專利名稱：一種制備高純度牻牛兒素的方法
技術領域：
本發明涉及一種植物活性成分的制備方法，具體地是一種從重陽木葉中制備櫳牛兒素的方法。
背景技術：
物牛兒素，屬鞋質類物質，分子式為C41H28O27,分子量為952. 656,存在于大戟科重陽木的葉中，含量高達1.8%，且其資源豐富。現代研究表明，櫳牛兒素具有保肝活性、5-脂氧化酶抑制作用、清除游離基活性、ACE抑制劑作用、抑制逆轉錄酶活性、抑制突變活性、抗病毒活性、抗菌活性、抗HIV復制活性等生物活性。目前，國內對櫳牛兒素的研究較少，尚處于起步階段。中國專利“一種櫳牛兒素的制備方法”(申請號為201010535328. 5)，該專利公開的方法是取老鶴草鮮莖葉，加水浸泡，壓榨過濾，濾液通過活性炭柱和大孔樹脂柱分離，甲醇結晶即得櫳牛兒素，該方法所獲得的產品含量不能達到對照品要求。因此，研究出一種制備高純度櫳牛兒素的方法是非常必要的，對于擴大藥源以及重陽木葉的綜合利用具有很重要的意義。
發明內容
本發明所要解決的技術問題是提供一種操作簡單，產品純度較高的櫳牛兒素一種制備高純度櫳牛兒素的方法。為解決上述技術問題，本發明采用下列技術方案
(1)超臨界二氧化碳流體萃取重陽木葉中的油脂類物質，殘留物用乙醇超聲提取后得到提取液；
(2)提取液濃縮，加入明膠溶液，離心，沉淀物用丙酮水溶液溶解，濾除明膠，得到初步純化液；
(3)上大孔樹脂純化，水和乙醇水溶液洗脫，洗脫液減壓回收乙醇，得到濃縮液；
(4)濃縮液通過凝膠柱層析分離，用50%-70%丙酮溶液洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮，靜置析晶，重結晶即得櫳牛兒素。所述超臨界萃取溫度為30-45°C，壓力為20-30MPa，時間為50_120min。所述乙醇為70-90%的乙醇溶液溶液，用量為5-10倍量(V/W)，超聲頻率為25-40KHZ，提取 2-3 次，每次 l_2h。所述明膠溶液濃度為3-6%，丙酮水溶液濃度為50-90%。
所述大孔樹脂可選HPD-400或ADS-17型，洗脫劑為70%的乙醇水溶液。所述重結晶溶劑為80%乙醇溶液。綜上所述，本發明存在以下優點本工藝采用超臨界二氧化碳萃取技術脫除油脂類成分，能有效脫除葉中大部分油脂類雜質，條件溫和；萃取超聲波提取的方法提取櫳牛兒素，提高了提取效率；70-90%的乙醇溶液作為提取溶劑，減少了多糖的溶出；采用大孔樹脂和凝膠柱分離櫳牛兒素，成本低，分離效果好；本發明的方法在50°C以下進行，避免了鞣質類成分在常規熱回流提取過程中因溫度過高所引起的化學和結構的改變，因此本方法可得到純度較高的櫳牛兒素，產品含量大于98%，且本方法提取周期短，方法安全，適合于工業化生產。下面將結合具體實施方式
對本發明做進一步闡述，但本發明要求保護的范圍并不局限于下列實施方式。
具體實施例方式實施例I
重陽木干燥葉粉碎，取1kg，放入超臨界萃取裝置中，在溫度為35°C，壓力為20MPa下萃取lOOmin，殘留物加8L80%的乙醇溶液進行超聲提取，超聲頻率為25KHz，提取3次，每次lh，過濾，合并提取液，濃縮，加入濃度為3%明膠溶液，攪拌至不再產生沉淀，離心，沉淀物用50%丙酮水溶液溶解，濾除明膠，得到初步純化液，上1LHPD-400大孔樹脂柱，吸附完成后，先用4L水洗脫，再用4L70%乙醇溶液洗脫，控制流速為3ml/min，收集富含櫳牛兒素的洗脫液，濃縮，濃縮液加水分散，上Toyopearl HW-40柱，用55%丙酮溶液洗脫，洗脫液回收丙酮，濃縮，靜置析晶，80%乙醇重結晶，得櫳牛兒素13. 9g J^HPLC檢測，其含量為98. 3%。實施例2
重陽木干燥葉粉碎，取1kg，放入超臨界萃取裝置中，在溫度為45°C，壓力為30MPa下萃取50min，殘留物加5L70%的乙醇溶液進行超聲提取，超聲頻率為35KHz，提取2次，每次Ih,過濾，合并提取液，濃縮，加入濃度為6%明膠溶液，攪拌至不再產生沉淀，離心，沉淀物用90%丙酮水溶液溶解，濾除明膠，得到初步純化液，上1LHPD-400大孔樹脂柱，吸附完成后，先用5L水洗脫，再用5L70%乙醇溶液洗脫，控制流速為4. 5ml/min,收集富含櫳牛兒素的洗脫液，濃縮，濃縮液加水分散，上Toyopearl HW-40柱，用50%丙酮溶液洗脫，洗脫液回收丙酮，濃縮，靜置析晶，80%乙醇重結晶，得櫳牛兒素18. 7g J^HPLC檢測，其含量為98. 7%。實施例3
重陽木干燥葉粉碎，取1kg，放入超臨界萃取裝置中，在溫度為40°C，壓力為30MPa下萃取60min，殘留物加10L70%的乙醇溶液進行超聲提取，超聲頻率為40KHz，提取2次，每次2h,過濾，合并提取液，濃縮，加入濃度為5%明膠溶液，攪拌至不再產生沉淀，離心，沉淀物用70%丙酮水溶液溶解，濾除明膠，得到初步純化液，上1LADS-17大孔樹脂柱，吸附完成后，先用3L水洗脫，再用6L70%乙醇溶液洗脫，控制流速為3. 5ml/min，收集富含櫳牛兒素的洗脫液，濃縮，濃縮液加水分散，上MCl-gel CHP-20P柱柱，用70%丙酮溶液洗脫，洗脫液回收丙酮，濃縮，靜置析晶，80%乙醇重結晶，得櫳牛兒素15. 4g J^HPLC檢測，其含量為98. 0%。實施例4
重陽木干燥葉粉碎，取1kg，放入超臨界萃取裝置中，在溫度為30°C，壓力為30MPa下萃取50min，殘留物加7L80%的乙醇溶液進行超聲提取，超聲頻率為35KHz，提取3次，每次Ih,過濾，合并提取液，濃縮，加入濃度為5%明膠溶液，攪拌至不再產生沉淀，離心，沉淀物用50%丙酮水溶液溶解，濾除明膠，得到初步純化液，上1LHPD-400大孔樹脂柱，吸附完成后，先用6L水洗脫，再用3L70%乙醇溶液洗脫，控制流速為4ml/min，收集富含櫳牛兒素的洗脫液，濃縮，濃縮液加水分散，上S印hadex LH-20柱，用60%丙酮溶液洗脫，洗脫液回收丙酮，濃縮，靜置析晶，80%乙醇重結晶，得櫳牛兒素12. 2g J^HPLC檢測，其含量為98. 1%。
實施例5
重陽木干燥葉粉碎，取1kg，放入超臨界萃取裝置中，在溫度為35°C，壓力為20MPa下萃取120min，殘留物加6L90%的乙醇溶液進行超聲提取，超聲頻率為30KHz，提取2次，每次2h，過濾，合并提取液，濃縮，加入濃度為6%明膠溶液，攪拌至不再產生沉淀，離心，沉淀物用70%丙酮水溶液溶解，濾除明膠，得到初步純化液，上1LHPD-400大孔樹脂柱，吸附完成后，先用3L水洗脫，再用4L70%乙醇溶液洗脫，控制流速為2. 5ml/min，收集富含櫳牛兒素的洗脫液，濃縮，濃縮液 加水分散，上Toyopearl HW-40柱，用65%丙酮溶液洗脫，洗脫液回收丙酮，濃縮，靜置析晶，80%乙醇重結晶，得櫳牛兒素18. 2g J^HPLC檢測，其含量為99. 1%。
權利要求
1.一種制備高純度櫳牛兒素的方法，其特征在于包括以下步驟 (1)超臨界二氧化碳流體萃取重陽木葉中的油脂類物質，殘留物用乙醇超聲提取后得到提取液； (2)提取液濃縮，加入明膠溶液，離心，沉淀物用丙酮水溶液溶解，濾除明膠，得到初步純化液； (3)上大孔樹脂純化，水和乙醇水溶液洗脫，洗脫液減壓回收乙醇，得到濃縮液； (4)濃縮液通過凝膠柱層析分離，用50%-70%丙酮溶液洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮，靜置析晶，重結晶即得櫳牛兒素。
2.如權利要求I所述一種制備高純度櫳牛兒素的方法，其特征在于步驟(I)中所述超臨界萃取溫度為30-45°C，壓力為20-30MPa，時間為50_120min。
3.如權利要求I所述一種制備高純度櫳牛兒素的方法，其特征在于步驟(I)中所述乙醇為70-90%的乙醇溶液溶液，用量為5-10倍量(V/W)，超聲頻率為25-40KHZ，提取2_3次，每次l-2h。
4.如權利要求I所述一種制備高純度櫳牛兒素的方法，其特征在于步驟(2)中所述明膠溶液濃度為3-6%，丙酮水溶液濃度為50-90%。
5.如權利要求I所述一種制備高純度櫳牛兒素的方法，其特征在于步驟(3)中所述大孔樹脂可選HPD-400或ADS-17型，洗脫劑為70%的乙醇水溶液。
6.如權利要求I所述一種制備高純度櫳牛兒素的方法，其特征在于步驟(4)中所述重結晶溶劑為80%乙醇溶液。
全文摘要
本發明公開了一種制備高純度牻牛兒素的方法。本方法是采用重陽木干燥葉為原料。該工藝流程主要分為四部分(1)超臨界二氧化碳流體萃取重陽木葉中的油脂類物質，超聲提取后得到提取液；(2)提取液濃縮，加入明膠溶液，離心，沉淀物用丙酮水溶液溶解，濾除明膠，得到初步純化液；(3)上大孔樹脂純化，水和乙醇水溶液洗脫，洗脫液濃縮；(4)濃縮液通過凝膠柱層析分離，用50%-70%丙酮溶液洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮，靜置析晶，重結晶即得牻牛兒素。本發明將為牻牛兒素的藥理活性及藥物制劑的深入研究奠定基礎。
文檔編號C07H13/08GK102643311SQ20121011955
公開日2012年8月22日 申請日期2012年4月23日 優先權日2012年4月23日
發明者萬冬梅, 劉東鋒 申請人:南京澤朗醫藥科技有限公司