取質量為22. 50g。實施例5
取干燥的粉碎的大豆顆粒為原料，按每3000mL80%的乙醇加入IOkg原料回流提取
3.0h，過200目的孔徑篩，取過濾液，截留物再按10kg/2500mL80%的乙醇比例重復回流提取3次，合并濾液，減壓濃縮并脫醇至乙醇濃度2%得濃縮液，將濃縮液在濃縮體積2. 5倍的乙酸乙酯中萃取4h，過200目篩，截留物重復進行2次萃取，將所得萃取液濃縮至乙酸乙酯濃度2%，按硅膠柱體體積8倍量取乙酸乙酯萃取液經120目硅膠柱層析，用丙酮含量為25%的石油醚-丙酮混合液洗脫，收集洗脫液，經過反相ODS高效液相制備柱，固定相為硅膠，顆粒度為200目，將所得到的流動相脫除石油醚和丙酮即得到大豆中的異黃酮類化合物。干燥、計算大豆異黃酮的提取率為89%，其提取質量為22. 25g。
權利要求
1.大豆中異黃酮的提取與純化方法，其特征在于包括以下步驟 (1)原料準備取干燥大豆粉碎成粒徑為40-80目； (2)醇提按每200(T4000mL50^80%乙醇加入IOkg原料的比例回流提取2 4h，過80^500目孔徑篩，取濾液，上述的提取重復2飛次； (3合并濾液，濃縮至乙醇濃度< 2. 5%濃縮液； (4)萃取將濃縮液在濃縮體積2飛倍的乙酸乙酯中萃取2 4h，過8(Γ500目孔徑篩，上述萃取重復2飛次； (5)將所得萃取液濃縮至乙酸乙酯濃度<2. 5% ； (6)硅膠柱層析按硅膠柱體體積8 12倍量取乙酸乙酯萃取液經硅膠柱層析；所述硅膠粒徑100-300目； (7)洗脫用丙酮含量為1(Γ50%的石油醚-丙酮混合液洗脫； (8)收集洗脫液，經過ODS高效液相制備柱，將所得到的流動相脫除石油醚和丙酮即得到大豆中的異黃酮類化合物； (9)干燥、計算大豆異黃酮的提取率。
2.如權利要求I所述的大豆中異黃酮的提取與純化方法，其特征在于所述的步驟(6)中的硅膠粒徑優選為100-200目。
3.如權利要求I所述的大豆中異黃酮的提取與純化方法，其特征在于所述的步驟(8)中的ODS是十八烷基硅烷鍵合硅膠柱。
全文摘要
本發明屬于植物提取技術領域，尤其涉及一種從大豆中提取與純化異黃酮的方法。本發明主要涉及從大豆中提取并純化異黃酮的方法，主要目的是得到和天然大豆成分一致的大豆異黃酮產品，能夠符合國家中藥生產的要求，進而開發出中藥產品。本發明的提取方法簡單，設備要求低，經醇提后進行萃取并經硅膠柱層析，可以使大豆異黃酮的提取率超過50%，為從大豆中提取異黃酮化合物提供了一種新途徑，對于充分利用植物資源和開發高天然藥物具有重要意義。
文檔編號C07D311/40GK102977066SQ201210522278
公開日2013年3月20日 申請日期2012年12月7日 優先權日2012年12月7日
發明者張成如 申請人:山東大學