專利名稱：一種提取純化吉利柘樹素a的方法
技術領域：
本發明屬于天然藥物領域，具體而言，本發明涉及一種提取純化吉利柘樹素A的方法。
背景技術：
吉利柘樹素A (Gericudranin A),是ー種黃酮醇類化合物,分子式C29H24O9,分子量516. 5,黃色粉末,mpl35°C。主要存在于桑科(Moraceae)積域 Cudrania tricuspidataBureau的莖皮中。現代藥理研究表明，吉利柘樹素A具有細胞毒活性。對人型腫瘤細胞的ED5tl( μ g/ml)為皮膚癌CRL1579為3. 65，皮膚癌LOX-IMVI為11. 99，白血病M0LT-4F為2. 65，結腸癌KMl2 為 13. 70，腎癌 U0-31 為 6. 99。經文獻檢索，尚無適用于高純度吉利柘樹素A的提取純化方法報道。
發明內容
本發明要解決的技術問題是提供一種適用于規模化生產、產品純度高的提取純化吉利柘樹素A的方法。為解決上述技術問題，本發明采用的技術方案如下
(1)以柘樹莖皮為原料，進行干燥、粉碎，采用超臨界ニ氧化碳技術萃取柘樹莖皮中的油脂類物質；
(2)殘渣加6-10倍(V/W)70-90%丙酮溶液進行超聲循環提取1_3次，每次l_2h，合并提取液；
(3)提取液濃縮后上聚酰胺樹脂柱，先用水和35%こ醇溶液洗脫，再用75%こ醇溶液洗脫，收集75%こ醇洗脫液；
(4)洗脫液濃縮，上硅膠短粗柱，柱徑高比為1:3-5，以こ酸こ酯-丙酮混合溶液為洗脫齊U，收集洗脫液，濃縮，放置結晶；
(5)分出結晶，丙酮-正己烷混合溶劑重結晶，濾出結晶，冷凍干燥即得吉利柘樹素A。所述步驟(I)中超臨界ニ氧化碳萃取溫度為35_50°C，壓カ為20_32MPa，萃取時間為 O.5-lh。所述步驟(4)中こ酸こ酯-丙酮混合溶液體積比為1:5-15。所述步驟(5)中丙酮-正己烷混合溶劑體積比為1-1. 5:1。綜上所述，本發明存在以下優點
(1)采用超臨界ニ氧化碳萃取技術脫除油脂類物質，快速、高效；
(2)采用超聲循環提取的方法，提取效率高；
(3)采用大孔樹脂和硅膠短粗柱層析后進行結晶，從而獲得含量98%以上的吉利柘樹素A，成本低，分離效果好；
(4)本發明所用試劑こ酸こ酷、丙酮等，可替代通常柱層析采用的氯仿、甲醇，降低毒性和污染。下面將結合具體實施方式
對本發明做進ー步闡述，但本發明要求保護的范圍并不局限于下列實施例。
具體實施例方式 實施例I:
取柘樹莖皮粗粉500g，采用超臨界ニ氧化碳技術萃取柘樹莖皮中的油脂類物質，萃取溫度為35°C，壓カ為20MPa，萃取時間為lh，殘渣加10倍(V/W) 90%丙酮溶液進行超聲循環提取I次，毎次lh，合并提取液，濃縮后上聚酰胺樹脂柱，先用水和35%こ醇溶液洗脫，再用75%こ醇溶液洗脫，收集75%こ醇洗脫液，濃縮，與100-200目的硅膠按重量比I: I拌勻、陰干，上硅膠短粗柱，柱徑高比為1: 5，以こ酸こ酷-丙酮混合溶液為洗脫劑，依次按1:5、 1:10,1:15體積比進行洗脫，收集含吉利柘樹素A的洗脫液，回收試劑，將所得吉利柘樹素A濃縮液置于結晶罐中靜置20小時使其結晶，過濾，分出結晶，采用丙酮-正己烷(I. 5:1)混合溶劑重結晶，濾出結晶，冷凍干燥即得吉利柘樹素Al. lg，純度為98. 4%。實施例2:
取柘樹莖皮粗粉500g，采用超臨界ニ氧化碳技術萃取柘樹莖皮中的油脂類物質，萃取溫度為40°C，壓カ為25MPa，萃取時間為O. 5h，殘渣加7倍(V/W)80%丙酮溶液進行超聲循環提取2次，毎次lh，合并提取液，濃縮后上聚酰胺樹脂柱，先用水和35%こ醇溶液洗脫，再用75%こ醇溶液洗脫，收集75%こ醇洗脫液，濃縮，與100-200目的硅膠按重量比I: I拌勻、陰干，上硅膠短粗柱，柱徑高比為1: 5，以こ酸こ酷-丙酮混合溶液為洗脫劑，依次按1: 5、1: 9、I 13體積比進行洗脫，收集含吉利柘樹素A的洗脫液，回收試劑，將所得吉利柘樹素A濃縮液置于結晶罐中靜置24小時使其結晶，過濾，分出結晶，采用丙酮-正己烷(I: I)混合溶劑重結晶，濾出結晶，冷凍干燥即得吉利柘樹素Al. 3g，純度為98. 0%。實施例3
取柘樹莖皮粗粉500g，采用超臨界ニ氧化碳技術萃取柘樹莖皮中的油脂類物質，萃取溫度為45°C，壓カ為28MPa，萃取時間為O. 5h，殘渣加10倍(V/W)90%丙酮溶液進行超聲循環提取I次，毎次2h，合并提取液，濃縮后上聚酰胺樹脂柱，先用水和35%こ醇溶液洗脫，再用75%こ醇溶液洗脫，收集75%こ醇洗脫液，濃縮，與100-200目的硅膠按重量比I: I拌勻、陰干，上硅膠短粗柱，柱徑高比為1:5，以こ酸こ酷-丙酮混合溶液為洗脫劑，依次按1:5、1:10,1:15體積比進行洗脫，收集含吉利柘樹素A的洗脫液，回收試劑，將所得吉利柘樹素A濃縮液置于結晶罐中靜置12小時使其結晶，過濾，分出結晶，采用丙酮-正己烷(I. 5:1)混合溶劑重結晶，濾出結晶，冷凍干燥即得吉利柘樹素Al. Ig,純度為98. 6%。實施例4:
取柘樹莖皮粗粉1kg，采用超臨界ニ氧化碳技術萃取柘樹莖皮中的油脂類物質，萃取溫度為50°C，壓カ為32MPa，萃取時間為O. 5h，殘渣加6倍(V/W) 70%丙酮溶液進行超聲循環提取3次，毎次lh，合并提取液，濃縮后上聚酰胺樹脂柱，先用水和35%こ醇溶液洗脫，再用75%こ醇溶液洗脫，收集75%こ醇洗脫液，濃縮，與100-200目的硅膠按重量比1:1拌勻、陰干，上硅膠短粗柱，柱徑高比為1:3，以こ酸こ酷-丙酮混合溶液為洗脫劑，依次按1:6、1: 11、1:14體積比進行洗脫，收集含吉利柘樹素A的洗脫液，回收試劑，將所得吉利柘樹素A濃縮液置于結晶罐中靜置18小時使其結晶，過濾，分出結晶，采用丙酮-正己烷(I: I)混合溶劑重結晶，濾出結晶，冷凍干燥即得吉利柘樹素A2. Og,純度為98. 6%。 實施例5:
取柘樹莖皮粗粉5kg，采用超臨界ニ氧化碳技術萃取柘樹莖皮中的油脂類物質，萃取溫度為38°C，壓カ為30MPa，萃取時間為O. 5h，殘渣加10倍(V/W) 80%丙酮溶液進行超聲循環提取3次，毎次2h，合并提取液，濃縮后上聚酰胺樹脂柱，先用水和35%こ醇溶液洗脫，再用75%こ醇溶液洗脫，收集75%こ醇洗脫液，濃縮，與100-200目的硅膠按重量比I: I拌勻、陰干，上硅膠短粗柱，柱徑高比為1:15，以こ酸こ酷-丙酮混合溶液為洗脫劑，依次按1:5、1: 11、1:15體積比進行洗脫，收集含吉利柘樹素A的洗脫液，回收試劑，將所得吉利柘樹素A濃縮液置于結晶罐中靜置12小時使其結晶，過濾，分出結晶，采用丙酮-正己烷(I: I)混合 溶劑重結晶，濾出結晶，冷凍干燥即得吉利柘樹素A8. 3g，純度為98. 2%。
權利要求
1.一種提取純化吉利柘樹素A的方法，其特征在于按如下エ藝步驟進行 (1)以柘樹莖皮為原料，進行干燥、粉碎，采用超臨界ニ氧化碳技術萃取柘樹莖皮中的油脂類物質； (2)殘渣加6-10倍(V/W)70-90%丙酮溶液進行超聲循環提取1_3次，每次l_2h，合并提取液； (3)提取液濃縮后上聚酰胺樹脂柱，先用水和35%こ醇溶液洗脫，再用75%こ醇溶液洗脫，收集75%こ醇洗脫液； (4)洗脫液濃縮，上硅膠短粗柱，柱徑高比為1:3-5，以こ酸こ酯-丙酮混合溶液為洗脫齊U，收集洗脫液，濃縮，放置結晶； (5)分出結晶，丙酮-正己烷混合溶劑重結晶，濾出結晶，冷凍干燥即得吉利柘樹素A。
2.如權利要求I所述的ー種提取純化吉利柘樹素A的方法，其特征在于，所述步驟(I)中超臨界ニ氧化碳萃取溫度為35-50°C，壓カ為20-32MPa，萃取時間為O. 5_lh。
3.如權利要求I所述的ー種提取純化吉利柘樹素A的方法，其特征在于，所述步驟(4)中こ酸こ酷-丙酮混合溶液體積比為1:5-15。
4.如權利要求I所述的ー種提取純化吉利柘樹素A的方法，其特征在于，所述步驟(5)中丙酮-正己烷混合溶劑體積比為1-1. 5: I。
全文摘要
本發明公開了一種提取純化吉利柘樹素A的方法，包括以下步驟(1)以柘樹莖皮為原料，進行干燥、粉碎，采用超臨界二氧化碳技術萃取柘樹莖皮中的油脂類物質；(2)殘渣加丙酮溶液進行超聲循環提取；(3)提取液濃縮后上聚酰胺樹脂柱，先用水和35%乙醇溶液洗脫，再用75%乙醇溶液洗脫，收集75%乙醇洗脫液；(4)洗脫液濃縮，上硅膠短粗柱，以乙酸乙酯-丙酮混合溶液為洗脫劑，收集洗脫液，濃縮，放置結晶；(5)分出結晶，丙酮-正己烷混合溶劑重結晶，濾出結晶，冷凍干燥即得吉利柘樹素A。本發明方法操作簡單，可實現規模化生產。
文檔編號C07D311/32GK102827129SQ20121034567
公開日2012年12月19日 申請日期2012年9月18日 優先權日2012年9月18日
發明者劉東鋒 申請人:南京澤朗醫藥科技有限公司