專利名稱：一種制備黑蔓素g-1的方法
技術領域：
本發明屬于植物有效成分提取技術領域，涉及一種制備黑蔓素G-I的方法。
背景技術：
黑蔓素G-I (Triptogelin G-1)是一種倍半職類化合物,分子式為C26H34O5,分子量為426. 55。為白色粉末，mp. 137-139°C。來源于衛矛科大芽南蛇藤、南蛇藤、冠葉南蛇藤、黑蔓雷公藤等植物中，其中以大芽南蛇藤含量較高。楊華等對大芽南蛇藤水解產物的生物活性研究表明，藥理研究表明，黑蔓素G-I具有殺蟲活性，可作為拒食劑。經文獻檢索，尚未發現黑蔓素G-I的工業提取純化方法的相關報道
發明內容
本發明的目的在于提供一種制備黑蔓素G-I的方法。本發明提供的從大芽南蛇藤種子中提取制備黑蔓素G-I的方法步驟如下
(1)將大芽南蛇藤種子藥材粉碎，用乙醇微波提取2-3次，每次10-60min，合并提取液旋轉蒸發濃縮得到浸膏；
(2)將浸膏用乙酸乙酯和水的混合溶液分散，乙酸乙酯和水的體積比為8:2，靜置分層10-24h，分液，取上相，減壓濃縮蒸干得到乙酸乙酯萃取物，將乙酸乙酯萃取物用正己烷和甲醇的混合溶液溶解，過濾，正己烷和甲醇的體積比為2:1，濾液靜置分層4-8h，分液，取下相，減壓濃縮蒸干得到甲醇萃取物；
(3)甲醇萃取物通過硅膠柱層析，以正庚烷-乙醚為洗脫劑進行梯度洗脫，得到黑蔓素G-I流分；
(4)將黑蔓素G-I流分濃縮后用等體積甲醇分散，以尼龍膜過濾，經制備液相ODSRP-C18反相柱進行純化，以甲醇和水的混合溶液進行洗脫，濃縮得到黑蔓素G-I。所述步驟(I)中大芽南蛇藤種子粉碎過20-60目篩。所述步驟(3 )中正庚烷-乙醚梯度洗脫是按正庚烷-乙醚體積比10:1、5:1、3:2進行梯度洗脫。所述步驟(4)中尼龍膜為孔徑0.45 μ m的尼龍膜。所述步驟(4 )中甲醇和水的混合溶液是用73%甲醇水溶液。本發明的特點在于首次從大芽南蛇藤種子中分離得到黑蔓素G-1，制備方法簡單、采用乙醇微波提取，進一步用雙水相萃取和柱層析純化結晶，以及制備液相分離純化得到高純度的晶體，為大規模自動化生產提供了可能，節省了分離時間，提高了分離率。
具體實施例方式 下面結合實施例對本發明作進一步闡述，但本發明不限于此。實施例I :
將5kg干燥的大芽南蛇藤種子莖葉粉碎過40目篩，用85%乙醇微波提取3次，每次30min，合并提取液濃縮得到浸膏。將浸膏用乙酸乙酯和水的混合溶液(乙酸乙酯和水的體積比為8:2)攪拌溶解，過濾，濾液靜置分層20h，分液，取上相，減壓濃縮蒸干得到乙酸乙酯萃取物。將乙酸乙酯萃取物用正己烷和甲醇的混合溶液(正己烷和甲醇的體積比為2:1)攪拌溶解，過濾，濾液靜置分層4h，分液，取下相，減壓濃縮蒸干得到甲醇萃取物。將甲醇萃取物通過硅膠柱層析(甲醇萃取物與硅膠用量之比為1:3)，按正庚烷-乙醚體積比10:1、5: I、3:2進行梯度洗脫，每個梯度用量500ml，收集含黑蔓素G-I的組分，旋轉蒸發，濃縮得到黑蔓素G-1，純度約為81%，進一步，用少量甲醇完全溶解所得產物，用O. 45 μ m尼龍膜過濾，經制備液相ODS RP-C18反相柱進行純化，以73%甲醇水溶液進行洗脫，濃縮得到純度大于98%的黑蔓素G-I純品。實施例2:
將5kg干燥的大芽南蛇藤種子莖葉粉碎過20目篩，用90%乙醇微波提取2次，每次60min，合并提取液濃縮得到浸膏。將浸膏用乙酸乙酯和水的混合溶液(乙酸乙酯和水的體積比為8:2)攪拌溶解，過濾，濾液靜置分層10h，分液，取上相，減壓濃縮蒸干得到乙酸乙酯萃取物。將乙酸乙酯萃取物用正己烷和甲醇的混合溶液(正己烷和甲醇的體積比為2:1)攪拌溶解，過濾，濾液靜置分層5h，分液，取下相，減壓濃縮蒸干得到甲醇萃取物。將甲醇萃取 物通過硅膠柱層析(甲醇萃取物與硅膠用量之比為1:4)，按正庚烷-乙醚體積比10:1、5:1、3:2進行梯度洗脫，每個梯度用量500ml，收集含黑蔓素G-I的組分，旋轉蒸發，濃縮得到黑蔓素G-I，純度約為82%，進一步，用少量甲醇完全溶解所得產物，用O. 45 μ m尼龍膜過濾，經制備液相ODS RP-C18反相柱進行純化，以73%甲醇水溶液進行洗脫，濃縮得到純度大于98%的黑蔓素G-I純品。實施例3
將5kg干燥的大芽南蛇藤種子莖葉粉碎過60目篩，用80%乙醇微波提取4次，每次lOmin，合并提取液濃縮得到浸膏。將浸膏用乙酸乙酯和水的混合溶液(乙酸乙酯和水的體積比為8:2)攪拌溶解，過濾，濾液靜置分層14h，分液，取上相，減壓濃縮蒸干得到乙酸乙酯萃取物。將乙酸乙酯萃取物用正己烷和甲醇的混合溶液(正己烷和甲醇的體積比為2:1)攪拌溶解，過濾，濾液靜置分層8h，分液，取下相，減壓濃縮蒸干得到甲醇萃取物。將甲醇萃取物通過硅膠柱層析(甲醇萃取物與硅膠用量之比為1:3)，按正庚烷-乙醚體積比10:1、5: I、3:2進行梯度洗脫，每個梯度用量500ml，收集含黑蔓素G-I的組分，旋轉蒸發，濃縮得到黑蔓素G-I，純度約為80%，進一步，用少量甲醇完全溶解所得產物，用O. 45 μ m尼龍膜過濾，經制備液相ODS RP-C18反相柱進行純化，以73%甲醇水溶液進行洗脫，濃縮得到純度大于98%的黑蔓素G-I純品。實施例4:
將5kg干燥的大芽南蛇藤種子莖葉粉碎過20目篩，用75%乙醇微波提取2次，每次40min，合并提取液濃縮得到浸膏。將浸膏用乙酸乙酯和水的混合溶液(乙酸乙酯和水的體積比為8:2)攪拌溶解，過濾，濾液靜置分層24h，分液，取上相，減壓濃縮蒸干得到乙酸乙酯萃取物。將乙酸乙酯萃取物用正己烷和甲醇的混合溶液(正己烷和甲醇的體積比為2:1)攪拌溶解，過濾，濾液靜置分層6h，分液，取下相，減壓濃縮蒸干得到甲醇萃取物。將甲醇萃取物通過硅膠柱層析(甲醇萃取物與硅膠用量之比為1:5)，按正庚烷-乙醚體積比10:1、5: I、3:2進行梯度洗脫，每個梯度用量500ml，收集含黑蔓素G-I的組分，旋轉蒸發，濃縮得到黑蔓素G-I，純度約為83%，進一步，用少量甲醇完全溶解所得產物，用O. 45 μ m尼龍膜過濾，經制備液相ODS RP-C18反相柱進行純化，以73%甲醇水溶液進行洗脫，濃縮得到純度大于98%的黑蔓素G-I純品。 ·
權利要求
1.一種制備黑蔓素G-I的方法，其特征在于該方法包括以下步驟 (1)將大芽南蛇藤種子藥材粉碎，用こ醇微波提取2-3次，每次10-60min，合并提取液旋轉蒸發濃縮得到浸膏； (2)將浸膏用こ酸こ酯和水的混合溶液分散，こ酸こ酯和水的體積比為8:2，靜置分層10-24h，分液，取上相，減壓濃縮蒸干得到こ酸こ酯萃取物，將こ酸こ酯萃取物用正己烷和甲醇的混合溶液溶解，過濾，正己烷和甲醇的體積比為2:1，濾液靜置分層4-8h，分液，取下相，減壓濃縮蒸干得到甲醇萃取物； (3)甲醇萃取物通過硅膠柱層析，以正庚烷-こ醚為洗脫劑進行梯度洗脫，得到黑蔓素G-I流分； (4)將黑蔓素G-I流分濃縮后用等體積甲醇分散，以尼龍膜過濾，經制備液相ODSRP-C18反相柱進行純化，以甲醇和水的混合溶液進行洗脫，濃縮得到黑蔓素G-I。
2.如權利要求I所述的ー種制備黑蔓素G-I的方法，其特征在于，所述步驟(I)中大芽南蛇藤種子粉碎過20-60目篩。
3.如權利要求I所述的ー種制備黑蔓素G-I的方法，其特征在于，所述步驟(3)中正庚烷-こ醚梯度洗脫是按正庚烷-こ醚體積比10:1、5:1、3:2進行梯度洗脫。
4.如權利要求I所述的ー種制備黑蔓素G-I的方法，其特征在于，所述步驟(4)中尼龍膜為孔徑O. 45 μ m的尼龍膜。
5.如權利要求I所述的ー種制備黑蔓素G-I的方法，其特征在于，所述步驟(4)中甲醇和水的混合溶液是用73%甲醇水溶液。
全文摘要
本發明公開了一種制備黑蔓素G-1的方法，它是將大芽南蛇藤種子作原料，用乙醇提取，將提取液濃縮后得到浸膏，先用乙酸乙酯-水體系分配，取上相減壓回收乙酸乙酯，得乙酸乙酯萃取物，將乙酸乙酯萃取物再用正己烷-甲醇體系分配，取下相減壓濃縮得到甲醇萃取物，通過硅膠柱色譜，以正庚烷-乙醚洗脫梯度洗脫，收集含黑蔓素G-1流分，濃縮后用等體積甲醇分散，以尼龍膜過濾，經制備液相ODSRP-C18反相柱進行純化，以甲醇和水的混合溶液進行洗脫，濃縮得到黑蔓素G-1。
文檔編號C07D307/94GK102838573SQ20121037340
公開日2012年12月26日 申請日期2012年9月27日 優先權日2012年9月27日
發明者蘇劉花 申請人:南京澤朗農業發展有限公司