專利名稱：一種恩拉霉素發酵液的預處理方法及以其制備恩拉霉素預混劑的方法
技術領域：
本發明涉及一種恩拉霉素發酵液的預處理方法以及制備恩拉霉素預混劑的方法。
背景技術：
恩拉霉素(enramycin)，亦稱恩來霉素、恩霉素、安來霉素和持久霉素等，是一種多肽類抗生素。最初在1966年，日本武田藥品工業株式會社研究人員，從日本兵庫縣西宮市的土壤中分離出來的一株殺真菌鏈霉菌streptomyces fungicidious NO. B-5477產生的發酵代謝產物。1974年，該藥在日本正式注冊，其后在許多國家被注冊和廣泛使用。1993年，日本武田藥品工業株式會社向中國農業部申請登記注冊該藥，注冊名稱為恩拉霉素預混劑(恩拉鼎)，用作藥物飼料添加劑。2000年，先靈葆雅公司收購了日本武田動物保健公司，該產品由先靈保雅獨家生產經營，國內外市場處于壟斷狀態。2005年，國內生產企業浙江海正藥業股份有限公司與美國先靈葆雅動物保健品有限公司開始合作，生產恩拉霉素預混劑。先靈葆雅公司恩拉霉素預混劑生產量和銷售量占全球80%，在世界上40多個國家銷售，2009年，其在中國的銷售額達到2億元人民幣，并且銷售增長速度很快。由于只需要添加微量恩拉霉素就可以呈現出優良的促生長和改善飼料利用率的作用，并且其具有很高的低毒性、低的藥物殘留性，且對革蘭氏陽性菌有很強的抑制作用，特別是對腸道有害梭菌有較強的抑制作用，長期使用后不易產生耐藥性，因此被世界上很多國家推薦作為動物促生長劑，是一種較好的飼料添加劑。雖然恩拉霉素在國內有很好的發展前景，但是恩拉霉素預混劑成品的不穩定性影響了恩拉霉素在存儲、運輸、及應用過程中的穩定，進而影響了其品質及銷售和使用
發明內容
本發明針對恩拉霉素預混劑成品穩定性不強的問題，提供了一種恩拉霉素發酵液的預處理方法，該方法簡單易行、成本低，通過預處理的發酵液得到的恩拉霉素降解程度明顯減少。本發明還提供了一種恩拉霉素發酵液制備恩拉霉素預混劑的方法，該方法用預處理的發酵液制備恩拉霉素預混劑，所得產品穩定性明顯提高，在存儲、運輸、及應用過程中更加方便。現有技術中，一般是對發酵液直接進行過濾、干燥等步驟提取恩拉霉素，這樣得到的成品顯示穩定性不強，儲存一段時間后容易降解。發明人經過大量的研究發現在提取恩拉霉素前對發酵液進行預處理會使成品的穩定性大大提高，下面具體介紹本發明的方案
一種恩拉霉素發酵液的預處理方法，步驟是在從恩拉霉素發酵液中提取恩拉霉素之前，先將發酵液的PH值用酸調節至4. 0-7. 0，然后加入發酵液質量O. 8-1. 0%的硫酸鋁。調節PH值所用的酸為磷酸、檸檬酸或鹽酸，優選磷酸或檸檬酸，最優選磷酸。pH值用酸優選調節至4. 0-6. O，最優選調節至4. 0-5. O。
此外，將此預處理方法用于制備恩拉霉素預混劑也有較好的效果，步驟為用酸將發酵培養得到的恩拉霉素發酵液調節PH值至4. 0-7. 0，再向發酵液中加入其質量O. 8-1. 0%的硫酸鋁，然后將發酵液經板框過濾、閃蒸干燥、粉碎至80-100目、添加輔料稀釋，制得恩拉霉素預混劑。其中，所用的酸為磷酸、檸檬酸或鹽酸；板框過濾的壓力為O. 5-0. 7MPa，壓濾時間為l_2h ;閃蒸干燥進風溫度90-110°C，出風溫度70-90°C;稀釋用的輔料是稻殼粉或沸石粉。優選的，所用的酸為磷酸或檸檬酸，最優選磷酸。優選的，調節PH值至4. 0-6.0，最優選pH值至4. 0-5.0。上述預處理方法或者恩拉霉素預混劑的方法都是以恩拉霉素發酵液為原料，本發明所用的恩拉霉素發酵液優選以殺真菌素鏈霉菌C trep tomyces fungicidicus)SDSL1205CGMCC NO. 3933為菌種發酵得到的發酵液，發酵所用培養基包括下述組分玉米粉100g/L,玉米楽:10g/L,硫酸銨3g/L,硫酸鋅O. lg/L，碳酸隹丐20g/L,水余量；發酵條件:發酵溫度為27-30°C，發酵時間為180-220h，發酵pH值為6. 8-7. 4，轉速為250_350r/min。所用的殺真菌素鏈霉菌 i^treptomyces fungicidious) SDSL1205CGMCC NO. 3933 已經在申請號為201010226506. 6、發明名稱為“一種微生物發酵生產恩拉霉素的方法”的發明專利中進行了保藏，保藏單位為中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏日期為2010年6月21日，該專利已于2010年12月I日進行了公開，所以本發明中所用的CGMCCNO. 3933菌種已經滿足了充分公開的要求。本發明相比較現在的恩拉霉素生產技術來說，主要通過對恩拉霉素的發酵液進行預處理，從而改變恩拉霉素預混劑成品的品質。本發明簡單易行、成本低，與不進行預處理的成品相比，通過預處理的發酵液得到的恩拉霉素降解程度明顯減少，所得恩拉霉素預混劑成品在儲存過程中的穩定性明顯提高，本發明的方法使恩拉霉素成品在存儲、運輸、及應用過程中更加方便、穩定。
具體實施例方式下面結合實施例對本發明進行進一步的闡述，應該明白的是，下述說明僅是為了解釋本發明，并不對其內容進行限定。下述實施例中，所用發酵液以殺真菌素鏈霉菌i^treptomyces fungicidious)CGMCC NO. 3933發酵所得的發酵液為例，發酵液制備條件為
將殺真菌素鏈霉菌 ^Streptomyces fungi ci di cus) CGMCC NO. 3933 按 4_10wt% 的接種量接種到滅菌的發酵培養基中，27-30°C、250-350r/min條件下培養180_220h，發酵所用培養基以水為溶劑，還包括下述組分玉米粉100g/L，玉米漿10g/L，硫酸銨3g/L，硫酸鋅0. lg/L，碳酸鈣20g/L，pH值6. 8-7. 4，發酵完成后停止攪拌和控溫，收集發酵液。實施例I
取2批發酵完成的發酵液，按如下方法處理1、對照組不做處理；2、實驗組I :用磷酸 調節發酵液PH值為5. O,再加入發酵液質量0. 9%的硫酸鋁；3、實驗組2 :用鹽酸調節發酵液PH值為5. 0，再加入發酵液質量0. 9%的硫酸鋁；4、實驗組3 :用檸檬酸調節發酵液pH值5. 0，再加入發酵液質量0. 9%的硫酸鋁。然后在相同條件下將發酵液進行板框過濾(壓力
0.6MPa，時間2h)、濾餅進行閃蒸干燥(進風溫度100°C，出風溫度80°C )，干燥得到的恩拉霉素菌絲體干燥粉碎成恩拉霉素細粉(80-100目)、最后向細粉中加入輔料(稻殼粉)調節其濃度、混合均勻、得恩拉霉素預混劑成品。制備的成品儲存一段時間后，檢測樣品中恩拉霉素的含量，見表I。
表I
權利要求
1.一種恩拉霉素發酵液的預處理方法，其特征是在從恩拉霉素發酵液中提取恩拉霉素之前，先將發酵液的PH值用酸調節至4. 0-7. 0，然后加入發酵液質量O. 8-1. 0%的硫酸鋁。
2.根據權利要求I所述的預處理方法，其特征是調節PH值所用的酸為磷酸、檸檬酸或鹽酸。
3.根據權利要求2所述的預處理方法，其特征是調節pH值所用的酸為磷酸或檸檬酸。
4.根據權利要求3所述的預處理方法，其特征是調節pH值所用的酸為磷酸。
5.根據權利要求I所述的預處理方法，其特征是發酵所用的菌種為殺真菌素鏈霉菌 ^Streptomyces fungicidicus) SDSL1205CGMCC NO. 3933,發酵所用培養基包括下述組分玉米粉100g/L,玉米楽:10g/L,硫酸銨3g/L,硫酸鋅O. lg/L，碳酸隹丐20g/L,水余量;發酵條件為發酵溫度為27-30°C，發酵時間為180-22011，發酵？!1值為6.8-7.4，轉速為250-350r/mino
6.根據權利要求1-5中任一項所述的預處理方法，其特征是先將發酵液的pH值用酸調節至4. 0-6.0。
7.根據權利要求6所述的預處理方法，其特征是先將發酵液的pH值用酸調節至4.0_5· O ο
8.—種恩拉霉素發酵液制備恩拉霉素預混劑的方法，其特征是用酸將發酵培養得到的恩拉霉素發酵液調節PH值至4. 0-7. 0，再向發酵液中加入其質量O. 8-1. 0%的硫酸鋁，然后將發酵液經板框過濾、閃蒸干燥、粉碎至80-100目、添加輔料稀釋，制得恩拉霉素預混劑。
9.根據權利要求8所述的恩拉霉素發酵液制備恩拉霉素預混劑的方法，其特征是發酵所用的菌種為殺真菌素鏈霉菌iStr印tomyces fungicidicus) SDSL1205CGMCC NO. 3933,發酵所用培養基包括下述組分玉米粉100g/L，玉米漿10g/L，硫酸銨3g/L，硫酸鋅0.lg/L，碳酸鈣20g/L，水余量；發酵溫度為27-30°C，發酵時間為180-220h，發酵pH值為6.8-7. 4，轉速為 250-350r/min ； 所用的酸為磷酸、檸檬酸或鹽酸；板框過濾的壓力為0. 5-0. 7MPa，壓濾時間為l_2h ;閃蒸干燥進風溫度90-110°C，出風溫度70-90°C ;稀釋用的輔料是稻殼粉或沸石粉。
10.根據權利要求9所述的恩拉霉素發酵液制備恩拉霉素預混劑的方法，其特征是所用的酸為磷酸，調節PH值至4. 0-5. O。
全文摘要
本發明公開了一種恩拉霉素發酵液的預處理方法，步驟是在從恩拉霉素發酵液中提取恩拉霉素之前，先將發酵液的pH值用酸調節至4.0-7.0，然后加入發酵液質量0.8-1.0%的硫酸鋁。本發明還公開了一種制備恩拉霉素預混劑的方法。本發明相比較現在的恩拉霉素生產技術來說，主要通過對恩拉霉素的發酵液進行預處理，從而改變恩拉霉素預混劑成品的品質。本發明簡單易行、成本低，與不進行預處理的成品相比，通過預處理的發酵液得到的恩拉霉素降解程度明顯減少，所得恩拉霉素預混劑成品在儲存過程中的穩定性明顯提高，本發明的方法使恩拉霉素成品在存儲、運輸、及應用過程中更加方便、穩定。
文檔編號C07K1/34GK102633865SQ20121012084
公開日2012年8月15日 申請日期2012年4月24日 優先權日2012年4月24日
發明者張子臣, 張翠芬, 王向前, 王建麗, 賈同寬 申請人:山東勝利生物工程有限公司