專利名稱：一種從臺灣含笑中提取分離含笑內酯的方法
技術領域：
本發明屬于天然藥物化學領域，特別是涉及一種從臺灣含笑中提取分離含笑內酯的方法。
背景技術：
含笑內酯(Micheliolide)屬于倍半萜內酯類化合物,為愈創木烷型倍半萜內酯類化合物。分子式為C15H2tlO3,分子量為248. 32，為無色結晶，mp. 142_145°C。再木蘭科植物黃蘭 Mickelia champaca L.的根皮、臺灣含笑#2.<^<97/<3 compressa (Maxim. ) Sarg.的根皮中均有分布。有報道發現含笑內酯在治療白血病方面同小白菊內酯的效果幾乎等同，且其對正常細胞無明顯殺傷作用。研究發現含笑內酯及其衍生物可用于治療如下癌癥白血病、乳腺癌、前列腺癌、大腸癌或肺癌，另有報道含笑內酯還具有治療肝癌、食道癌、胃癌、腸道癌、腎癌、口腔癌、何杰金淋巴癌、胰腺癌、直腸結腸癌等的用途。 現有制備含笑內酯的方法主要通過化學合成，中國專利申請號201010153685. 5公開了一種含笑內酯的制備方法，以小白菊內酯為原料，在適當有機溶劑中，在酸催化劑下制備得到含笑內酯，產率達60%以上。該方法副產物較多，不易分離，且重現性較差，不適用于工業化生產。
發明內容
本發明的目的在于解決現有技術的不足和缺陷，提供一種從臺灣含笑中提取分離含笑內酯的方法。為了實現上述目的，本發明的技術方案如下
一種從臺灣含笑中提取分離含笑內酯的方法，其特征在于包括以下步驟以臺灣含笑為原料，粉碎20-40目，加入萃取釜中，以無水甲醇為夾帶劑，采用超臨界CO2萃取，收集萃取液，回收甲醇，得萃取物，用石油醚回流脫除脂溶性雜質，再將脫脂物用低碳醇熱溶，加入活性炭回流脫色，脫色液回收溶劑至適量體積，經制備液相ODS RP-C18反相柱進行純化，以甲醇和水的混合溶液進行洗脫，濃縮對應組分，石油醚-丙酮(2:1，V/V)重結晶，得含笑內酯產品。所述超臨界CO2萃取條件為萃取溫度為45_60°C，萃取壓力為23_34MPa，分離釜I溫度為40-50°C，壓力為8-10MPa，分離釜II溫度為35_40°C，壓力為4_6MPa，萃取時間為2-6h。所述石油醚脫脂，加入2-5倍萃取物體積量的石油醚加熱回流脫脂1-3次，離心，分離固液，得脫脂物。所述低碳醇為C1-C4醇，優選乙醇、甲醇或異丙醇。所述甲醇和水的混合溶液是指甲醇體積百分比為83%，水的體積百分比為17%的混合溶液。本發明優勢在于方法采用超臨界CO2萃取，提取效率高、能耗低、綠色環保；用制備液相直接分離純化出高純度的晶體，為大規模工業化生產提供了可能，大大節省了分離時間，提高了分離率。
具體實施例方式 下面將結合具體實施方式
進一步說明本發明，但本發明要求保護的范圍并不局限于下列實施例。實施例I :
臺灣含笑藥材粉碎40目，取IOkg原料加入超臨界CO2萃取釜中，開啟設備，設定參數萃取溫度為45°C，萃取壓力為34MPa，分離釜I溫度為40°C，壓力為lOMPa，分離釜II溫度為 38 0C，壓力為4MPa。通入CO2流體，達到上述參數后，以CO2液體22L/h流量萃取，并夾帶無水甲醇3L/h，動態萃取3. 5h，收集萃取液，回收甲醇，加入2倍萃取物體積的石油醚，加熱回流提取I次，離心除去液體，再將脫脂物用甲醇加熱溶解，加入活性炭回流脫色，脫色液回收溶劑至原體積的1/3,以甲醇超聲溶解配制成20mg/ml濃度的溶液,用O. 45 μ m的尼龍膜濾過濾，用制備高效液相色譜儀分離純化，甲醇-水(83:17)等梯度洗脫，收集響應組分旋轉蒸發濃縮后，得到純度為95. 3%的含笑內酯晶體，再經石油醚-丙酮(2:1，V/V)重結晶3次，得純度為98. 7%的含笑內酯產品。實施例2:
臺灣含笑藥材粉碎20目，取IOkg原料加入超臨界CO2萃取釜中，開啟設備，設定參數萃取溫度為58°C，萃取壓力為31MPa，分離釜I溫度為50°C，壓力為8MPa，分離釜II溫度為40 0C，壓力為6MPa。通入CO2流體，達到上述參數后，以CO2液體22L/h流量萃取，并夾帶無水甲醇3L/h，動態萃取4h，收集萃取液，回收甲醇，加入3倍萃取物體積的石油醚，加熱回流提取3次，離心除去液體，再將脫脂物用異丙醇加熱溶解，加入活性炭回流脫色，脫色液回收溶劑至原體積的1/3,以甲醇超聲溶解配制成20mg/ml濃度的溶液,用O. 45 μ m的尼龍膜濾過濾，用制備高效液相色譜儀分離純化，甲醇-水(83:17)等梯度洗脫，收集響應組分旋轉蒸發濃縮后，得到純度為95. 6%的含笑內酯晶體，再經石油醚-丙酮(2:1，V/V)重結晶2次，得純度為99. 2%的含笑內酯產品。實施例3
臺灣含笑藥材粉碎40目，取IOkg原料加入超臨界CO2萃取釜中，開啟設備，設定參數萃取溫度為46°C，萃取壓力為24MPa，分離釜I溫度為42°C，壓力為9MPa，分離釜II溫度為36 0C，壓力為5MPa。通入CO2流體，達到上述參數后，以CO2液體22L/h流量萃取，并夾帶無水甲醇3L/h，動態萃取5h，收集萃取液，回收甲醇,加入5倍萃取物體積的石油醚，加熱回流提取2次，離心除去液體，再將脫脂物用乙醇加熱溶解，加入活性炭回流脫色，脫色液回收溶劑至原體積的1/3,以甲醇超聲溶解配制成20mg/ml濃度的溶液,用O. 45 μ m的尼龍膜濾過濾，用制備高效液相色譜儀分離純化，甲醇-水(83:17)等梯度洗脫，收集響應組分旋轉蒸發濃縮后，得到純度為96. 1%的含笑內酯晶體，再經石油醚-丙酮(2:1，V/V)重結晶3次，得純度為98. 5%的含笑內酯產品。實施例4:
臺灣含笑藥材粉碎40目，取IOkg原料加入超臨界CO2萃取釜中，開啟設備，設定參數萃取溫度為53°C，萃取壓力為27MPa，分離釜I溫度為48°C，壓力為8MPa，分離釜II溫度為35 0C，壓力為4MPa。通入CO2流體，達到上述參數后，以CO2液體22L/h流量萃取，并夾帶無水甲醇3L/h，動態萃取3h，收集萃取液，回收甲醇，加入4倍萃取物體積的石油醚，加熱回流提取3次，離心除去液體，再將脫脂物用異丙醇加熱溶解，加入活性炭回流脫色，脫色液回收溶劑至原體積的1/3,以甲醇超聲溶解配制成20mg/ml濃度的溶液,用0. 45 y m的尼龍膜濾過濾，用制備高效液相色譜儀分離純化，甲醇-水(83:17)等梯度洗脫，收集響應組分旋轉蒸發濃縮后，得到純度為95. 8%的含笑內酯晶體，再經石油醚-丙酮(2:1，V/V)重結晶2次，得純度為98. 2%的含笑內酯產品。實施例5:
臺灣含笑藥材粉碎40目，取IOkg原料加入超臨界CO2萃取釜中，開啟設備，設定參數萃取溫度為60°C，萃取壓カ為23MPa，分離釜I溫度為43°C，壓カ為lOMPa，分離釜II溫度為380C，壓カ為6MPa。通入CO2流體，達到上述參數后，以CO2液體22L/h流量萃取，并夾帶無水甲醇3L/h，動態萃取6h，收集萃取液，回收甲 醇，加入2倍萃取物體積的石油醚，加熱回流提取2次，離心除去液體，再將脫脂物用こ醇加熱溶解，加入活性炭回流脫色，脫色液回收溶劑至原體積的1/3,以甲醇超聲溶解配制成20mg/ml濃度的溶液,用0. 45 y m的尼龍膜濾過濾，用制備高效液相色譜儀分離純化，甲醇-水(83:17)等梯度洗脫，收集響應組分旋轉蒸發濃縮后，得到純度為95. 5%的含笑內酯晶體，再經石油醚-丙酮(2:1，V/V)重結晶4次，得純度為98. 6%的含笑內酯產品。實施例6:
臺灣含笑藥材粉碎20目，取IOkg原料加入超臨界CO2萃取釜中，開啟設備，設定參數萃取溫度為56°C，萃取壓カ為33MPa，分離釜I溫度為46°C，壓カ為9MPa，分離釜II溫度為360C，壓カ為5MPa。通入CO2流體，達到上述參數后，以CO2液體22L/h流量萃取，并夾帶無水甲醇3L/h，動態萃取2h，收集萃取液，回收甲醇，加入5倍萃取物體積的石油醚，加熱回流提取I次，離心除去液體，再將脫脂物用甲醇加熱溶解，加入活性炭回流脫色，脫色液回收溶劑至原體積的1/3,以甲醇超聲溶解配制成20mg/ml濃度的溶液,用0. 45 y m的尼龍膜濾過濾，用制備高效液相色譜儀分離純化，甲醇-水(83:17)等梯度洗脫，收集響應組分旋轉蒸發濃縮后，得到純度為96. 3 %的含笑內酯晶體，再經石油醚-丙酮(2:1，V/V)重結晶5次，得純度為99. 5%的含笑內酯產品。
權利要求
1.一種從臺灣含笑中提取分離含笑內酯的方法，其特征在于包括以下步驟以臺灣含笑為原料，粉碎20-40目，加入萃取釜中，以無水甲醇為夾帶劑，采用超臨界CO2萃取，收集萃取液，回收甲醇，得萃取物，用石油醚回流脫除脂溶性雜質，再將脫脂物用低碳醇熱溶，力口入活性炭回流脫色，脫色液回收溶劑至適量體積，經制備液相ODS RP-C18反相柱進行純化，以甲醇和水的混合溶液進行洗脫，濃縮對應組分，石油醚-丙酮(2:1，V/V)重結晶，得含笑內酯產品。
2.根據權利要求I所述從臺灣含笑中提取含笑內酯的方法，其特征在于所述超臨界CO2萃取條件為萃取溫度為45-60°C，萃取壓力為23-34MPa，分離釜I溫度為40_50°C，壓力為8-10MPa，分離釜II溫度為35-40°C，壓力為4_6MPa，萃取時間為2_6h。
3.根據權利要求I所述從臺灣含笑中提取含笑內酯的方法，其特征在于所述石油醚脫月旨，加入2-5倍萃取物體積量的石油醚加熱回流脫脂1-3次，離心，分離固液，得脫脂物。
4.根據權利要求I所述從臺灣含笑中提取含笑內酯的方法，其特征在于所述低碳醇為 C1-C4醇，優選乙醇、甲醇或異丙醇。
5.根據權利要求I所述從臺灣含笑中提取含笑內酯的方法，其特征在于所述甲醇和水的混合溶液是指甲醇體積百分比為83%，水的體積百分比為17%的混合溶液。
全文摘要
本發明屬于天然藥物化學領域，公開了一種從臺灣含笑中提取分離含笑內酯的方法。方法是以臺灣含笑為原料，粉碎20-40目，加入萃取釜中，以無水甲醇為夾帶劑，采用超臨界CO2萃取，收集萃取液，回收甲醇，得萃取物，用石油醚回流脫除脂溶性雜質，再將脫脂物用低碳醇熱溶，加入活性炭回流脫色，脫色液回收溶劑至適量體積，經制備液相ODSRP-C18反相柱進行純化，以甲醇和水的混合溶液進行洗脫，濃縮對應組分，石油醚-丙酮(2∶1，V/V)重結晶，得含笑內酯產品。
文檔編號C07D307/93GK102850310SQ20121036283
公開日2013年1月2日 申請日期2012年9月26日 優先權日2012年9月26日
發明者蘇劉花 申請人:南京澤朗農業發展有限公司