專利名稱：一種提取純化蕓苔抗毒素的方法
技術領域：
本發明屬于植物有效成分提取分離領域，具體涉及ー種提取純化蕓苔抗毒素的方法。
背景技術：
蕓苔抗毒素(Brassilexine)為白色微晶，是ー種吲哚生物堿，分子式為C9H6N2S,分子量為174. 23,來源于十字花科(Cruciferae) 菜Brassica juncea L.的葉。藥理研究表明，蕓苔抗毒素具抗腫瘤作用，抑制人癌細胞生長，其LD50為8μ g/mL ο在濃度為20 μ g/mL時，其具細胞毒活性，能100%抑制KB細胞。此外蕓苔抗毒素在體外還有抗真菌活性。芥菜，(學名-.Brassica juncea L),是蕓苔屬一年生或二年生草本。又名雪里蕻。具有宣肺豁痰，溫中利氣的功效，主治寒飲內盛，咳嗽痰滯，胸隔滿悶。耳目失聰、牙齦腫爛、寒腹痛、便秘等病癥。性溫味辛。入肺、胃、腎經。芥菜含有維生素A、B族維生素、維C和維D等。芥菜含有大量的抗壞血酸，是活性很強的還原物質，參與機體重要的氧化還原過程，能增加大腦中氧含量，激發大腦對氧的利用，有提神醒腦，解除疲勞的作用。目前對芥菜化學成分研究較少，尚未見蕓苔抗毒素的相關提取研究報道。
發明內容
本發明要解決的技術問題是提供一種提取純化蕓苔抗毒素的方法，該方法エ藝簡單、污染小、得率高、產品純度高。為了解決上述技術問題，本發明的技術方案如下
以芥菜葉為原料，投入萃取釜中，采用超臨界CO2萃取2-4小吋，收集萃取物，用氨水調節PH至9，加入ニ氯甲烷萃取，ニ氯甲烷萃取液加入氧化鋁中壓柱，水洗至中性，再用ニ氯甲烷-甲醇混合溶液洗脫，TLC跟蹤檢測，收集高濃度流分，回收試劑，干燥得蕓苔抗毒素產品O所述超臨界CO2萃取條件為萃取溫度為35-55°C，萃取壓カ為20_28MPa，分離釜I溫度為25-45°C，壓カ為10-18MPa，分離釜II溫度為20_35°C，壓カ為4_8MPa。所述氧化鋁為中性氧化鋁，目數為200-400目。所述ニ氯甲烷-甲醇梯度洗脫順序為依次按體積比ニ氯甲烷-甲醇20:1、10:1、5:1、5:2進行洗脫。本發明的有益效果在于采用超臨界CO2萃取，具有操作溫度低，選擇性好，操作條件較溫和，制取的產品純度高，萃取無殘留，是ー種高效環保的萃取方法；采用中壓氧化鋁柱分離，可進行大量制備；本發明エ藝穩定，可用于エ業化生產。下面將結合具體實施方式
進ー步說明本發明，但本發明要求保護的范圍并不局限于下列實施方式。
具體實施例方式 實施例I:將芥菜葉粉碎，過20目篩，稱取IOkg加入萃取釜中，開啟機器，調節參數萃取溫度為35°C，萃取壓カ為28MPa，分離釜I溫度為25°C，壓カ為18MPa，分離釜II溫度為20°C，壓カ為8MPa，以40L/h的流速通入CO2萃取2小時，解析萃取物，用氨水調節pH至9，再加入ニ氯甲烷萃取多次，收集合并ニ氯甲烷萃取液，減壓濃縮后加入氧化鋁中壓柱(400目的中性氧化鋁，柱徑高比為1:5)，依次按體積比ニ氯甲烷-甲醇20:1、10:1、5:1、5:2進行洗脫，TLC跟蹤檢測，收集高濃度流分，回收試劑，干燥得蕓苔抗毒素產品408mg，含量為95. 3%。實施例2:
將芥菜葉粉碎，過20目篩，稱取IOkg加入萃取釜中，開啟機器，調節參數萃取溫度為55°C，萃取壓カ為20MPa，分離釜I溫度為45°C，壓カ為lOMPa，分離釜II溫度為35°C，壓カ為8MPa，以40L/h的流速通入CO2萃取4小時，解析萃取物，用氨水調節pH至9，再加入ニ氯甲烷萃取多次，收集合并ニ氯甲烷萃取液，減壓濃縮后加入氧化鋁中壓柱(200目的中性氧 化鋁，柱徑高比為1:7)，依次按體積比ニ氯甲烷-甲醇20:1、10:1、5:1、5:2進行洗脫，TLC跟蹤檢測，收集高濃度流分，回收試劑，干燥得蕓苔抗毒素產品375mg，含量為89. 3%。實施例3
將芥菜葉粉碎，過20目篩，稱取IOkg加入萃取釜中，開啟機器，調節參數萃取溫度為45°C，萃取壓カ為25MPa，分離釜I溫度為28°C，壓カ為15MPa，分離釜II溫度為25°C，壓カ為6MPa，以40L/h的流速通入CO2萃取3小時，解析萃取物，用氨水調節pH至9，再加入ニ氯甲烷萃取多次，收集合并ニ氯甲烷萃取液，減壓濃縮后加入氧化鋁中壓柱(300目的中性氧化鋁，柱徑高比為1:7)，依次按體積比ニ氯甲烷-甲醇20:1、10:1、5:1、5:2進行洗脫，TLC跟蹤檢測，收集高濃度流分，回收試劑，干燥得蕓苔抗毒素產品345mg，含量為91. 6%。實施例4:
將芥菜葉粉碎，過20目篩，稱取20kg加入萃取釜中，開啟機器，調節參數萃取溫度為38°C，萃取壓カ為26MPa，分離釜I溫度為28°C，壓カ為14MPa，分離釜II溫度為22°C，壓カ為5MPa，以60L/h的流速通入CO2萃取4小時，解析萃取物，用氨水調節pH至9，再加入ニ氯甲烷萃取多次，收集合并ニ氯甲烷萃取液，減壓濃縮后加入氧化鋁中壓柱(400目的中性氧化鋁，柱徑高比為1:6)，依次按體積比ニ氯甲烷-甲醇20:1、10:1、5:1、5:2進行洗脫，TLC跟蹤檢測，收集高濃度流分，回收試劑，干燥得蕓苔抗毒素產品754mg，含量為93. 4%。
權利要求
1.1、一種提取純化蕓苔抗毒素的方法，其特征在于包括以下步驟以芥菜葉為原料，投入萃取釜中，采用超臨界CO2萃取2-4小時，收集萃取物，用氨水調節pH至9，加入二氯甲烷萃取，二氯甲烷萃取液加入氧化鋁中壓柱，水洗至中性，再用二氯甲烷-甲醇混合溶液洗脫，TLC跟蹤檢測，收集高濃度流分，回收試劑，干燥得蕓苔抗毒素產品。
2.2、如權利要求I所述的一種提取純化蕓苔抗毒素的方法，其特征在于所述超臨界CO2萃取條件為萃取溫度為35-55°C，萃取壓力為20-28MPa，分離釜I溫度為25_45°C，壓力為.10-18MPa，分離釜II溫度為20-35°C，壓力為4_8MPa。
3.3、如權利要求I所述的一種提取純化蕓苔抗毒素的方法，其特征在于所述氧化鋁為中性氧化招，目數為200-400目。
4.4、如權利要求I所述的一種提取純化蕓苔抗毒素的方法，其特征在于所述二氯甲烷-甲醇梯度洗脫順序為依次按體積比二氯甲烷-甲醇20:1、10:1、5:1、5:2進行洗脫。
全文摘要
本發明公開了一種提取純化蕓苔抗毒素的方法，方法是以芥菜葉為原料，以CO2為溶劑進行超臨界提取2-4小時，解析物用氨水調節pH至9，加入二氯甲烷萃取，二氯甲烷萃取液加入氧化鋁中壓柱，水洗至中性，再用二氯甲烷-甲醇混合溶液洗脫，TLC跟蹤檢測，收集高濃度流分，回收試劑，干燥得蕓苔抗毒素。本發明工藝簡單、污染小、得率高、產品純度高。
文檔編號C07D513/04GK102675347SQ201210184569
公開日2012年9月19日 申請日期2012年6月7日 優先權日2012年6月7日
發明者劉東鋒, 楊成東 申請人:南京澤朗醫藥科技有限公司