專利名稱：虎杖中二苯乙烯苷的制備方法
技術領域：
本發明屬于中藥中有效成分提取與分離技術領域，具體涉及從虎杖中制備ニ苯こ烯苷的方法。
背景技術：
虎杖為寥科多年生草本植物虎杖(Polygonum cuspidatum Sieb. et Zucc)的根及根莖，是使用悠久且常用中藥之一。其性寒味苦，具有祛風利濕、散瘀定痛、止咳化痰等功效。現代藥理學研究發現，虎杖具有多種藥理活性，主要包括顯著的抗菌、抗真菌作用樊小容.虎杖對致病菌株藥敏試驗.時珍國醫國藥，2000，11 (2) :108與較好的抗病毒活性蔣巖，王紅霞，鮑作義，等.用鼠艾滋病模型評價虎杖水提液的抗病毒作用.中國病毒學，1998，13⑷306；對心血管系統亦有強心、降脂作用金春華，趙克森，劉杰等.虎杖甙對 正常大鼠血管平滑肌細胞內游離鈣濃度的影響.中國病理生理雜志，1998，14(2) :195;陳曉莉，肖華，薛克昌.虎杖片與辛伐他汀治療高脂血癥的比較.醫藥導報，2002，21 (I) 25 ；王懷亮.虎杖提取物對冠心病患者血小板釋放功能的影響.深圳中西醫結合雜志，1997，7(2) :19;還具有清除自由基孟潔，杭瑚.虎杖提取物的抗氧化活性及穩定性研究.化學世界，2000，(8) :417、降血糖沈忠明，殷建偉，袁海波.虎杖鞣質的降血糖作用研究.天然產物研究與開發，2004,16 (3) :220、抗腫瘤，抗炎，止血，止咳，平喘，鎮靜等活性孔曉華，周玲芝.中藥虎杖的研究進展.中醫藥導報，2009，15 (5) :107。虎杖中含有較多的羥基蒽醌類、ニ苯こ烯類、黃酮類和多糖類成分孔曉華，周玲芝.中藥虎杖的研究進展.中醫藥導報.2009，15(5) :107，其中大黃素、大黃素甲醚、虎杖苷等含量較高。為了進一步闡明虎杖的藥效基礎，我們對虎杖的化學成分研究發現不同產地的虎杖中均含有2，3，5，4’-四羥基ニ苯こ烯-2-0-β -D-葡萄糖苷(簡稱ニ苯こ烯苷)，最聞含量可達5. I %。ニ苯こ烯苷也是何首烏中的主要水溶性成分，為白色無定形粉末，易溶于水、甲醇、こ醇。其含量常作為何首烏藥材及制劑質量控制的指標。ニ苯こ烯苷有多種藥理作用對老年性癡呆等神經退行性疾病有治療作用張蘭，邢穎，趙玲，等.不同時程APP轉基因小鼠學習記憶改變及參烏膠囊、ニ苯こ烯苷的干預作用.中國行為醫學科學，2006，15(3) :193_196;清除自由基,延緩衰老的作用Lv LS, Gu XH, Tang J, et al. Antioxidantactivity of stilbeneglycosides irom poygonum mumflorum. Food しhemistry，2007,104(4) :1678-1681；降血脂及抗動脈粥樣硬化作用Yang PY, Almofti MR, Lu L，et al. Reduction ofatheroscierosis in cholesterol-fed rabbits and decrease oiexpressions of intracellular adhesion molecule—I and vascular endothelialgrowth factor in foam cells by a water-solution fraction of polygonummultiflorum. J Pharmacol Sci，2005，99 (3) :294_300;抗腫瘤作用謝歲.何首烏及ニ苯乙烯苷的研究進展.天津藥學，2010，22 (3) :70-73等；具有重要的藥用價值和開發前景。虎杖主要分布于江蘇、浙江、江西、福建、山東、河南等中南部地區，資源豐富。以虎杖作為ニ苯こ烯苷的新來源，從中提取ニ苯こ烯苷，可產生更大的經濟效益。
發明內容
本發明提供ー種エ藝穩定、純度和收率高的虎杖中制備ニ苯こ烯苷的方法，該方法包括以下步驟(I)提取將虎杖粉碎成粗粉，用50 90%こ醇浸泡12 24h，浸潰或滲漉提取，減壓回收こ醇，得到提取濃縮液；(2)萃取法除去雜質將提取濃縮液用低極性有機溶劑萃取，集中有機溶劑萃取過的水溶液；(3)大孔吸附樹脂純化將水溶液稀釋后，過大孔吸附樹脂，先用少量水洗脫至洗脫液不渾濁，棄去，用30%濃度こ醇洗脫雜質，棄去，再用40 60%濃度こ醇洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮至小體積，冷凍干燥，得ニ苯こ烯苷粗品。(4)重結晶將ニ苯こ烯苷粗品混懸于I : 5的丙酮-水溶液中，80°C溶解，慢慢降低溫度，析出結晶，抽濾后得ニ苯こ烯苷晶體。上述⑴步驟中采用50 90%こ醇浸泡12 24h，最好采用60 80%こ醇；提取方法包括浸潰或滲漉提取，最好為滲漉提取。上述(2)步驟中所述低極性有機溶劑可以是苯、甲苯、ニ甲苯、こ醚、石油醚等低極性有機溶劑中的ー種。上述(3)步驟中用40 60%濃度こ醇洗脫，最好采用40%こ醇；用量為樹脂重量的5 10倍。
具體實施例方式下面列舉典型實施例，對本發明進ー步說明，但不以任何形式構成對本發明的限制。實施例I取虎杖藥材1kg，粉碎成粗粉，用2L 60%こ醇潤濕；裝入滲漉器中，浸潰放置24h，便溶劑充分滲透擴散；用IOL 60%こ醇滲濾，收集滲漉液；減壓回收こ醇，濃縮至1200ml，毎次2倍體積こ醚萃取，共萃取3次，除脂溶性雜質；取水層，加3倍藥材重量的去離子水稀釋，離心(3000轉/分)，上清液以ILAkg^h)流速過D-101大孔吸附樹脂(柱徑-柱高=
I 10，樹脂重量為藥材重量的2倍)，用3倍于樹脂體積的去離子水以ILAkg^h)流速除雜，然后用5倍于樹脂體積的30%こ醇以O. 8L/(kg · h)流速除雜，最后用6倍于樹脂體積的40%こ醇以O. 8L/(kg · h)流速解吸，收集解吸液，減壓回收こ醇，減壓濃縮至小體積，冷凍干燥；將得到的粗品11. 9g混懸于I : 5的丙酮-水溶液中，80°C溶解，放置室溫，再置于-4°C，析出結晶，抽濾后得ニ苯こ烯苷晶體5. lg。實施例2取虎杖藥材2kg，粉碎成粗粉，用5L 70%こ醇潤濕；裝入滲漉器中，浸潰放置24h，使溶劑充分滲透擴散；用15L 70%こ醇滲濾，收集滲漉液；減壓回收こ醇，濃縮至2200ml，毎次3倍體積石油醚萃取，共萃取3次；取水層，加3倍藥材重量的去離子水稀釋，離心(3000轉/分)，上清液以l!V(kg -h)流速過D-101大孔吸附樹脂(柱徑-柱高=I 10，、樹脂重量為藥材重量的2倍)，用2倍于樹脂體積的去離子水以IL/(kg -h)流速除雜，然后用8倍于樹脂體積的30%こ醇以O. 8L/(kg -h)流速除雜，最后用10倍于樹脂體積的40%こ醇以O. 8L/(kg -h)流速解吸，收集解吸液，減壓回收こ醇，減壓濃縮至小體積，冷凍干燥；將得到的粗品20. 2g混懸于I : 5的丙酮-水溶液中，80°C溶解，放置室溫，再置于-4°C，析出結晶，抽濾后得ニ苯こ烯苷晶體9. 9g。實施例3取虎杖藥材10kg，粉碎成粗粉，用15L 60%こ醇潤濕；裝入滲漉器中，浸潰放置24h，使溶劑充分滲透擴散；用50L 60%こ醇滲濾，收集滲漉液；減壓回收こ醇，濃縮至2L，毎次2倍體積こ醚萃取，共萃取2次；取水層，加2倍藥材重量的去離子水稀釋，離心(3000轉/分)，上清液以ILAkg^h)流速過D-101大孔吸附樹脂(柱徑-柱高=I 10，樹脂重量為藥材重量的I. 5倍)，用2倍于樹脂體積的去離子水以ILAkg · h)流速除雜，然后用5倍于樹脂體積的30%こ醇以O. 8L/(kg · h)流速除雜，最后用6倍于樹脂體積的40% こ醇以O. 8L/(kg -h)流速解吸，收集解吸液，減壓回收こ醇，減壓濃縮至小體積，冷凍干燥；將得到的粗品83. 6g混懸于I : 5的丙酮-水溶液中，80°C溶解，放置室溫，再置于-4°C，析出結晶，抽濾后得ニ苯こ烯苷晶體32. 9g。
權利要求
1.ー種虎杖中制備ニ苯こ烯苷的方法，其方法特征在干 (1)提取將虎杖粉碎成粗粉，用50-90%こ醇浸泡12-24h，浸潰或滲漉提取，減壓回收こ醇，得到提取濃縮液； (2)萃取法除去雜質將提取濃縮液用低極性有機溶劑萃取，集中有機溶劑萃取過的水溶液； (3)大孔吸附樹脂純化將水溶液稀釋后，過大孔吸附樹脂，先用少量水洗脫至洗脫液不渾濁,棄去,用30%濃度こ醇洗脫雜質，棄去，再用40-60%濃度こ醇洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮，冷凍干燥，得ニ苯こ烯苷粗品； (4)重結晶將ニ苯こ烯苷粗品混懸于I: 5的丙酮-水溶液中，80°C溶解，慢慢降低溫度，析出結晶，抽濾后得ニ苯こ烯苷晶體。
2.根據權利要求I所述的虎杖中二苯こ烯苷的制備方法，其提取特征在于所述(I)步驟中采用50-90%こ醇浸泡12-24h，最好采用60-80%こ醇；提取方法包括浸潰或滲漉提取，最好為滲漉提取。·
3.根據權利要求I所述的虎杖中二苯こ烯苷的制備方法，其萃取特征在于所述(2)步驟中低極性有機溶劑可以是苯、甲苯、ニ甲苯、こ醚、石油醚等低極性有機溶劑中的ー種。
4.根據權利要求I所述的虎杖中二苯こ烯苷的制備方法，其純化特征在于所述(3)步驟中用40-60%濃度こ醇洗脫，最好采用40%こ醇；用量為樹脂重量的5-10倍。
全文摘要
本發明涉及一種虎杖中二苯乙烯苷的制備方法，屬于中藥中有效成分提取與分離技術領域。該制備方法的步驟為是將虎杖粉碎成粗粉，用50～90％乙醇浸泡，浸漬或滲漉提取，減壓濃縮；用低極性有機溶劑萃取濃縮液，除去雜質；將萃取過的水溶液稀釋后，經大孔吸附樹脂純化得二苯乙烯苷粗品；將粗品用1∶5的丙酮-水溶液重結晶，低溫處理，得到二苯乙烯苷晶體；本發明提供的虎杖中二苯乙烯苷的制備方法具有工藝穩定、經濟實用、提取效率高等特點。
文檔編號C07H15/203GK102718811SQ20121016048
公開日2012年10月10日 申請日期2012年5月22日 優先權日2012年5月22日
發明者孫紀元, 曹蔚, 楊倩, 畢琳琳, 王四旺, 謝艷華 申請人:中國人民解放軍第四軍醫大學