一種甜菊糖苷St的工業高效液相色譜精制方法
【專利摘要】本發明屬于天然產物提取領域，采用甜葉菊提取物粗品為原料，通過HPLC優化條件得到合適的流動相和柱分離條件，進一步放大到工業制備級液相色譜分離系統，精制得到高純度的甜菊糖苷St。本發明的優點是，粗品使用工業制備級液相色譜分離制備所需物質，可達到較好的分離提純效果，所需溶劑成本低，操作簡單，周期短，效率高，純度可達99.5%以上。
【專利說明】一種甜菊糖苷St的工業高效液相色譜精制方法
【技術領域】
[0001]本發明屬于天然產物提取領域，具體涉及一種甜菊糖苷的制備方法。
【背景技術】
[0002]甜菊糖苷(Stevia)又稱作甜菊糖(Stevia sugar),甜葉菊葉子提取物,不含糖分和熱量。它們是一類具甜味的萜烯類配糖體，色澤白色至微黃色，口感適宜、無異味，是發展前景廣闊的新糖源。其中，甜菊糖苷St成分占糖苷總量的60%~70%，甜度為蔗糖的300倍，是我國衛生部批準使用的甜味劑，其天然低熱值并且非常接近蔗糖口味。是繼甘蔗、甜菜糖之外第三種有開發價值和健康推崇的天然甜味劑，被國際上譽為“世界第三糖源”。其通常可以采用傳統低壓層析的方法制備得到甜菊糖苷產品，但是工藝技術耗時長，生產量也受到限制，同時純度不高。
【發明內容】
[0003]本發明的目的在于針對目前在甜菊糖苷粗品精制過程中所存在的時間長以及純度不高的問題，提供一種采用工業制備級液相色譜分離系統制備高純度甜菊糖苷St的新方法，該方法包括以下步驟:
a.將甜菊糖苷粗品與水溶液混合后進行過濾，一般將甜菊糖苷粗品配置成飽和溶液，具體實施時，可根據實際溶解效果進行調整；
b.采用HPLC優化甜菊糖苷St的最佳分離洗脫條件，將其等比例放大，應用在填充十八烷基反相硅膠填料的動態軸向壓縮柱上進行分離，在線收集甜菊糖苷St對應譜帶的餾分；
c.將步驟b中收集的對應譜帶洗脫液減壓干燥，即可得到色譜純為99.5%的甜菊糖苷
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[0004]本發明的有益效果是直接采用提取后的甜菊糖苷粗品來制備甜菊糖苷St，不需要大量的前處理過程，簡單、易控制，工藝技術簡化，適用于大規模制備。高效液相色譜測定中，總雜質峰小于0.5%，純度大于99.5%，完全可用于食品和藥物的開發。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0005]圖1是甜菊糖苷粗品液相色譜法測定圖譜。
[0006]圖2是用填充10 μ m十八烷基反相硅膠填料的動態軸向壓縮柱分離純化甜菊糖苷的高效液相色譜圖，進樣400mg。
[0007]圖3是用填充10μ m十八烷基反相硅膠填料的動態軸向壓縮柱分離純化甜菊糖苷的高效液相色譜圖，進樣lg。
[0008]圖4是用填充20-45 μ m十八烷基反相硅膠填料的動態軸向壓縮柱分離純化甜菊糖苷的高效液相色譜圖，進樣lg。
【具體實施方式】[0009]實施例1
1.取400mg甜菊糖苷粗品與水溶液混合,配置成飽和溶液，置于過濾裝置中，過濾除去固體顆粒；
2.將甜菊糖苷溶液注入動態軸向壓縮柱制備色譜系統，動態軸向壓縮柱尺寸為Φ50X 250mm,十八烷基反相硅膠填料粒徑為10 μ m,上樣量400mg，流動相流速為80ml/min。分離初期，流動相甲醇與水體積比范圍為30/70-20/80，洗脫45min后，流動相甲醇與水的體積比切換為90/10，洗脫至65min，使后端雜質沖洗出來，一個分離周期結束。采用的紫外光度檢測器的檢測波長為210nm，收集保留時間在29~33min的餾分，如圖2所示，經HPLC分析純度≥99.5%。
[0010]實施例2
1.取Ig甜菊糖苷粗品與水溶液混合，配置成飽和溶液，置于過濾裝置中，過濾除去固體顆粒；
2.將甜菊糖苷溶液注入動態軸向壓縮柱制備色譜系統，動態軸向壓縮柱尺寸為Φ 50 X 250mm，十八烷基反相硅膠填料粒徑為10 μ m，上樣量lg，流動相流速為80ml/min。分離初期，流動相甲醇與水體積比為30/70-20/80，洗脫45min后，流動相甲醇與水體積比切換為90/10，洗脫65min，使后端雜質沖洗出來，一個分離周期結束。采用的紫外光度檢測器的檢測波長為210nm，收集保留時間在29~33min的餾分，如圖3所示，經HPLC分析純度≥ 99.5%。
[0011]實施例3
1.取Ig甜菊糖苷粗品與水溶液混合，配置成飽和溶液，置于過濾裝置中，過濾除去固體顆粒；
2.將甜菊糖苷溶液注入動態軸向壓縮柱制備色譜系統，動態軸向壓縮柱尺寸為Φ50X 250mm，十八烷基反相硅膠填料粒徑為20-45μπι，上樣量lg，流動相流速為80ml/min。分離初期，流動相甲醇與水體積比為40/60-20/80，洗脫55min后，流動相甲醇與水體積比切換為90/10，洗脫65min，使后端雜質沖洗出來，一個分離周期結束。采用的紫外光度檢測器的檢測波長為210nm，收集保留時間在47飛Imin的餾分，如圖4所示，經HPLC分析純度≥99.5%ο
【權利要求】
1.一種甜菊糖苷的制備方法，其特征在于包括以下步驟: (1)將甜菊糖苷粗品與水混合后進行過濾，除去微小的固體不溶物，得到濾液作為分離粗品; (2)將過濾產物通過進樣泵或者進樣閥注入動態軸向壓縮制備色譜系統； (3)采用甲醇和水做流動相，梯度洗脫，將色譜峰對應的流出液進行減壓干燥，即可得到高純度的甜菊糖苷St。
2.根據權利要求1所述的方法，其特征是:所述步驟(2)中，在制備色譜系統中，采用動態軸向壓縮柱，規格為Φ50Χ250πιπΦ150Χ250πιπι，且所填充固定相為十八烷基反相硅膠填料，粒徑為10 μ m~45 μ m。
3.根據權利要求1所述的方法，其特征是:所述步驟(3)中，梯度洗脫時，流動相甲醇與水的體積比(V/V)范圍為4:6~9:1。
【文檔編號】C07H15/256GK103788149SQ201210425196
【公開日】2014年5月14日 申請日期:2012年10月31日 優先權日:2012年10月31日
【發明者】張宇, 王亞輝, 沈健增 申請人:江蘇漢邦科技有限公司