高純度表兒茶素沒食子酸酯制備方法
【專利摘要】本發明提供一種高純度的表兒茶素沒食子酸酯(ECG)制備方法，屬于有機化學【技術領域】范疇。其中表兒茶素沒食子酸酯(ECG)含量為98.0％～99.9％，制備方法主要由提取、萃取、層析分離、結晶工序組成。本發明的制備工藝重現性好，所得到的表兒茶素沒食子酸酯的含量高，收率高，綠色環保無有機溶劑殘留，成本低，質量穩定可控，生產周期短，符合清潔生產要求，適合工業化生產。
【專利說明】高純度表兒茶素沒食子酸酯制備方法
【技術領域】
[0001]本發明公開了一種高純度表兒茶素沒食子酸酯(ECG)的制備方法。本發明屬于有機化學【技術領域】范疇。
【背景技術】
[0002]茶多酚是從綠茶中提取的一種多酚類成分，它是由六種以上的單體組成，其中以表兒茶素沒食子酸酯(ECG)和表沒食子兒茶素沒食子酸酯(EGCG)兩種主要成分含量最高、藥理活性最強。目前，EGCG已經被廣泛利用，而大量ECG直接被丟棄浪費。
[0003]由于抗生素耐藥性的產生，抗腫瘤藥物的巨大副作用以及老年衰老性疾病的增長，天然抗菌、抗病毒、抗腫瘤、抗衰老的藥物逐漸引起人們廣泛關注。而表兒茶素沒食子酸酯(ECG)正是其中藥效較強的天然物質之一。
[0004]綜合國內外研究成果，表兒茶素沒食子酸酯(ECG)在抗氧化、清除體內自由基、抑制病毒、抗腫瘤細胞、抗菌等方面作用顯著；ECG可明顯改善心肌細胞功能，保護心臟免受缺血再灌注而引起的心肌損傷；ECG也可明顯改善創傷傷口愈合和瘢痕形成過程；ECG對神經細胞的損傷也能起到保護作用。在此背景條件下，利用先進的分離純化技術，生產出高純度的表兒茶素沒食子酸酯，將會具有更加明確的社會意義和經濟價值。
[0005]目前文獻報道表兒茶素沒食子酸酯(ECG)制備技術雖然很多，但絕大多數的工藝技術都屬于實驗室制備級別，制備量通常都在毫克至數克之間，最多也只有幾十克的制備量，這些技術很難進行大批量工業化生產，也遠遠滿足不了日益增長的市場需求。
[0006]在公開的專利號為CN102432577A的《表兒茶素沒食子酸酯(ECG)單體的分離純化方法》的發明專利中，公開了一種表兒茶素沒食子酸酯的分離純化方法，專利中以價格昂貴的“云南大葉種綠茶”為原料制備表兒茶素沒食子酸酯，用大量乙酸乙酯提取，生產成本頗高，且針對性不強，不適合工業化生產；以“95%乙醇低溫冷藏結晶”冷凍干燥得到98%淡黃色ECG，由于采用小極性溶劑結晶導致產品呈淡黃色，色澤不好，有機溶劑易殘留；而該工藝經多次濃縮、干燥，過兩次色譜柱，步奏冗雜，連續生產性不強，生產周期長。更重要的是ECG極易氧化破壞而失去藥理活性，該過程經過多次長時間加熱濃縮、干燥，導致ECG大量破壞，損失大，收率低。而過兩次色譜柱更是費時耗材，增大損失，產品收率低。可見，該專利發明方法生產成本高、產品質量不穩定、產品具有機溶劑殘留、產品收率低、生產周期長等，并不適合規模化工業化生產。
[0007]本發明以廉價易得的茶多酚為原料，以水溶解茶多酚提取ECG，采用單一樹脂一次過柱，在純化水中結晶，減壓干燥制備白色粉狀的高純度表」L茶素沒食子酸酯。
[0008]本發明生產成本低、周期短、過程簡單，溶劑只涉及乙酸乙酯和水、樹脂可循環利用，完全符合清潔生產。同時，制備的表兒茶素沒食子酸酯純度高、收率高、產品質量穩定、無有機溶劑殘留。經過多批生產驗證，每批產量可達數十至數百公斤，具有良好的實用性，尤其適合工業化生產。
[0009]在已經公開的文獻與專利中，還沒有與本發明相關或類似的報道。
【發明內容】
[0010]本發明的目的在于提供一種高純度的表兒茶素沒食子酸酯。本發明的另一目的是提供高純度表兒茶素沒食子酸酯制備方法，通過提取、分離、結晶等手段制備出純度高、收率高、產品質量穩定、無有機溶劑殘留的產品，適合工業化生產。
[0011]一種制備高純度表兒茶素沒食子酸酯(ECG)的方法包括如下步驟:
[0012](I)取一定含量的茶多酚粗品，加適量純化水作溶劑溶解，靜置一段時間，過濾，殘渣棄去；
[0013](2)加一定體積有機溶劑進行萃取，萃取數次，合并有機溶劑層，減壓濃縮至稠膏狀，加入適量純化水溶解，得到茶多酚樣品溶液；
[0014](3)將上述茶多酚樣品溶液過一定型號的大孔吸附樹脂柱，進行洗脫，得到表兒茶素沒食子酸酯溶液；
[0015](4)將上述表兒茶素沒食子酸酯溶液減壓濃縮至稠膏狀后，加入適量結晶溶劑溶解，放冷，加入少量高純度表兒茶素沒食子酸酯晶種，靜置，在一定溫度下結晶，過濾，純化水洗滌，干燥，即得高純度表兒茶素沒食子酸酯。
[0016]上述步驟(1)中，純化水用量為2~10倍量(M: V)，優選4倍量；靜置時間為2~48h，優選24h。
[0017]上述步驟(2)中，所用的萃取溶劑可以為乙酸乙酯、正丁醇和異丙醇，優選乙酸乙酯；萃取次數為I~3次，優選2次；萃取溶劑用量為原料茶多酚粗品的2~10倍量(M: V)，優選6倍量；濃縮物可加原料茶多酚粗品重量的2~6倍量純化水溶解，優選3倍量。
[0018]上述步驟(3)中，層析柱大孔吸附樹脂的型號可以為HPD-100、300、400、500、600，或D101、D130，優選HPD-600 ;洗脫劑可以為純化水、5~30%乙醇、5~10%丙酮，優選純化水；純化水的洗脫用量為3~15倍柱體積(V: V)，優選7倍柱體積；綜合對上樣量、吸附率、解吸速度、洗脫率、最終成品收率等各方面因素的考察，層析柱按常規操作方法裝填，裝柱量不少于柱高的2/3，最好選用直徑與柱高比在1: 4~1: 6的柱子；洗脫速度優選為1000 ~2000ml/min。
[0019]上述步驟(4)中，表兒茶素沒食子酸酯溶液可在55~75 °C下減壓濃縮，優選65 °C;加入的溶劑可以為純化水、甲醇、乙醇、丙酮，優選為純化水；溶劑的用量為稠膏重量的2~6倍，優選為5倍量；結晶溫度為O~30°C，優選2~8°C，進一步優選為4°C ;結晶時間為6~48小時，優選為24小時；結晶干燥溫度為40~80°C，優選60°C。
[0020]本發明通過科學可行的方法從茶多酚中經提取、分離純化、結晶等一系列步驟，提供了一種含量高、成分明確、質量可控、藥效確切、副作用小的表兒茶素沒食子酸酯制備方法，該原料在抗氧化、抗病毒、抑菌、心腦血管疾病及抗腫瘤等方面效果明顯。本發明的制備工藝已經通過多批生產驗證，證明其重復性、穩定性良好，原料的得率高，適合工業化生產。
【具體實施方式】
[0021]以下實施例中，所用的水為純化水，乙醇為藥用級，茶多酚粗品為市售綠茶提取物，其中表兒茶素沒食子酸酯含量為10~60%的粗品均可適用于本發明提供的工藝，樣品中表兒茶素沒食子酸酯含量采用高效液相色譜法(HPLC)測定。
[0022]下列實施例旨在進一步舉例描述本發明，不應理解為對本發明范圍的限制。
[0023]實施例1
[0024]取茶多酚粗品(ECG含量為40.4% ) IOkg,加40L純化水于室溫攪拌溶解，室溫下靜置24h，過濾，殘渣棄去；
[0025]濾液加60L乙酸乙酯進行萃取2次，合并乙酸乙酯層，于60°C減壓濃縮至稠膏狀，加入30L純化水溶解，得到茶多酚樣品溶液；
[0026]將上述茶多酚樣品溶液過裝有HPD-600大孔吸附樹脂層析柱，加純化水100L進行充分解吸附洗脫，收集洗脫液，得到表兒茶素沒食子酸酯溶液；
[0027]將上述表兒茶素沒食子酸酯溶液于55°C減壓濃縮至稠膏狀后，加入純化水18L溶解，放冷，加入約100毫克含量為99.6 %的高純度表兒茶素沒食子酸酯做為晶種，靜置，在4°C下結晶24小時，過濾，濾餅加600mL純化水洗滌，于60°C下減壓干燥，得表兒茶素沒食子酸酯原料3.8kg。
[0028]經高效液相色譜法(HPLC)測定，本批原料中表兒茶素沒食子酸酯含量為99.9%。
[0029]實施例2 [0030]取茶多酚粗品(ECG含量為48.4% ) IOkg,加100L純化水于室溫攪拌溶解，室溫下靜置24h，過濾，殘渣棄去；
[0031]濾液加100L乙酸乙酯進行液-液萃取2次，合并乙酸乙酯層，于60°C減壓濃縮至稠膏狀，加入30L純化水溶解，得到茶多酚樣品溶液；
[0032]將上述茶多酚樣品溶液過裝有DlOl大孔吸附樹脂層析柱，加10%乙醇100L進行充分解吸附洗脫，收集洗脫液，得到表兒茶素沒食子酸酯溶液；
[0033]將上述表兒茶素沒食子酸酯溶液于55°C減壓濃縮至稠膏狀后，加入丙酮8L溶解，放冷，加入約100毫克含量為99.6%的高純度表兒茶素沒食子酸酯做為晶種，靜置，在25°C下結晶24小時，過濾，濾餅加600mL純化水洗滌，于55°C下減壓干燥，得表兒茶素沒食子酸酯原料3.1kg0
[0034]經高效液相色譜法(HPLC)測定，本批原料中表兒茶素沒食子酸酯含量為99.2%。
[0035]實施例3
[0036]取茶多酚粗品(ECG含量為39.4% ) IOkg,加20L純化水于室溫攪拌溶解，室溫下靜置2h，過濾，殘渣棄去；
[0037]濾液加20L乙酸乙酯進行液-液萃取2次，合并乙酸乙酯層，于60°C減壓濃縮至稠膏狀，加入30L純化水溶解，得到茶多酚樣品溶液；
[0038]將上述茶多酚樣品溶液過裝有HPD-600大孔吸附樹脂層析柱，加純化水100L進行充分解吸附洗脫，收集洗脫液，得到表兒茶素沒食子酸酯溶液；
[0039]將上述表兒茶素沒食子酸酯溶液于55°C減壓濃縮至稠膏狀后，加入乙醇IOL溶解，放冷，加入約100毫克含量為99.6 %的高純度表兒茶素沒食子酸酯做為晶種，靜置，在20°C下結晶24小時，過濾，濾餅加600mL純化水洗滌，于80°C下減壓干燥，得表兒茶素沒食子酸酯原料2.1kg0
[0040]經高效液相色譜法(HPLC)測定，本批原料中表兒茶素沒食子酸酯含量為98.6%。
[0041]實施例4[0042]取茶多酚粗品(ECG含量為38.6% ) IOkg,加40L純化水于室溫攪拌溶解，室溫下靜置24h，過濾，殘渣棄去；
[0043]濾液加60L乙酸乙酯進行液-液萃取2次，合并乙酸乙酯層，于60°C減壓濃縮至稠膏狀，加入30L純化水溶解，得到茶多酚樣品溶液；
[0044]將上述茶多酚樣品溶液過裝有HPD-100大孔吸附樹脂層析柱，加5%丙酮100L進行充分解吸附洗脫，收集洗脫液，得到表兒茶素沒食子酸酯溶液；
[0045]將上述表兒茶素沒食子酸酯溶液于55°C減壓濃縮至稠膏狀后，加入甲醇15L溶解，放冷，加入約100毫克含量為99.6 %的高純度表兒茶素沒食子酸酯做為晶種，靜置，在(TC下結晶24小時，過濾，濾餅加600mL純化水洗滌，于40°C下減壓干燥，得表兒茶素沒食子酸酯原料2.8kg。
[0046]經高效液相色譜法(HPLC)測定，本批原料中表兒茶素沒食子酸酯含量為98.9%。
[0047]實施例5
[0048]取茶多酚粗品(ECG含量為40.1 % ) IOkg,加40L純化水于室溫攪拌溶解，室溫下靜置48h，過濾，殘渣棄去；
[0049]濾液加60L乙酸乙酯進行液-液萃取2次，合并乙酸乙酯層，于60°C減壓濃縮至稠膏狀，加入30L純化水溶解，得到茶多酚樣品溶液；
[0050]將上述茶多酚樣品溶液過裝有HPD-400大孔吸附樹脂層析柱，加純化水100L進行充分解吸附洗脫，收集洗脫液，得到表兒茶素沒食子酸酯溶液。
[0051]將上述表兒茶素沒食子酸酯溶液于55°C減壓濃縮至稠膏狀后，加入純化水22L溶解，放冷，加入約100毫克含`量為99.6 %的高純度表兒茶素沒食子酸酯做為晶種，靜置，在20°C下結晶24小時，過濾，濾餅加600mL純化水洗滌，于55°C下減壓干燥，得表兒茶素沒食子酸酯原料3.3kg。
[0052]經高效液相色譜法(HPLC)測定，本批原料中表兒茶素沒食子酸酯含量為99.0%。
【權利要求】
1.一種高純度的表兒茶素沒食子酸酯制備方法，由以下步驟組成: (1)取一定含量的茶多酚粗品，加適量純化水作溶劑溶解，靜置一段時間，過濾，殘渣棄去; (2)加一定體積有機溶劑進行萃取，萃取數次，合并有機溶劑層，減壓濃縮至稠膏狀，加入適量純化水溶解，得到茶多酚樣品溶液； (3)將上述茶多酚樣品溶液過一定型號的大孔吸附樹脂柱，進行洗脫，得到表兒茶素沒食子酸酯溶液； (4)將上述表兒茶素沒食子酸酯溶液減壓濃縮至稠膏狀后，加入適量結晶溶劑溶解，放冷，加入少量高純度表兒茶素沒食子酸酯晶種，靜置，在一定溫度下結晶，過濾，純化水洗滌，干燥，即得高純度表兒茶素沒食子酸酯。
2.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于步驟(1)中純化水用量為2~10倍量(M: V)，優選4倍量；靜置時間為2~48h，優選24h。
3.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于步驟(2)中萃取所用的有機溶劑可以為乙酸乙酯、正丁醇或異丙醇，優選乙酸乙酯；萃取次數為I~3次，優選2次；萃取溶劑用量為原料茶多酚粗品的2~10倍量(M: V)，優選6倍量；濃縮物可加原料茶多酚粗品重量的2~6倍量純化水溶解，優選3倍量。
4.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于步驟(3)中所用的層析柱填料大孔吸附樹脂型號可以為HPD-100、300、400、500、600，或D101、D130，優選HPD-600 ;層析柱所用的洗脫溶劑可以為純化水、5~30%乙醇、5~10%丙酮，優選純化水。
5.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于步驟(4)中加入的結晶溶劑可以為純化水、甲醇、乙醇、丙酮，優選為純化水；溶劑的用量為稠膏重量的2~6倍，優選為5倍量；結晶溫度為O~30°C，優選2~8°C，進一步優選為4°C ;結晶時間為6~48小時，優選為24小時；結晶干燥溫度為40~80°C，優選60°C。
【文檔編號】C07D311/62GK103524473SQ201210228640
【公開日】2014年1月22日 申請日期:2012年7月4日 優先權日:2012年7月4日
【發明者】黃全書, 楊永安, 魏元剛, 鐘慧, 易銘, 金顯友, 袁繼文, 季浩 申請人:江蘇天晟藥業有限公司