專利名稱：一種人參皂苷的制備方法
技術領域：
本發明屬于天然藥物制備領域，具體涉及人參皂苷Rg1的制備方法。
背景技術：
人參皂苷Rg1具有多方面的藥理活性(1)具有對中樞神經有興奮作用，能提高腦力和體力活動，表現出抗疲勞作用；(2)具有抗血栓作用，人參皂苷Rg1可明顯降低實驗性血栓形成，能夠抑制凝血酶誘導血小板聚集；(3)具有對腦缺血的保護作用，人參皂苷Rg1對大鼠腦缺血再灌注損傷引起的細胞凋亡具有明顯的保護作用；(4)具有促進缺血心肌血管生成、保護缺血心肌、縮小梗死面積、改善心功能的作用；(5)具有抗突變和抗腫瘤等作用。隨著我國經濟、文化事業的發展，壽命延長，老年人口占總人口的比例將加大，隨 著老年人口的增加，老年性癡呆患者急劇地增加。老年性癡呆是危害老年人身心健康的常見病，多發病。在國內，尋找具有抗老年癡呆的活性成分已取得顯著的成效。人參皂苷Rg1是最具有代表性的有效成分之一。它具有預防治療老年癡呆、益智、抗衰老、對中樞神經系統有很好的改善作用等多種功效。七生力片是以人參皂苷Rg1為單一成分開發的藥物，市場需求量很大，具有活血化瘀，益氣通絡作用。主要用于氣虛血瘀所致頭昏乏力，健忘等癥。野三七(Panaxvietnamensis Ha et Grushv.)為五加科(Araliaceae)人參屬(Panax)植物，其根入藥。野三七與人參屬其他植物化學成分也較為類似。野三七塊根的化學成分已有報道，主要含有四環三職人參阜苷類成分，并含有三七(Panax notoginseng(Burk.) F. H. Chen)特征成分人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、三七皂苷R i、人參皂苷Rd及人參皂苷Re。野三七具有與人參、三七等同屬植物相似的生物活性，如低劑量興奮中樞神經系統，高劑量抑制中樞神經系統并顯示精神病作用；增強體力并顯示滋補強壯、抗疲勞、適應原樣作用(抗壓力、肝毒素等)；增加雄性和雌性性器官重量；抗動脈硬化作用、對低血壓動物有升高血壓作用；降血糖等作用。野三七中含有的人參皂苷Rg1，含量與三七相當，為人參屬植物含人參皂苷Rg1含量較高的植物。近幾年來，人參皂苷Rg1的需求量很大，并且三七資源短缺，價格急劇上升，從三七中制備人參皂苷Rg1的生產成本也就隨之上升，通過資源調查，發現了野三七含有人參皂苷Rg1與三七含量相當的植物資源，這樣，可以用野三七并代替三七來制備高純度的人參皂苷Rglt5現有技術均采用三七來制備人參皂苷Rg1，本法首次采用野三七代替三七來制備高純度的人參皂苷Rg1，制備方法簡單，適合工業化生產。
發明內容
針對現有技術存在的上述不足，本發明通過科學實驗，旨在發明一種發明了一種適合工業化生產、提取率和純度較高的人參皂苷Rg1的制備方法。為了實現本發明的上述目的，本發明提供了如下的技術方案
人參皂苷Rg1的制備方法，包括提取、大孔吸附樹脂分離純化、硅膠柱色譜分離純化、RP-18娃膠柱色譜分離純化步驟,所述的提取是將野三七Panax vietnamensis Ha etGrushv.藥材粉碎，用8倍量的70%乙醇加熱回流提取3次，每次I. 5小時，合并提取液，回收乙醇，濃縮至無醇味，加水使總量為藥材量4倍，攪拌，靜置過夜；所述的大孔吸附樹脂分離純化是將提取步驟的上清液過預處理的AB - 8大孔吸附樹脂，依次用水洗脫，水洗至無molish反應，再用80%乙醇洗脫，回收乙醇洗脫液，濃縮至干，得粗總皂苷；所述的硅膠柱色譜分離純化步驟是將上一步驟得到的粗總皂苷用適量甲醇溶解，加入I. 5倍量硅膠拌樣，室溫揮干，以氯仿甲醇水的混合溶劑梯度洗脫，分段收集洗脫液，用薄層色譜TLC跟蹤檢測，合并含人參皂苷Rg1的流份，回收溶劑至干，得到主要含人參皂苷Rg1部分，經高效液相色譜法HPLC檢測人參皂苷Rg1含量；所述的RP-18硅膠柱色譜分離純化步驟是取硅膠柱色譜分離純化步驟所得的硅膠純化物用RP-18柱層析進行純化，50%的甲醇進行洗脫，以人參皂苷Rg1為對照，用HPLC跟蹤檢測，減壓濃縮至干，得高純度的人參皂苷Rgl。上述方法中，大孔吸附樹脂分離純化步驟中所用的大孔吸附樹脂型號為AB-8。
上述方法中，硅膠柱色譜分離純化步驟中所用的硅膠為200-300目的硅膠，柱層析的硅膠用量為樣品量的5-20倍。上述方法中，硅膠柱色譜分離純化步驟中所用的氯仿甲醇水為8_9:1~2:0. I-O. 2 ο上述方法中，RP-18硅膠柱色譜分離純化步驟采用50%的甲醇。本方法的方法還可具體描述如下(I)提取野三七(Panax vietnamensis Ha et Grushv.)藥材粉碎，用8倍量的70%乙醇加熱回流提取3次，每次I. 5小時，合并提取液，回收乙醇，濃縮至無醇味。加水使總量為藥材量4倍，攪拌，靜置過夜。(2)大孔吸附樹脂分離純化取步驟(I)上清液過預處理的AB-8大孔吸附樹脂，依次用水洗脫，水洗至無molish反應，再用80%乙醇洗脫，回收乙醇洗脫液，濃縮至干，得粗總皂苷。(3)硅膠柱色譜分離純化取步驟(2)粗總皂苷用適量甲醇溶解，加入I. 5倍量硅膠拌樣，室溫揮干。以氯仿甲醇水的混合溶劑梯度洗脫，分段收集洗脫液，以人參皂苷Rg1為對照，用薄層色譜(TLC)跟蹤檢測，合并含人參皂苷Rg1的流份，回收溶劑至干，得到主要含人參皂苷Rg1部分，經高效液相色譜法(HPLC)檢測人參皂苷Rg1含量約為50%。(4)RP_18硅膠柱色譜分離純化取步驟(3)的硅膠純化物用RP-18柱層析進行純化，50%的甲醇進行洗脫，以人參皂苷Rg1為對照，用HPLC跟蹤檢測，減壓濃縮至干，得到高純度的人參皂苷Rg1，含量大于95%。
圖I為本發明制備的人參皂苷Rg1的結構式；圖2為人參皂苷Rg1對照品的HPLC圖譜；
圖3為本發明制備的自制人參皂苷Rg1的HPLC圖譜；圖4為本發明制備的人參皂苷Rg1的1H NMR圖譜；圖5為本發明制備的人參皂苷Rg1的13C NMR圖譜；圖6為本發明制備的人參皂苷Rg1的ESI-MS (+)圖譜。
具體實施例方式下面結合附圖，用本發明的實施例來對本發明作進一步詳細說明，但不構成對本發明的任何限制。
實施例I :人參皂苷Rg1的制備取野三七藥材I kg，加入8 kg 70%的乙醇，回流提取3次，每次I. 5小時，過濾，合并濾液，回收乙醇并濃縮至無醇味，加水3. 5 kg，攪拌，靜置過夜。取上清液過預處理的AB-8大孔吸附樹脂，依次水洗至無molish反應，再用3. O kg 80%乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，回收乙醇并濃縮至干，得野三七總提物O. 28 kg。野三七總提物用甲醇O. 5 L溶解，加入O. 42kg硅膠拌樣，室溫揮干，進行硅膠柱層析，以氯仿甲醇水(8-9:1-2:0. 1-0. 2)進行梯度洗脫，收集洗脫液，以人參皂苷Rg1為對照，用薄層色譜(TLC)跟蹤檢測，合并含人參皂苷Rg1的流份，回收溶劑至干，得到主要含人參皂苷Rg1部分(45 g)，經高效液相色譜法(HPLC)檢測人參皂苷Rg1含量約為50%。繼續進行RP - 18反相硅膠(O. 9 kg)進行柱層析，50%甲醇洗脫，以人參皂苷Rg1為對照，用HPLC跟蹤檢測，減壓濃縮至干，得到高純度的人參皂苷Rg1(22 g)，含量大于 95% (見表 I、圖 1、3、4、5、6)。表I 本發明制備的人參阜苷Rg1的化學位移值
面1 子序號I化學位移值I碳原子序號I化學位移值_
C-I_400_0^22_3^6_
C-227.8C-2324. 3
C-378.2C-24125.9
C-440. 5C-25132. 3
C-561.8C-2626
C-677.6C-2718. I
C-744. 3C-2831.6
C-841.9C-2916.2
C-950.6C-3017. 3
C-IO40.46-glc I 105.6
C-Il31. 5275.5
C-1271.2380.9
C-1349. 5471.9
C-1452. 5579.9
C-1531.1662.9
C-1627.420-glc I 98. 3
C-1753.2275. 3
C-1817. 7379
C-1917.9471. 7
C-2084.9577.9
C-21丨23丨6丨62· 5
實施例2
人參皂苷Rg1的制備取野三七藥材2 kg，加入16 kg 70%的乙醇，回流提取3次，每次I. 5小時，過濾，合并濾液，回收乙醇并濃縮至無醇味,加水7 kg，攪拌，靜置過夜。取上清液過預處理的AB-8大孔吸附樹脂，依次水洗至無molish反應，再用6. O kg 80%乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，回收乙醇并濃縮至干，得野三七總提物O. 58 kg。野三七總提物用甲醇I. O L溶解，加入O. 87kg硅膠拌樣，室溫揮干，進行硅膠柱層析，以氯仿甲醇水(8-9:1-2:0. 1-0. 2)進行梯度洗脫，收集洗脫液，以人參皂苷Rg1為對照，用薄層色譜(TLC)跟蹤檢測，合并含人參皂苷Rg1的流份，回收溶劑至干，得到主要含人參皂苷Rg1部分(91 g)，經高效液相色譜法(HPLC)檢測人參皂苷Rg1含量約為50%。繼續進行RP - 18反相硅膠(I. 8 kg)進行柱層析，50%甲醇洗脫，以人參皂苷Rg1為對照，用HPLC跟蹤檢測，減壓濃縮至干，得到高純度的人參皂苷Rg1(43 g)，含量大于95%。實施例3 人參皂苷Rg1的制備取野三七藥材3 kg，加入24 kg 70%的乙醇，回流提取3次，每次I. 5小時，過濾，合并濾液，回收乙醇并濃縮至無醇味，加水10. 5 kg，攪拌，靜置過夜。取上清液過預處理的AB-8大孔吸附樹脂，依次水洗至無molish反應，再用9. O kg 80%乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，回收乙醇并濃縮至干，得野三七總提物O. 87 kg。野三七總提物用甲醇I. 5 L溶解，力口入1.31 kg硅膠拌樣，室溫揮干，進行硅膠柱層析，以氯仿甲醇水(8-9:1-2:0. 1-0.2)進行梯度洗脫，收集洗脫液，以人參皂苷Rg1為對照，用薄層色譜(TLC)跟蹤檢測，合并含人參皂苷Rg1的流份，回收溶劑至干，得到主要含人參皂苷Rg1部分(138 g)，經高效液相色譜法(HPLC)檢測人參皂苷Rg1含量約為50%。繼續進行RP - 18反相硅膠(2. 7 kg)進行柱層析，50%甲醇洗脫，以人參皂苷Rg1為對照，用HPLC跟蹤檢測，減壓濃縮至干，得到高純度的人參皂苷Rg1 (67 g)，含量大于95%。
權利要求
1.人參皂苷Rg1的制備方法，包括提取、大孔吸附樹脂分離純化、硅膠柱色譜分離純化、RP-18娃膠柱色譜分離純化步驟,所述的提取是將野三七Panax vietnamensis Ha etGrushv.藥材粉碎，用8倍量的70%乙醇加熱回流提取3次，每次I. 5小時，合并提取液，回收乙醇，濃縮至無醇味，加水使總量為藥材量4倍，攪拌，靜置過夜；所述的大孔吸附樹脂分離純化是將提取步驟的上清液過預處理的AB - 8大孔吸附樹脂，依次用水洗脫，水洗至無molish反應，再用80%乙醇洗脫，回收乙醇洗脫液，濃縮至干，得粗總皂苷；所述的硅膠柱色譜分離純化步驟是將上一步驟得到的粗總皂苷用適量甲醇溶解，加入I. 5倍量硅膠拌樣，室溫揮干，以氯仿甲醇水的混合溶劑梯度洗脫，分段收集洗脫液，用薄層色譜TLC跟蹤檢測，合并含人參皂苷Rg1的流份，回收溶劑至干，得到主要含人參皂苷Rg1部分，經高效液相色譜法HPLC檢測人參皂苷Rg1含量；所述的RP-18硅膠柱色譜分離純化步驟是取硅膠柱色譜分離純化步驟所得的硅膠純化物用RP-18柱層析進行純化，50%的甲醇進行洗脫，以人參皂苷Rg1為對照，用HPLC跟蹤檢測，合并，減壓濃縮至干，得高純度的人參皂苷Rgl。
2.根據權利要求I所述的方法，其特征在于大孔吸附樹脂分離純化步驟中所用的大孔吸附樹脂型號為AB-8。
3.根據權利要求I所述的方法，其特征在于硅膠柱色譜分離純化步驟中所用的硅膠為200-300目的硅膠，柱層析的硅膠用量為樣品量的5-20倍。
4.根據權利要求I所述的方法，其特征在于硅膠柱色譜分離純化步驟中所用的氯仿甲醇水為 8-9:1-2:0. 1-0. 2。
全文摘要
從野三七(Panax vietnamensis Ha et Grushv.)中制備人參皂苷Rg1的方法，包括提取、大孔吸附樹脂分離純化、硅膠柱色譜分離純化、RP-18硅膠柱色譜分離純化步驟，先制得總皂苷提取物，再制得主要含人參皂苷Rg1部分，然后再進行RP-18反相硅膠柱層析進行純化，55%甲醇洗脫，以人參皂苷Rg1為對照用HPLC跟蹤檢測，減壓濃縮至干，得到含量大于95%的高純度的人參皂苷Rg1。該方法制備步驟簡單，易于工業化生產，人參皂苷Rg1的收率和純度較高。
文檔編號C07J17/00GK102775462SQ20121022302
公開日2012年11月14日 申請日期2012年7月2日 優先權日2012年7月2日
發明者張廣輝, 李曉波, 楊生超, 沈勇, 陳軍文 申請人:云南農業大學