專利名稱：一種阿拉瑞林的固液相合成法的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種阿拉瑞林的合成方法，特別涉及一種阿拉瑞林的固液相合成法。
背景技術：
阿拉瑞林，中文名稱為醋酸阿拉瑞林，又名丙氨瑞林，英文名稱AlarelinAcetate,多妝序列為 pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Ala-Leu-Arg-Pro_NHC2H5，分子式C56H78N16012,分子量為1167. 30，結構式如下:
權利要求
1.一種阿拉瑞林的固液相合成法，其特征在于，包括如下步驟O以脯氨酸-2氯-三苯甲基-氯樹脂為起始樹脂采用芴甲氧羰基固相合成法逐一偶聯每一個保護氨基酸，合成得到側鏈全保護的肽鏈樹脂；2)對側鏈全保護的肽鏈樹脂進行切割，得到全保護的肽鏈片段pGluP-9；3)對全保護的肽鏈片段pGluP-9進行C端乙胺化，得到阿拉瑞林的全保護片段；4)對阿拉瑞林的全保護片段切割除去側鏈保護基，得到阿拉瑞林粗品肽。
2.根據權利要求I所述的方法，其特征在于，步驟I)具體內容包括如下步驟O取脯氨酸-2氯-三苯甲基-氯樹脂用二氯甲烷浸泡，使樹脂充分溶脹，抽干，以 N, N- 二甲基甲酰胺作溶劑，加入芴甲氧羰基(2，2，4，6，7-五甲基-2H-苯并呋喃_5_磺酰基)精氨酸、N-甲基嗎啉或二異丙基乙胺，用O-苯并三唑-N，N, N, N-四甲基脲鎗六氟磷酸鹽/I-羥基苯并三唑、O-(苯并三唑-I-氧)-N，N, N, N-四甲基脲鎗六氟硼酸鹽/I-羥基苯并三唑、O-(7-偶氮苯并三氮唑-I-氧)-N，N, N, N-四甲基脲鎗六氟磷酸鹽/I-羥基-7-偶氮苯并三唑中的一種混合物為縮合劑，反應O. 5-2小時，茚三酮法檢測反應終點，抽干，用 N, N- 二甲基甲酰胺洗滌3-5次，抽干，獲得芴甲氧羰基-(2，2，4，6，7-五甲基-2H-苯并呋喃-5-磺酰基)精氨酸-脯氨酸-2氯-三苯甲基-氯樹脂；2)在步驟(I)獲得的樹脂中，加入脫帽試劑，反應10-30分鐘，抽干，用N，N- 二甲基甲酰胺洗滌5-10次，抽干，以N，N- 二甲基甲酰胺為溶劑，加入具有芴甲氧羰基保護的氨基酸、 N-甲基嗎啉或二異丙基乙胺，以及用O-苯并三唑-N，N, N, N-四甲基脲鎗六氟磷酸鹽/I-羥基苯并三唑、O-(苯并三唑-I-氧)-N，N, N, N-四甲基脲鎗六氟硼酸鹽/I-羥基苯并三唑、O-(7-偶氮苯并三氮唑-I-氧)-N, N, N, N-四甲基脲鎗六氟磷酸鹽/I-羥基-7-偶氮苯并三唑中的一種混合物為縮合劑，反應O. 5-2小時，檢測反應終點，抽干，用N，N- 二甲基甲酰胺洗滌3-5次，抽干，然后再加入脫保護試劑，脫保護反應，再加入具有芴甲氧羰基保護基團的氨基酸，如此反復，直至連完最后一個焦谷氨酸，用N，N- 二甲基甲酰胺洗滌3-5次，再用甲醇和二氯甲烷交替洗滌3次，最后加甲醇收縮樹脂，抽干，真空干燥，獲得焦谷氨酸-(三苯甲基)組氨酸-(叔丁氧羰基)色氨酸-(叔丁氧基)絲氨酸-(叔丁氧基)酪氨酸-D-丙氨酸-亮氨酸_(2，2，4，6，7-五甲基-2H-苯并呋喃_5_磺酰基)精氨酸-脯氨酸_2氯-三苯甲基-氯樹脂；所說的具有芴甲氧羰基保護基團的氨基酸，依次包括芴甲氧羰基亮氨酸， 芴甲氧羰基-D-丙氨酸，芴甲氧羰基叔丁氧基酪氨酸，芴甲氧羰基叔丁氧基絲氨酸，芴甲氧羰基叔丁氧羰基色氨酸，芴甲氧羰基三苯甲基組氨酸。
3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，脯氨酸-2氯-三苯甲基-氯樹脂的取代度在O. 3mmol/g-l. 2mmol/g之間,荷甲氧羰基(2，2, 4, 6, 7-五甲基-2H-苯并呋喃-5-磺酰基)精氨酸的量為樹脂摩爾量的1-5倍；脫帽試劑為體積比10-30%的哌啶/N，N- 二甲基甲酰胺混合溶液，每一步保護氨基酸的量的是樹脂摩爾量的1-5倍，縮合試劑的量是樹脂摩爾量的1-5倍，N-甲基嗎啉或二異丙基乙胺的量是樹脂摩爾量的2-10倍，每一步反應終點的檢測方法所采用的是茚三酮檢測法。
4.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，脯氨酸-2氯-三苯甲基-氯樹脂的取代度為O. 6mmol/g,芴甲氧羰基(2，2，4，6，7-五甲基-2H-苯并呋喃_5_磺酰基)精氨酸的量為樹脂摩爾量的2倍；脫帽試劑為體積比20%的哌啶/N，N- 二甲基甲酰胺混合溶液，每一步保護氨基酸的量的是樹脂摩爾量的2倍，縮合試劑為O-(苯并三唑-I-氧)-N, N, N，N-四甲基脲鎗六氟硼酸鹽/I-羥基苯并三唑，其用量是樹脂摩爾量的2倍，二異丙基乙胺的量是樹脂摩爾量的4倍。
5.根據權利要求I所述的方法，其特征在于，所述步驟2)包括如下步驟在側鏈全保護的肽鏈樹脂加入切肽試劑，反應1-3小時，抽濾濾掉樹脂顆粒，收集濾液，減壓蒸餾除去溶劑，加水析出白色固體，抽干，真空干燥，獲得全保護的肽鏈片段 pGluP_90
6.根據權利要求5所述的方法，其特征在于所用的切肽試劑為體積比為1%-5%的三氟乙酸/ 二氯甲烷混合溶液。
7.根據權利要求6所述的方法，其特征在于所用的切肽試劑為體積比為2%的三氟乙酸 / 二氯甲烷混合溶液。
8.根據權利要求I所述的方法，其特征在于，所述步驟3)包括如下步驟將全保護的肽鏈片段pGluP-9溶于N，N- 二甲基甲酰胺溶液中，加入乙胺鹽酸鹽、二異丙基乙胺，用(苯并三唑-I-氧)-三吡咯烷子基磷鎗六氟磷酸鹽/I-羥基苯并三唑、二異丙基碳二亞胺/I-羥基苯并三唑、O-苯并三唑-N，N, N, N-四甲基脲鎗六氟磷酸鹽/ I-羥基苯并三唑中一種混合物為縮合劑，攪拌反應12-24小時，乙胺鹽酸鹽的用量是肽鏈片段 pGluP-9摩爾數的1-5倍，縮合劑的用量是肽鏈片段pGluP-9摩爾數的1_5倍，二異丙基乙胺的用量是肽鏈片段pGluP-9摩爾數的3-15倍，反應結束后，加檸檬酸飽和溶液，析出白色固體，抽干，真空干燥，獲得阿拉瑞林的全保護片段。
9.根據權利要求8所述的方法，其特征在于，縮合試劑選用(苯并三唑-I-氧)_三吡咯烷子基磷鎗六氟磷酸鹽/I-羥基苯并三唑，攪拌反應18小時，乙胺鹽酸鹽的用量是肽鏈片段pGluP-9摩爾數的I. 5倍，縮合劑的用量是肽鏈片段pGluP-9摩爾數的I. 5倍，二異丙基乙胺的用量是肽鏈片段PGluP-9摩爾數的6倍。
10.根據權利要求I所述的方法，其特征在于，所述的步驟4)包括如下步驟將阿拉瑞林的全保護片段中加入去保護試劑，去保護試劑選用體積比三氟乙酸水 三異丙基硅烷=95:2:3的混合試劑，或者是體積比為三氟乙酸苯甲硫醚苯酚乙二硫醇水=87. 5:5:2. 5:2. 5:2. 5的混合試劑，反應時間是1_3小時，反應結束后，加乙醚沉淀， 離心收集沉淀，再用乙醚洗滌3-6次，真空干燥，獲得阿拉瑞林粗品。
全文摘要
本發明涉及阿拉瑞林的一種固液結合的合成方法。主要解決現有合成方法存在的收率低、成本高、反應條件苛刻、污染大的技術問題。本發明主要合成步驟1)以脯氨酸-2氯-三苯甲基-氯樹脂為起始樹脂采用芴甲氧羰基固相合成法逐一偶聯每一個保護氨基酸，合成得到側鏈全保護的肽鏈樹脂；2)對側鏈全保護的肽鏈樹脂進行切割，得到全保護的肽鏈片段pGluP-9；3)對全保護的肽鏈片段pGluP-9進行C端乙胺化，得到阿拉瑞林的全保護片段；4)對阿拉瑞林的全保護片段切割除去側鏈保護基，得到阿拉瑞林粗品肽。本發明具備大規模化生產能力，操作簡易、工藝穩定、生產成本低，總收率超過40%。
文檔編號C07K1/04GK102702327SQ20121020426
公開日2012年10月3日 申請日期2012年6月20日 優先權日2012年6月20日
發明者徐紅巖, 竺劍峰, 飯島悠介 申請人:上海吉爾多肽有限公司, 吉爾生化(上海)有限公司, 濱海吉爾多肽有限公司