專利名稱：一種卡貝縮宮素的固相合成方法
技術領域：
本發明涉及卡貝縮宮素合成技術領域，特別是指一種卡貝縮宮素的固相合成方法。
背景技術：
卡貝縮宮素(Carbetocin)是一種人工合成的具有激動劑性質的長效催產素九肽環狀肽類似物，臨床和藥理特性與天然催產素類似，與子宮平滑肌的催產素受體結合，引起子宮的節律性收縮，在原有的收縮基礎上，增加其頻率和增加子宮張力，可以預防子宮張力不足，產后出血和促進子宮的復舊。無論靜脈注射還是肌肉注射，都可以在2分鐘內使子宮迅速收縮強度達到一定要求，而且單劑量經脈給藥后對子宮的活性作用可持續I個小時，足以預防產后出血。北京大學第一附屬醫院和北京協和醫院臨床試驗表明，該藥與傳統的催產素相比，當硬膜外或腰麻下剖腹產術后立即單劑量靜脈給予卡貝縮宮素lOOug，出血量 沒有明顯差別，血紅蛋白降低值小于傳統的催產素。卡貝縮宮素與目前臨床常用催產素來比具有使用便捷、起效迅速、效果持久，安全性好，同時也是選擇性剖宮產引導分娩產后出血預防和控制方面很有前途的一種藥物。卡貝縮宮素分子式C45H69Nn012S，分子量998. 17。結構為
N1H1
0z 丫麗
NHa、JL
IOMe卡貝縮宮素制備目前主要是采用固相合成其線性肽，經裂解后在溶液中環化形成卡貝縮宮素。申請號CN200910106889. 0公布了一種固相制備卡貝縮宮素的方法，該方案通過固相合成法依次連接具有Fmoc保護基團的氨基酸，得到卡貝縮宮素前體肽-氨基樹脂；三苯基膦鈀脫掉半胱氨酸側鏈烯丙基保護基，加入有機堿，氯化鋰，環化，裂解，純化、凍干得到精卡貝縮宮素，該方法中脫側鏈烯丙基保護基試劑價格昂貴，不利于大規模生產。申請號CN201110151928.6公布的卡貝縮宮素的制備方法，采用新型的巰基保護氨基酸Fmoc-Cys ((CH2) 3C00A11)，該方法中脫側鏈烯丙基保護基試劑價格也很昂貴，不利于大規模生產。申請號CN201110001400. 0公布的合成卡貝縮宮素的制備方法，該方法用固相成線性卡貝縮宮素前體肽，液相環化，該方法環化需要在極稀溶劑(10_，10_5mOl/L)中進行，產生大量廢液，同時易產生多聚物，造成環化效率不高，后處理復雜等缺點。
發明內容
本發明針對現有技術存在的問題，提 供一種卡貝縮宮素的固相合成方法。該方法采用一種新型巰基保護基，利用固相假稀釋原理固相環化合成卡貝縮宮素，該合成工藝操作簡單、成本低、環境友好，同時固相環化技術，極大地提高了純度和收率。本發明的合成路線如下
權利要求
1.一種卡貝縮宮素的固相合成方法，包括 (I )由 Rink Amide AM Resin 依次偶聯含 Fmoc 保護基氨基酸,得 Fmoc-Cys (CH2CH2CH2COOCH2CH2Cn) -Pro-Leu-Gly-Rink Amide AM Resin,再依次偶聯剩余 Fmoc-氨基酸得Tyr (Me) -Ile-Gln (Trt) -Asn (Trt) -Cys (CH2CH2CH2COOCH2CH2CN) -Pro-Leu-Gly-Rink Amide AMResin,脫保護基得 Tyr (Me) -Ile-Gln-Asn-Cys (CH2CH2CH2C00H) -Pro-Leu-Gly-Rink AmideAM Resin;環化,得卡貝縮宮素-RinkAmideAM Resin ； (II )裂解、純化、冷凍干燥得卡貝縮宮素。
2.根據權利要求I所述的一種卡貝縮宮素的固相合成方法，其特征在于，所述步驟(I )中的 Rink Amide AM Resin 替代度為 O. I O. 5mmol/g。
3.根據權利要求I或2所述的一種卡貝縮宮素的固相合成方法，其特征在于，所述步驟(I )中的 Rink Amide AM Resin 依次偶聯 Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Cys-OH、X(CH2)3COOH, HOCH2CH2CN, Fmoc-Asn (Trt)-OH, Fmoc-IIe-OH,Fmoc-Gln (Trt) -OH 和 Fmoc-Tyr (Me) _0H，其中 X 為或 Cl。
4.根據權利要求3所述的一種卡貝縮宮素的固相合成方法，其特征在于，所述步驟(I )中的偶聯試劑為I-羥基苯并三唑HOBt/N，N’-二異丙基碳二亞胺DIC或I-羥基苯并三唑HOBt/N，N’ - 二異丙基碳二亞胺DIC/4- 二甲氨基吡啶DMAP，脫Fmoc保護劑為20% 25%的哌啶/N，N- 二甲基甲酰胺DMF或哌啶/ 二氯甲烷DCM ;脫-OCH2CH2CN保護基為四丁基氟化銨TBAF/四氫呋喃THF/N，N- 二甲基甲酰胺DMF。
5.根據權利要求I或2所述的一種卡貝縮宮素的固相合成方法，其特征在于，所述步驟(I )中的依次偶聯Fmoc-氨基酸、XCH2CH2CH2C00H并封閉其羧基，得到含線性卡貝縮宮素-Amide AM Resin,環化,得卡貝縮宮素-Amide AM Resin,其中X為Br或Cl。
6.根據權利要求3所述的一種卡貝縮宮素的固相合成方法，其特征在于，所述步驟(I )或(II )的反應介質為無水N，N-二甲基甲酰胺DMF或二氯甲烷DCM，氨基酸活化溫度為(T5°C，偶聯溫度為1(T30°C，裂解初始溫度為(T5°C，保持O. 5h，逐漸升到2(T30°C。
7.根據權利要求6所述的一種卡貝縮宮素的固相合成方法，其特征在于，洗滌試劑依次為無水 DMF、MeOH, DCM、DMF。
全文摘要
本發明提出了一種卡貝縮宮素的固相合成方法，包括由Rink Amide AM Resin依次偶聯含Fmoc保護基氨基酸，得Fmoc-Cys(CH2CH2CH2COOCH2CH2CN)-Pro-Leu-Gly-Rink Amide AM Resin，再依次偶聯剩余Fmoc-氨基酸，脫保護基，環化，得卡貝縮宮素-Amide AM Resin；裂解、純化、冷凍干燥即得卡貝縮宮素。本發明采用一種新型巰基保護基，利用固相假稀釋原理固相環化合成卡貝縮宮素，該合成工藝操作簡單、成本低、環境友好，同時固相環化技術，極大地提高了純度和收率。
文檔編號C07K1/04GK102796178SQ201210255959
公開日2012年11月28日 申請日期2012年7月23日 優先權日2012年7月23日
發明者姚程成, 楊毅躍, 康國偉, 魯堯, 蒙相峰 申請人:無錫市凱利藥業有限公司