專利名稱：用于檢測乙酰膽堿酯酶及其抑制劑活性的探針、用途及制備方法
技術領域：
本發明涉及一種用于檢測乙酰膽堿酯酶及其抑制劑活性的探針、用途及制備方法。
背景技術：
乙酰膽堿酯酶(AChE)活性快速檢測技術的發展，對于促進人體健康以及環境保護
具有重大意義。目前用于治療老年癡呆癥的藥物主要是乙酰膽堿酯酶抑制劑，通過抑制乙酰膽堿酯酶(AChE)活性來控制患者體內乙酰膽堿含量，因此乙酰膽堿酯酶(AChE)活性檢測劑的開發對于相關藥物的篩選具有重要作用。此外，某些有機磷農藥、氨基甲酸酯農藥會對乙酰膽堿酯酶(AChE)活性產生抑制作用，因此乙酰膽堿酯酶(AChE)活性檢測劑的研制對于檢測環境中有機磷農藥、氨基甲酸酯農藥也能夠發揮重要作用。傳統乙酰膽堿酯酶(AChE)活性檢測技術主要采用間接監控法，該方法采用硫代膽堿作為底物，乙酰膽堿酯酶(AChE)水解該底物生成硫代膽堿，后者與二硫代硝基苯甲酸(Ellman)反應生成黃色產物，通過吸收光譜監控黃色物質的生成速度來確定酶活性。但是，該方法在使用過程中往往會有背景干擾，且靈敏度較低。據發明人了解，應用熒光探針的檢測方法具有良好的靈敏性，應當由此角度入手，研發更好的檢測方法。
發明內容
本發明所要解決的技術問題是:克服現有技術存在的問題，提供一種用于檢測乙酰膽堿酯酶及其抑制劑活性的探針、用途及制備方法。本發明技術構思如下:據發明人所知，氯化肉豆蘧酰膽堿(Myristoylcholinechloride)在乙酰膽堿酯酶(AChE)作用下裂解為酸和膽堿，只要制備出能與氯化肉豆蘧酰膽堿發生反應產生熒光的探針即可。本發明解決其技術問題的技術方案如下:本發明一種用于檢測乙酰膽堿酯酶及其抑制劑活性的探針前體，其特征是，具有如式I所示的結構:
權利要求
1.一種用于檢測乙酰膽堿酯酶及其抑制劑活性的探針前體，其特征是，具有如式I所示的結構:
2.一種制備權利要求1所述探針前體的方法，其特征是，包括以下步驟:第一步、將10，12-二炔二十五酸與氯化亞砜反應得到式II化合物；
3.根據權利要求2所述方法，其特征是，第一步的具體過程為:先將10，12-二炔二十五酸溶解于二氯甲烷、再加入氯化亞砜得到反應液，在氮氣保護下持續攪拌該反應液直至反應結束；然后，減壓蒸餾去除溶劑，即得式II化合物。
4.根據權利要求2所述方法，其特征是，第二步的具體過程為:先將式II化合物溶解于四氫呋喃中得到式II化合物溶液，再將式II化合物溶液加至含有三乙二醇的四氫呋喃溶液中、得到反應液，在氮氣保護下持續攪拌該反應液直至反應結束；然后，減壓蒸餾去除溶劑獲得粗產物，并將粗產物以層析柱純化，即得式I所示探針前體。
5.根據權利要求4 所述方法，其特征是，第二步中，在層析柱純化過程中采用體積比100:2的二氯甲烷:甲醇為洗脫液。
6.一種用于檢測乙酰膽堿酯酶及其抑制劑活性的囊泡探針，其特征是，由重量比為7:3的10，12-二炔二十五酸和式I化合物聚合而成。
7.一種制備權利要求6所述囊泡探針的方法，其特征是，包括以下步驟: 將10，12- 二炔二十五酸和式I化合物按重量比7:3溶解于二甲基亞砜得到DMSO溶液，將DMSO溶液加至溫度為至少80°C的4-羥乙基哌嗪乙磺酸緩沖液中得到反應液，冷卻反應液，以紫外光照射反應液進行聚合反應，即得囊泡探針。
8.根據權利要求7所述方法，其特征是，冷卻反應液前，將反應液超聲、并用濾器過濾。
9.根據權利要求7所述方法，其特征是，采用254nm紫外燈作為紫外光源。
10.權利要求6所述囊泡探針用于檢測乙酰膽堿酯酶及其抑制劑活性的用途。
全文摘要
本發明涉及一種用于檢測乙酰膽堿酯酶及其抑制劑活性的探針、用途及制備方法。該探針由重量比為7:3的10，12-二炔二十五酸和式Ⅰ化合物聚合而成，本發明的囊泡探針在4-羥乙基哌嗪乙磺酸緩沖液中呈藍色且無熒光，與氯化肉豆蔻酰膽堿發生反應后變為紅色并發出熒光(熒光發射波長約550nm)，靈敏度高，易于操作，采用該探針的熒光檢測方法在生物醫藥領域有極大的應用前景。
文檔編號C07C69/606GK103073427SQ20121046177
公開日2013年5月1日 申請日期2012年11月16日 優先權日2012年11月16日
發明者陳小強, 周國棟, 王芳, 王惠琳 申請人:南京工業大學