專利名稱：一種常山堿的提取工藝的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種藥物提取工藝，具體地，涉及一種常山堿的提取工藝。
背景技術：
中獸藥是近年來的新興產業，簡單說，就是將中醫藥理論應用于動物身上，由于中藥既可預防和治療疾病、促進動物生長，又不會產生危害人體健康的藥物殘留，因此，逐步受到廣大獸藥生產企業和畜禽養殖者的重視，中獸藥的生產和使用比例逐年擴大。目前，許多大型畜禽養殖企業已將中獸藥作為預防、治療疾病及促進動物生長的重點使用對象，中小型養殖場(戶)的中獸藥使用也日益廣泛，中獸藥更是成為獸藥生產企業研制和開發的首選項目。中藥常山(Dichroa febrifuga Lour)是一種重要的植物資源，全世界共有13種， 我國有3種，廣泛分布于陜、甘、川、藏等省區，常山根、莖、葉、花均可入藥。常山堿為常山中主要有效成分之一，國內外研究發現，常山堿及其衍生物(如常山酮)具有良好的退熱、抗炎、抗瘧疾、抗腫瘤、抗流感、降血壓以及治療糖尿病、硬皮病等藥理作用。眾所周知，常山酮具有良好的抗球蟲效果，但作為一種化學合成藥，國外只有法國一家公司生產(商品名為速丹)，國內目前尚無常山酮工業化的報道，產品主要依靠進口，價格昂貴，在臨床中全面推廣幾乎不可能。最新研究發現，常山堿同樣具有良好的抗球蟲效果，且作為一類新型抗球蟲提取藥，具有成本低廉、安全高效和綠色環保的優點，市場應用前景廣闊。試驗結果表明，純度為O. 24%的常山堿按照O. 05 g/kg飼料添加給藥，對人工感染雞柔嫩艾美爾球蟲病具有良好的治療效果，抗蟲指數ACI可達169.01。球蟲病是呈全球性分布的常見禽病之一，禽類5% 10%的死亡率是由球蟲病引起的，并導致家禽生長受阻、飼料轉化率降低和肉蛋品質下降。全世界每年由雞球蟲病造成的經濟損失高達50億美元，我國為30億元人民幣。球蟲病流行的雞群生長嚴重滯后，隨之誘發大腸桿菌病、支原體病等，進一步加大養雞業的經濟損失。在球蟲感染中，柔嫩、堆型和巨型艾美耳球蟲對雞群威脅最大。目前，用球蟲疫苗免疫預防尚處于起步階段，疫苗的穩定性和劑型等方面存在諸多不足。常用的抗球蟲化學藥物很多，但容易產生耐藥性，且不能提高機體免疫力，氯羥吡啶，鹽酸氨丙啉等藥物甚至對免疫力有明顯的抑制效應，導致防治效果降低。常山堿是農業部獸用藥物創制重點實驗室提取分離得到的抗球蟲組分，包括α、 β和Y三種，藥理毒理試驗表明該藥具有廣譜高效、低毒低殘留和不易產生耐藥性的特點，對雞、火雞、兔子、豬、牛、羊、魚和部分野生動物球蟲病均有良好的防治作用。球蟲引發雞大量死亡的一個最主要原因是導致雞盲腸、小腸嚴重出血，進而造成機體免疫力下降和繼發其它疾病。我們研究發現，常山堿不僅對雞球蟲有良好的抑殺作用，而且可激發機體抗感染的免疫力和增強白細胞的吞噬作用，進而顯著提高抗球蟲效果。提取工藝是生物堿工業化生產的首要環節，特別是其提取和分離操作。常山中常山堿的含量極低，僅為萬分之三，提取分離非常困難。傳統的生物堿提取分離方法能耗、物耗大，雜質多，效率低，如浸潰、煎煮、溶劑回流、滲漉等。超聲輔助提取技術主要是靠超聲波空化產生的極大壓力造成被破碎物細胞壁及整個生物體瞬間破裂，同時超聲波產生振動作用加強了細胞內物質的釋放、擴散及溶解，加速植物中有效成分滲透進入溶劑而使提取效率獲得顯著提高。利用超聲技術可以縮短提取時間，提高提取率，提取過程溶劑用量相對較少，可以降低成本，并且整個過程無需加熱，提高了熱敏性生物堿的提取率且對其生理活性基本沒有影響。常用的純化方法包括有機溶劑萃取和大孔樹脂吸附等方法；有機溶劑萃取雖然操作簡單，但存在有機溶劑用量大、對人危害大和純化效果差等缺點；大孔樹脂吸附法純化效果較好，但前處理繁瑣，費時費力成本高。
發明內容
本發明要解決的技術問題是克服現有的缺陷，提供了一種安全、低成本、高效率的常山堿提取工藝。為了解決上述技術問題，本發明提供了如下的技術方案
本發明所提常山堿的提取工藝具有以下有益效果
本發明中將常山粉碎后，利用稀鹽酸酸化、超聲波萃取的方法提取常山堿，顯著縮短了提取時間，提高了常山堿得率；利用二氯甲烷萃取，結合硅膠柱層析的方法進行純化，提高了常山堿的純度，同時，工藝本身操作簡單，使用安全，成本低廉，特別適于工業化生產；所用試劑毒性小，價格便宜，可回收利用；超聲提取技術效率高、周期短、效果好；硅膠色譜法純化效果好，一次純化后常山堿含量可達O. 63%-1. 38%，為常山堿的工業化生產和球蟲病防治奠定了基礎。
圖I :鄰氨基苯甲酸標準曲線
圖2 :供試藥材、對照藥材和β -常山堿標準品的TLC圖譜。
具體實施例方式以下結合附圖對本發明的優選實施例進行說明，應當理解，此處所描述的優選實施例僅用于說明和解釋本發明，并不用于限定本發明。實施例I
常山堿的提取工藝，包括以下步驟
(1)將200g常山藥材干燥、粉碎為常山粗粉；
(2)將步驟(I)得到的常山粗粉與質量濃度為O.5%的鹽酸按質量體積比1:9混合，在 60°C下超聲提取4小時，抽濾，收集濾液；
(3)濾液用濃氨水調pH值至9，二氯甲烷萃取3次，收集下層液；
(4)下層液減壓濃縮，減壓濃縮的溫度為30°C，收集濃縮液；
(5)濃縮液用硅膠柱層析純化后洗脫，洗脫液為二氯甲烷、甲醇和濃氨水的混合物，體積比為8:2:0. I收集洗脫液；
(6)洗脫液減壓濃縮，減壓濃縮的溫度為30°C，得到常山堿浸膏。含量測定常山堿為混合物，因此不能用用高壓液相測定含量；參照相關文獻，依據常山堿在堿水中水解產生鄰氨基苯甲酸，鄰氨基苯甲酸與亞硝酸形成重氮鹽，重氮鹽遇乙二胺鹽酸鹽顯色的原理，利用紫外分光光度法測定常山堿含量，具體數值如表I所示
表I不同量筇氨基苯甲酸鹽的吸光度值
權利要求
1.一種常山堿的提取工藝，其特征在于，包括以下步驟(1)常山藥材干燥、粉碎為常山粗粉；(2)將步驟(I)得到的常山粗粉與質量濃度為5%以下的鹽酸按質量與體積比1:3-15 混合，在20°C _80°C下超聲提取O. 5小時以上，抽濾，收集濾液；(3)濾液用濃氨水調pH值至8以上，二氯甲烷萃取3次，收集下層液；(4)下層液減壓濃縮，收集濃縮液；(5)濃縮液用硅膠柱層析純化后洗脫，收集洗脫液；(6)洗脫液減壓濃縮，得到常山堿浸膏。
2.根據權利要求I所述的常山堿的提取工藝，其特征在于，步驟(2)所述鹽酸質量濃度為O. 2-5% ;所述常山粗粉與鹽酸的體積比為1:6。
3.根據權利要求I所述的常山堿的提取工藝，其特征在于，步驟⑵所述溫度為50°C; 所述時間為I小時。
4.根據權利要求I和2所述的常山堿的提取工藝，其特征在于，步驟(3)所述用濃氨水調pH值至11。
5.根據權利要求I所述的常山堿的提取工藝，其特征在于，步驟(4)和步驟(6)中的減壓濃縮的溫度為30°C -35°C。
6.根據權利要求I所述的常山堿的提取工藝，其特征在于，步驟(5)所述洗脫液為二氯甲烷、甲醇和濃氨水的混合物，體積比為8:2:0. I。
7.根據權利要求I所述的常山堿的提取工藝，其特征在于，步驟(2)重復2-10次后合并濾液。
8.根據權利要求1-7任意一項所述的常山堿的提取工藝，其特征在于，步驟(2)得到的濾液為經過無水二氯甲烷除雜后的濾液。
全文摘要
本發明公開了一種常山堿的提取工藝，包括以下步驟(1)常山藥材干燥、粉碎為常山粗粉；(2)將步驟(1)得到的常山粗粉與質量濃度為5%以下的鹽酸按質量與體積比1:3-15混合，在20℃-80℃下超聲提取0.5小時以上，抽濾，收集濾液；(3)濾液用濃氨水調pH值至8以上，二氯甲烷萃取3次，收集下層液；(4)下層液減壓濃縮，收集濃縮液；(5)濃縮液用硅膠柱層析純化后洗脫，收集洗脫液；(6)洗脫液減壓濃縮，得到常山堿浸膏。該方法克服了傳統技術提取率低、提取周期長、成本昂貴、工藝復雜、無法大生產等不足，可以高效率地從常山中分離較高純度的常山堿，為常山堿的工業化生產和球蟲病防治奠定了基礎。
文檔編號C07D401/06GK102600217SQ201210015939
公開日2012年7月25日 申請日期2012年1月18日 優先權日2012年1月18日
發明者梁劍平, 羅曉琴, 郭志廷, 雷宏東 申請人:中國農業科學院蘭州畜牧與獸藥研究所