專利名稱：疫苗的制作方法
技術領域：
本發明涉及可用作針對頂復門(apicompIexan)寄生物的疫苗或疫苗組分的多肽或核酸。
背景技術：
原生動物門頂復門(Apicomplexa)含有醫學和獸醫意義的病原體，包括剛地弓形蟲(Toxoplasma gondii)和艾美球蟲屬(Eimeria)、痕原蟲屬(Plasmodium)和泰勒蟲屬(Theileria)物種。盡管經過幾十年的努力，但是針對這些及其它相關寄生物的保護性疫苗是缺乏的。用于將真正免疫保護性抗原鑒定為疫苗候選物的經驗辦法已經實現混合的結果，并且區分免疫原性與實際免疫保護的問題持續。如此，需要開發針對原生動物寄生物的改善的疫苗。隨著食物安全重要性增加，影響經濟家禽(poultry)生產的病原體作為全球食物供應和人類貧窮的嚴重威脅再次出現。艾美球蟲屬物種寄生物具有全球地方性動物病分布，而且可以在所有家畜，最值得注意的是家禽中引起嚴重的腸病，其中估計每年費用在全世界超過20億英鎊。英國家禽業(大約7.8億只烤子雞(broiler))的球蟲感染總費用估計為每年至少4200萬英鎊，其中74%是由于對重量增加和飼料轉化的亞臨床影響所致，而24%是商業禽類的預防和療法的成本(Williams, 1999;A compartmentalized model for theestimation of the cost of coccidiosis to the world’ s poultry productionindustry.1nternational Journal for Parasitology, 1209-1229)。至今，集中飼養的家禽中艾美球蟲屬物種感染主要通過預防性喂入藥物(尤其對于烤子雞生產)控制。實際上，英國動物生產中使用的所有化學治療劑的超過三分之一應用于控制艾美球蟲屬(http://www.vmd.gov.uk/),但是抗性是普遍的，而且備選諸如用減毒的寄生物疫苗接種受限于需要包括多種艾美球蟲屬物種的活體型式、生產問題和成本。如此，需要開發用于艾美球蟲屬物種寄生物的新的有成本效益的控制策略。附圖簡述
圖1:推定的頂復門免疫定位蛋白-1 (Immune Mapped Protein, ΙΜΡ-l)同源物。(a)來自巨型艾美球蟲(Eimeria maxima)、柔嫩艾美球蟲(Eimeria tenella)、剛地弓形蟲(XM_002370108)和犬新孢子蟲(Neospora caninum) (NCLIV_000430;GeneDB)的頂P-1 內含子/外顯子結構。(b)使用測序的翻譯編碼序列進行的全長MP-1比對。圖2:巨型艾美球蟲品系(strain)特異性性狀。藥物(羅貝胍(robenidine))和W品系特異性免疫對隨后的H和W品系寄生物復制的影響和選擇下品系特異性AFLP標志物
(SS)在H/W雜合群體中的持續性。
圖3:精細定位與對品系特異性免疫殺傷的易感性相關聯的基因座I。(a)品系特異性AFLP標志物的分布在免疫選擇下在BAC EmaxBAC8fl8間喪失。一致的標志物(Solidmarker)在選擇下的六個回交世代后保持缺乏。(b)通過免疫選擇的回交世代1_6回收品系特異性標志物，數字代表標志物第一次再現的世代，_=沒有再現。(c)基因座I內鑒定的轉錄序列(ST=推定的磷酸鹽轉運蛋白，AMA-1=頂膜抗原I同源物，TEF=推定的轉錄延伸因子)。(d)通過用基因座I內鑒定的個別基因(與模擬免疫對照相比)、以攜帶轉基因的巨型艾美球蟲H呈現的候選物(與無轉基因(T)相比)、重組蛋白(與單獨的硫氧還蛋白(P)相比)或DNA(與僅載體⑶相比)疫苗接種免疫誘導的卵囊輸出百分比降低。nd=未進行。以不同字母標記的柱形圖是顯著不同的(p〈0.05)。圖4:精細定位與對品系特異性免疫殺傷的易感性相關聯的基因座5。(a)品系特異性AFLP標志物的分布在免疫選擇下在BAC EmaxBAC2k08間喪失。(b)回收通過免疫選擇的回交世代得到的品系特異性標志物揭示整個BAC編碼區在所有世代中仍然是缺乏的(_)。(c)為了通過BAC重組的破壞而選擇的區域1-8。(d)靶向破壞對W品系衍生的EmaxBAC2k08在通過瞬時轉染后的異源巨型艾美球蟲H品系投遞時賦予交叉保護性免疫的能力的影響:與未修飾的親本BAC相比每種重組BAC保留保護能力。(e-f)相對熒光(rf)，其顯示cDNA與BAC-覆瓦式NimbleGen陣列的雜交，所述BAC-覆瓦式NimbleGen陣列覆蓋基因座5中與較小的Not I/Sfi I BAC消化產物對應的約22.4Kb。(e)源自子孢子(藍色)和第一代裂殖子(紅色)生活史階段的cDNA。(f)使用源自從感染后6 (藍色)和16(紅色)小時的雞腸組織扣除未感染的雞腸組織的cDNA通過rf計算的概況。(g)基因座5內鑒定的轉錄序列(重復=重復區，根據靶向生活史階段沒有轉錄的證據，CRIP=推定的親環蛋白-RNA相互作用蛋白，RP=相關蛋白。(h)在攻擊用攜帶以基因組LD-PCR擴增子呈現的W品系轉基因的巨型艾美球蟲H免疫的禽后每只禽的平均總巨型艾美球蟲W品系卵囊輸出。Cl=對照，無轉基因；C2=對照，未免疫。用不同字母標記的柱形圖是顯著不同的(p〈0.05)。圖5:未免疫的(紅色，實線)和先前感染的(同源物感染；藍色，虛線)雞中的體內胞內巨型艾美球蟲W品系復制。對覆蓋麥克爾憩室的8cm腸切片測定的總寄生物基因組數目。區域A突出顯示了經免 疫的和未免疫的宿主之間在寄生物復制方面的第一顯著差異。重要的是，雖然qPCR檢出的寄生物基因組數目不等于可見的寄生物，但是沒有看出免疫宿主中20hpi后檢出的殘留寄生物基因組復制，并且不太可能代表活的寄生物。如此，區域A和B代表必須發生了免疫殺傷的時期。*p〈0.01, #p〈0.005, ANOVA+Tukey氏事后。圖6:與硫氧還蛋白、PBS和無免疫(分別為蛋白質、免疫和環境對照)相比，通過用重組EmMP-1疫苗接種誘導的抗球蟲保護。用不同字母標記的柱形圖是顯著不同的(ρ〈0.01, ANOVA+Tukey 氏事后)。圖7:PCR確認通過8個選擇區域(1-8)的重組實現的靶向EmaxBAC2k08破壞。PCR測定法確認重組盒的靶向插入(敲除:k/o)和未修飾的BAC拷貝(野生型:wt)的缺乏。+=重組的候選BAC，-=未修飾的初始BAC。圖8:經Not I/Sfi I消化的未修飾的EmaxBAC2k08(第I道)和為了破壞區域1-8而重組的EmaxBAC2k08 (第2_9道)的PFGE解析。發明概述本發明人已經鑒定出兩種真正保護性的抗球蟲疫苗候選物。艾美球蟲中鑒定的候選物具有相關頂復門寄生物的基因組內編碼的容易鑒定的同源物。如此，在第一個方面，本發明提供了包含如以SEQ ID N0.1顯示的氨基酸序列的多肽或其同源物(諸如那些在圖1中顯示的)或片段。在第二個方面，本發明提供了能夠編碼依照本發明的第一個方面的多肽的核酸。核酸序列可以包含以SEQ ID N0.2，6，7或8顯示的核苷酸序列。在第三個方面，本發明提供了包含依照本發明的第二個方面的核酸的載體。在第四個方面，提供了依照本發明的前三方面中任一項的多肽、核酸或載體，其用于治療和/或預防與頂復門寄生物有關的疾病。在第五個方面，本發明提供了一種用于治療和/或預防與頂復門寄生物有關的疾病的疫苗，其包含:⑴如以SEQ ID N0.1顯示的氨基酸序列或其同源物或片段；和/或(ii)能夠編碼如以SEQ ID N0.1顯示的氨基酸序列或其同源物或片段的核酸序列。頂復門寄生物可以選自但不限于下組物種:艾美球蟲屬(Eimeria)、新孢子蟲屬(Neospora)、痕原蟲屬(Plasmodium)、泰勒蟲屬(Theileria)和弓形體屬(Toxoplasma)。疾病可以選自但不限于下列各項:巴貝西蟲病(babesiosis)、球蟲病(coccidiosis)、隱抱子蟲病(cryptosporidiosis)、環抱子蟲病(cyclosporiasis)、等抱球蟲病(isosporiasis)、痕疾(malaria)和弓形體病(toxoplasmosis)。疫苗可以包含與來自頂復門寄生物的不同物種的SEQ ID N0.1同源物對應的多種氨基酸/核酸序列。例如，針對雞艾美球蟲感染的疫苗可以包含與來自兩種或更多種下列物種的SEQID N0.1同源物對應的多種氨基酸/核酸序列:堆形艾美球蟲(Eimeria acervulina);布氏艾美球蟲(Eimeria brunetti);巨型艾美球蟲；和緩艾美球蟲(Eimeria mitis);毒害艾美球蟲(Eimeria necatrix);早熟艾美球蟲(Eimeria praecox)和柔嫩艾美球蟲。疫苗還可以包含:(i)如以SEQ ID N0.3顯示的氨基酸序列或其同源物或片段；和/或(ii)能夠編碼如以SEQ ID N0.3顯示的氨基酸序列或其同源物或片段的核酸序列。疾病可以是球蟲病。疫苗可以包含與來自不同艾美球蟲物種和品系的SEQ ID N0.3同源物對應的多種
氨基酸/核酸序列。在第六個方面，本發明提供了一種用于在受試者中治療和/或預防疾病的方法，其通過對所述受試者施用有效量的依照本發明第一個方面的多肽、依照本發明第二個方面的核酸、依照本發明第三個方面的任何載體或依照本發明第五個方面的疫苗來進行。受試者可以是脊椎動物受試者。例如，受試者可以是哺乳動物或禽受試者。受試者可以是家禽受試者，諸如矮腳雞、雞、鴨、鵝、珠雞(guinea fowl)、山鵓(partridge)、雉(pheasant)或火雞。發明詳述多肽術語“多肽”以正常的意義使用，指通常通過相鄰氨基酸的α -氨基和羧基基團之間的肽鍵彼此連接的一系列殘基，通常是L-氨基酸。該術語與“蛋白質”是同義的。多肽可以自其天然環境分離，例如， 自頂復門寄生物提取或在頂復門寄生物外部生成。本發明的第一個方面涉及包含下文以SEQ ID N0.1顯示的免疫定位蛋白-1(IMP-1)氨基酸序列的多肽，或其同源物或片段。SEQ ID N0.1:1MP-1 巨型艾美球蟲 Weybridge 品系翻譯的 cDNAMGAACGKSQRAAAAVEPPLSTAEKAEAAAVAAAEHSQKAEEAAEVAAACATKASAEAAVLTGVEPGAEPAAEAEEAPKQNEIEEQQTTTTPAQTHATEEQPAAPPVVPLSDADAQVLAAAEAAKQEAASSNMPRAYLFYACELNEGSLMMQWTTTQITEEDMHAKNLILLASFFPAKHKTVSKSKLTQNGGITYFLQEMKYKWEVffSKVQRQAYYQGWIKFVKAADEMEASFTLHHFAAPAPPAKLFLLHTGPIENKVLPAKEEEPFNVSVFGLAAVTPPSPPYKPGANITPKRFGEIATGAGGAYMQLSRRG⑶AAFDEKEVQKWLAADGLQMKKGEGITLDAAGGYERRSEKKG⑶AAAATAAVEAEPTKVSQD以SEQ ID N0.1顯不的多肽可源自巨型艾美球蟲Weybridge (W)品系。已經顯不了用此蛋白質免疫雞誘導針對W品系攻擊的保護(見實施例)。來自巨型艾美球蟲Houghton⑶品系的相應序列以SEQ ID N0.5顯示。H和W編碼序列之間的比較揭示5種核苷酸多態性，其中兩種產生非同義變化。SEQ ID N0.5:1MP-1巨型艾美球蟲Houghton品系翻譯的cDNAMGAACGKSQRAAAAVEPPLSTAEKAEAAAVAAAEHSQKAEEAAEVAAACATKASAEAAVLTGVEPGAEPAAEAEEAPKQNEIEEQQTTTSPAQTHATEEQPAAPPVVPLSDADAQVLMAEAAKQEAASSNMPRAYLFYACELNEGSLMMQWTTTQITEEDMHAKNLILLASFVPAKHKTVSKSKLTQNGGITYFLQEMKYKWEVffSKVQRQAYYQGffIKFVKAADEMEASFTLHHFAAPAPPAKLFLLHTGPIENKVLPAKEEEPFNVSVFGLAAVTPPSPPYKPGANITPKRFGEIATGAGGAYMQLSRRG⑶AAFDEKEVQKWLAADGLQMKKGEGITLDAAGGYERRSEKKG⑶AAAATAAVEAEPTKVSQD容易有可能的是在其它頂復門寄生物基因組內鑒定此蛋白質的同源物。圖1中顯示了來自柔嫩艾美球蟲、剛地弓形蟲和犬新孢子蟲的同源物的氨基酸序列。由于其它基因組和/或轉錄物組資源變得可用，會有可能鑒定來自其它艾美球蟲物種及來自其它頂復門的品系和物種特異性同源物序列。
例如，可以使用基因組或cDNA序列，接著進行RT-PCR、克隆和測序通過tBLASTx序列分析鑒定同源物。其它方法包括基于整個或部分分子的結構特征的搜索。本發明的疫苗也可以包含具有以SEQ ID N0.3顯示的氨基酸序列的多肽或其同源物或片段。以SEQ ID N0.3顯示的多肽是巨型艾美球蟲W品系頂膜抗原-1 (AMA-1)。也已經在別處鑒定出來自其它頂復門寄生物的AMA-1同源物(即Richie和Saul, 2002，Progress andchallenges for malaria vaccines, Nature 415:694-701; Zhang等，2010，2010，Neosporacaninum:Application of apical membrane antigen I encapsulated in theoligomannose-coated liposomes for reduction of offspring mortality frominfection in BALB/c mice, Exp Parasitol 125:130-136)。SEQ ID N0.3:AMA-1 巨型艾美球蟲 Weybridge 品系翻譯的 cDNAMCGLRAAFTEAVCLGLLSLGSTVVQGIKDKVHQGHTEAAATAAAGNLSAELHAALHQPNDNPFLVPPLSDFMDRFNIPKVHGSGIYVDLG⑶KEVDGRTYREPSGLCPVFGKTIVLYQPQNNPNYKNDFLDDIPTKQQSDAVGHPLPGGFNNSFKMPDKSPYSPMSAQKLNSYKQLKANTPMGKCAEMSFMTTAGKNSSYRYPWVYDTKRDLCYFLYLPVQRLMGERYCSVDGKPDGMTWYCFEPHKALDSRPELVYGSAYVGRDPDYWETHCPNKAVKDAVFGVWVSGRCTEHKHLDGAKKEKVNSKAECWSLAFENPEVASDHPVTEDENFGTYGYFFPSTEPNQPKSGGEGVNFASFYPGSMECWLSGEIPTCLVPLEGAAAFTALGSLEEETAPCTDSFPQTKTPCDRNTCTQIVATCVSGTLVSEEVPCSPEDGTRCEGGFPKGVMIGLAAAGGILLLLLGGGGFLLYRSRMRPAAKGDEATRSDYVQEEAAANRRKQRQSDLVQQAEPSFWEEAEADEAETGESTHVLVDQDY多肽是或包含野生型蛋白質(例如，具有以SEQ ID N0.5顯示的序列的蛋白質)或其突變體、變體、同源物或片段的至少一部分。術語“野生型”用于指具有與天然蛋白質(即，來自頂復門寄生物的蛋白質)同源的一級氨基酸序列的多肽。術語“突變體”用于指具有與野生型序列相差一處或多處氨基酸添加、取代或缺失的一級氨基酸序列的多肽。突變體可以天然出現，或者可以人工創建(例如通過定點誘變進行)。突變體可以具有與野生型序列的至少80%序列同一性和/或多至且包括20處氨基酸(20amino acid)取代、缺失或插入。術語“變體”用于指與野生型序列不同的天然存在的多肽。變體可以存在于同一寄生物品系內(即，若存在著超過一種蛋白質同種型)或者可以存在于不同品系內。變體可以具有與野生型序列的至少80%序列同一性和/或多至且包括20處氨基酸取代、缺失或插入。這里，術語“同源物”意指可源自另一品系或物種的多肽，其與初始蛋白質實施相同的功能，和/或可以預測為就其序列而言共享共同的進化史。同源蛋白質(或其片段)可以通過序列同源性(包括至關重要的殘基的位置)、結構、生物物理、生物化學或功能性同源性來鑒定。同源序列可以通過保守推定結構或氨基酸序列間的相似性，使得使用BLASTp比較的比對在全序列的相當一部分間產生le-20或更小的E值。
同源序列可以通過氨基酸序列間的相似性或保守的推定結構來鑒定。例如，對于惡性痕原蟲(Plasmodium falciparum)和剛地弓形蟲特異性的SEQ ID N0.3的功能確認同源物僅共享29%氨基酸同源性，但是在相似的序列位置中保留相同數目的半胱氨酸殘基，并且必然可以預測為具有保守的蛋白質結構。通常，同源物會包含一些至關重要的位點(例如，活性位點)或結構保守。同一性或相似性比較可以用眼，或者更通常，借助于容易可用的序列比較程序來進行。這些商品化計算機程序，諸如GCG Wisconsin Bestfit包；BLAST和FASTA包；和GENEffORKS比較工具套件可以計算兩種以上序列間的％同一性。術語“片段”指多肽包含野生型氨基酸序列的部分。它可以包含序列的一個或多個大的連續部分或多個小的部分。多肽也可以包含序列的其它元件，例如，它可以是與另一種蛋白質的融合蛋白。片段可以包含野生型序列的至少50%，更優選地至少65%，最優選地至少80%。片段可以是或包含主題序列的亞單位。就功能而言，突變體、變體、同源物或片段應當能夠在受試者中誘導針對隨后用相關頂復門寄生物攻擊的保護性免疫應答。核酸在第二個方面，本發明提供了能夠編碼包含以SEQ ID N0.1顯示的氨基酸序列的多肽的核酸。核酸可以是任何合適類型的核苷酸序列，諸如合成的RNA/DNA序列、重組RNA/DNA序列(即，通過使用重組DNA技術制備)、cDNA序列或部分基因組DNA序列。核酸可以自其天然環境分離，例如，自頂復門寄生物提取或在頂復門寄生物外部生成。
核酸可以包含以SEQ ID N0.2顯示的核苷酸序列的編碼部分。SEQ ID N0.2:1MP-1 巨型艾美球蟲 Weybridge 品系 cDNAgcacttttcgtgcattaaatcgctacaattaatttggtagcccgttttttcttctttttcctcttctttggctgtactgtgagggtgggttctcccgcgtaggctcatgcagctgttcatactggtctaggcagtgtgcgcctgtgcacgttttgcaagaggatgcatgcgtttgcgtttcttcttttttctgacttttaactctttattacgcgaaacccaaaccacctttactgtctcatccccccttgctgcctgaggATGGGGGCCGCTTGCGGGAAATCGCAGCGCGCCGCCGCCGCTGTTGAACCCCCCCTTTCTACCGCGGAGAAGGCAGAAGCAGCAGCAGTAGCAGCAGCAGAACATAGCCAGAAAGCAGAaGAAGCAGCAGAAGTTGCTGCTGCTTGTGCGACGAAAGCTTCCGCAGAGGCTGCTGTCCTTACAGGGGTaGAGCCAGGGGCAGAGCCTGCTGCTGAGGCAGAAGAGGCCCCAAAACAAAATGAAATAGAAGAGCAGCAAACAACAACAACACCCGCACAAACGCATGCAACAGAAGAGCAGCCAGCAGCTCCTCCTGTTGTTCCCTTGAGCGATGCAGATGCACAAGTTCTTGCTGCAGCAGAAGCAGCAAAGCAGGAAGCAGCTAGtAGCAATATGCCTAGGGCGTATTTGTTTTATGCATGCGAACTCAATGAAGGATCCTTAATGATGCAATGGACTACTACACAAATAACGGAAGAAGATATGCATGCAAAGAATTTAATTCTTCTTGCCTCCTTTTTTCCTGCTAAACATAAAACTGTTTCTAAGAGCAAACTTACACAAAATGGAGGTATTACCTACTTCCTGCAGGAGATGAAGTACAAGTGGGAGGTTTGGAGCAAAGTGCAGAGACAGGCATATTATCAGGGTTGGATAAAATTCGTCAAAGCAGCAGATGAGATGGAGGCGTCATTCACCTTACACCACTTTGCTGCTCCTGCGCCACCCGCCAAACTTTTCTTACTGCATACAGGACCTATTGAGAATAAGGTACTGCCTGCTAAGGAAGAAGAACCATTCAATGTCTCCGTCTTCGGTCTTGCTGCGGTGACGCCGCCGTCGCCTCCTTACAAGCCAGGAGCGAACATTACACCAAAGAGATTCGGCGAAATCGCCACCGGAGCAGGTGGGGCTTACATGCAGCTTTCCCGCAGAGGCGGTGATGCAGCATTTGATGAGAAAGAAGTTCAGAAGTGGCTGGCGGCTGACGGTCTTCAAATGAAAAAGGGAGAAGGAATTACATTGGATGCAGCAGGCGGTTATGAACGAAGATCTGAGAAAAAGGGGGGCGATGCTGCAGCTGCAACTGCAGCCGTAGAAGCAGAGCCCACTAAAGTGTCGCAAGATTGA 起始密碼子是加下劃線的，而終止密碼子以粗體顯示。
以SEQ ID N0.2顯示的核酸編碼MP-1，并且可源自巨型艾美球蟲Weybridge (W)品系。來自艾美球蟲Houghton (H)品系的相應序列以SEQ ID N0.6顯示。H和W編碼序列之間的比較揭示5種核苷酸多態性，其中兩種產生非同義變化。SEQ ID N0.6:1MP-1 巨型艾美球蟲 Houghton 品系 cDNAATGGGGGCCGCTTGCGGGAAATCGCAGCGCGCCGCCGCCGCTGTTGAACCCCCCCTTTCTACCGCGGAGAAGGCAGAAGCAGCAGCAGTAGCAGCAGCAGAACATAGCCAGAAAGCAGAGGAAGCAGCAGAAGTTGCTGCTGCTTGTGCGACGAAAGCTTCCGCAGAGGCTGCTGTCCTTACAGGGGTCGAGCCAGGGGCAGAGCCTGCTGCTGAGGCAGAAGAGGCCCCAAAACAAAATGAAATAGAAGAGCAGCAAACAACAACATCACCCGCACAAACGCATGCAACAGAAGAGCAGCCAGCAGCTCCTCCTGTTGTTCCCTTGAGCGATGCAGATGCACAAGTTCTTGCTGCAGCAGAAGCAGCAAAGCAGGAAGCAGCTAGCAGCAATATGCCTAGGGCGTATTTGTTTTATGCATGCGAACTCAATGAAGGATCCTTAATGATGCAATGGACTACTACACAAATAACGGAAGAAGATATGCATGCAAAGAATTTAATTCTTCTTGCCTCCTTTGTTCCTGCTAAACATAAAACTGTTTCTAAGAGCAAACTTACACAAAATGGAGGTATTACCTACTTCCTGCAGGAGATGAAGTACAAGTGGGAGGTTTGGAGCAAAGTGCAGAGACAGGCATATTATCAGGGTTGGATAAAATTCGTCAAAGCAGCAGATGAGATGGAGGCGTCATTCACCTTACACCACTTTGCTGCTCCTGCGCCACCCGCCAAACTTTTCTTACTGCATACAGGACCTATTGAGAATAAGGTACTGCCTGCTAAGGAAGAAGAACCATTCAATGTCTCCGTCTTCGGTCTTGCTGCGGTGACGCCGCCGTCGCCTCCTTACAAGCCAGGAGCGAACATTACACCAAAGAGATTCGGCGAAATCGCCACCGGAGCAGGTGGGGCTTACATGCAGCTTTCCCGCAGAGGCGGTGATGCAGCATTTGATGAGAAAGAAGTTCAGAAGTGGCTGGCGGCTGACGGT
CTTCAAATGAAAAAGGGAGAAGGAATTACATTGGATGCAGCAGGCGGTTATGAACGAAGATCTGAGAAAAAGGGGGG
CGATGCTGCAGCTGCAACTGCAGCCGTAGAAGCAGAGCCCACTAAAGTGTCGCAAGATTGA來自剛地弓形蟲的相應序列以SEQ ID N0.7顯示。SEQ ID N0.7:1MP-1 剛地弓形蟲 cDNAATGGGAACCGTTTGCACGAAGAACAGAGTGGACACAACCAAGACAGCTGGCACCTCGAAAGCAACAGCTGACGAGGCTGAGCGAACAGTCGCTGTTGAGGAGGGTCTTAAAGCAGCCAAGGAAATTGAGGCTTTGACAGGTGCTCCCGCTGCGGTTACCAGGGACGGAGAAGTTATCGCAGCGATCGATGAAGAAGATCGGAAGCAACTGAATGAAGAACGAACGAACAGCGTCGATGAAGCAGCTGCTGCTGTGGTCCAGCAGTCTCCGGAACCGGCTGCGGTAATTCGCAAGGAAGAAGTCGTTACAGTAAAGAGCGATAATGGAGACACTCGTGTCCATGTAGCTGTTGTGGAAGCGGTTATCAGAAGTGATCTGCCGGATCTTCCTGATCATGTCGAGAATGTTTCGGCTGAGGATCTGGAACTGCTTCGTCAGGCTCGCAAGCAGGTGATGGCGGTAGGCGGGCCTGTTGTTACGGACATCACGAAGTCGGATCAGCAGACCTCCCAAATCAACAAACCAAGTGCGTCGGCTTACGGGTACCTTCTGTTTTTGCCTGACAAGGGCGGAAGTCTGACCCTTCTTTGGTCGAAGCAACAGCTCTCTGCAGAGGAGGAGGAGAACGCTGGCAAAGTCCTCCTGTCTTTTGTTCCTGCTCTCCATAAAAACGTCCCTCGGATGAAATATGAAAAGAAGGGTGGGAAAACGGAGCTGCTGACCGACATCGAAGCGAAGTGGAGCGTGTGGAAGGTGAATGAGAAGCAGAGGTACTACGCGGCATGGGCTACTGTTCTGAAGGCAGCTAACGAATACGAGGCGAAAGTGACTGTCAGGGAGTGGACTGAAGAAATGCCTCCACAGGTGTTTATTTCTCTTCTTCATGTTGGACTGGTTGGCAACAAGGTGGCGTCGCTCCCGCGGGGCCATCCAGTGGATCTTGGCGTTTTCTCGCACATCGCCGTTGTTCCTGCAGACAAAAACAAAGAGTTCAAAGACGGTTTCAATCTTTCAGAGAAGAAGTTCCAAGACTTAGCAGTGGCAGCAGGCGGCGCTGATCAGCGATTTGCTCCCAGAGGAATCGCCACGGCGTTGGGTCAGGATGATGTGGTAGCTTGGATGAAAGAAGACGGTATTGATATTAGTAAGAACGAAAGGGGATTAACCCTTGATGGCCGAATGGTGGACAGAGCAAATGCGTAG來自犬新孢子蟲的相應序列以SEQ ID N0.8顯示。SEQ ID N0.8:1MP-1 犬新孢子蟲 cDNA
ATGGGAGGCGTTTGCTCTAAAAGCACAGCGGATTCATCCAAGGGTCGTAACAGTGAGTCGAAAGCAACCGAGGCTGAGCGGGCGGTTGCAGTGGCGGAGGGTCTTCAAACCGCGCAGAAAATTGAGGCTGTGACAGGCGCTCCCGCCGCTGTTACCGAGGACGGAGACGTTATCGTGGCCGTAGACGAAGAAGATAAGAAATCGATAAAGGGCGAAAAAACGAACATTGTTGACGAAGCAGCAGCTGCTGTGGTCTCACGTTCTCCCGAACCGGCTGCGGTGATTCGCAAAGAAGAGGTCGTCACAGAAGAAGGCAAAAATGGAGACACCCGAGTCCACGTATCTGTTGTGGAAGCAGTGATCAGTAGCGATCTGGCTGATCTTCCTGAACAAGTCGAGCATGTTTCGCCCAGGGATTTGGAACTGCTTCGGCAGGCTCGCGAGCAGGTGAAGGCGACTGGGGGACCCGTTATTACGGATGTCACAAACTCAGATGGGCAAAACCGCCGAGAGTACAAACCGAGGGCTTCGGCTTACGGGTACCTTCTGTACGTGCCTGACAAGGGCGGAAGCCTGATCCTCCTTTGGTTGAAGCAAGAGCTTTCTCCTGAGGAGGAGGAGAAAGCTGGCAAAATCCTTGTGTCTTTCGTCCCTGCTCTCCATAAAAGCGTCCCCCGGATGAAGTACGAACAGAAGGGTGGGAAGACGGAGCTTCTGACCGGCATTGAAGACAAATGGAGCGTGTGGAAGGCGAATGAGAAACAAAAGTATTACGCCGCGTGGGCTACGGTTTTAAAGACGTGCGATGAATACGAGGCGACTTTGTGTGTCCGGAACTGGACAGAAGACATGCCTCCGCAGGTTTTTCTTTCTCTTCTCCACGTTGGGCCGGTTGGAAACAAGGTGGCAACCCTTCCACGGGACCGTCCCGTGGACCTCAGCGTTTTCTCGCACGTCGCCGTTGTTCCGGCAGATAAAAGCAAAGAGTTCAAAGAGGGCCACGACCTGTCAGAGAAAAAGTTCCAAGATTTAATAGCGGCAGCAGGAGGCGCCCATCAGCGACTTGTTCCCAGAGGAAACGCAGCGAAGTTGGGTCAGAATGATGTTGTAGCTTGGTTCAAAGAAGATGGAATTGATATTAGTGACAACAAGCAAGGACTCATCCTCGACGGCAAGAAATAG
本發明的疫苗還可以包含如下的核酸序列，其能夠編碼具有以SEQ ID N0.3顯示的氨基酸序列的多肽或其同源物或片段。以SEQ ID N0.3顯示的多肽是巨型艾美球蟲W品系頂膜抗原_1 (AMA-1)。核酸可以包含以SEQ ID N0.4給出的核苷酸序列的編碼部分。SEQ ID N0.4: AMA-1 巨型艾美球蟲 Weybridge 品系 cDNACGCGTTGTTTTCCCTCTGCTTTTTCATTTGAAGTGCTTTTCTGCGAAGGGGATTTAATTCATAACTCTTTCGACAACTCGCAAGTCCCTTTTTTGCTTCTTCTTCAGGAGTCTGGAAACCTGTGCGTCGAGGCACAGCCGGAACACGTGCAAGGGAGAACGAATCAACAACACCTCGTTTACGTTGCTCTCTCCGTTGGTTGAGTGGGGCTACTTAGTCTCTGCTTGTTGCTTATTCGCCATTAGTTCGGACATATTCAGGCTTTTTCACGCCTCCTTGTACCAGCAGGCAGGTGGAGGCCAGCTGTCTCTGGCCTCCTTGCTTCTTGCATCGGCTTTTGCCTTTAAGGCATCCCTTGATCTCTTTGAATCTCGTCATCACGGTGTTTTCCTTTATTTCATCTTTATTTGTTTTCAAGATGTGTGGATTGCGCGCTGCGTTTACGGAGGCGGTTTGCTTGGGCCTGCTTTCGTTAGGCTCCACTGTAGTGCAGGGAATCAAAGATAAAGTTCACCAGGGTCACACAGAAGCAGCAGCAACAGCAGCAGCAGGAAATCTGTCGGCAGAGCTCCATGCAGCGCTTCACCAGCCCAACGATAACCCCTTTCTAGTGCCTCCTCTCAGCGATTTCATGGATCGATTTAACATCCCGAAGGTCCACGGTAGCGGTATTTACGTAGATCTAGGAGGCGACAAGGAAGTGGACGGGCGGACATACAGGGAACCGAGCGGCCTCTGCCCTGTCTTTGGCAAGACGATTGTGTTGTACCAGCCGCAAAACAACCCTAATTATAAGAATGACTTTCTTGACGACATACCCACCAAACAGCAGTCCGATGCCGTAGGACATCCTCTTCCTGGCGGGTTCAATAACAGCTTCAAAATGCCAGACAAAAGCCCTTACTCTCCGATGAGTGCACAGAAGTTAAACAGCTATAAACAGCTGAAGGCGAATACACCGATGGGGAAGTGTGCAGAGATGAGTTTTATGACGACTGCTGGAAAGAATTCTTCGTATCGGTACCCTTGGGTCTACGATACGAAACGAGACTTGTGCTATTTCCTCTATCTTCCCGTGCAACGGCTCATGGGGGAGCGCTACTGCTCCGTAGATGGCAAACCCGATGGGATGACGTGGTACTGTTTCGAGCCCCACAAAGCGCTAGATAGCCGACCAGAACTCGTTTATGGGTCGGCTTACGTAGGAAGGGACCCAGACTATTGGGAAACACACTGCCCCAACAAGGCCGTGAAGGACGCTGTCTTCGGCGTATGGGTTTCGGGCAGATGCACAGAGCACAAACACCTCGACGGAGCGAAGAAGGAAAAAGTGAATAGCAAAGCCGAGTGCTGGTCGCTGGCATTTGAAAACCCTGAAGTGGCTAGCGACCATCCTGTAACTGAAGACGAAAACTTCGGAACATATGGATATTTTTTCCCCAGTACCGAGCCCAATCAACCCAAGTCGGGCGGCGAGGGTGTGAATTTTGCGAGCTTTTATCCGGGTTCAATGGAGTGCTGGTTATCCGGCGAAATTCCAACTTGTTTGGTGCCTCTTGAGGGGGCGGCTGCATTCACTGCTCTGGGTTCATTAGAGGAAGAGACGGCACCCTGTACAGACAGCTTCCCGCAAACGAAGACCCCTTGCGATCGAAACACCTGCACACAGATCGTCGCTACATGCGTCTCAGGAACTCTCGTGTCAGAAGAAGTACCCTGCTCACCAGAGGACGGCACCCGGTGTGAAGGCGGCTTTCCCAAGGGGGTCATGATAGGTTTGGCAGCAGCGGGAGGCATTTTGTTACTGCTGTTGGGTGGAGGGGGCTTCTTGCTCTATCGTAGCAGAATGAGGCCTGCAGCGAAGGGAGACGAAGCAACTCGTTCAGATTATGTGCAGGAGGAGGCGGCAGCCAACAGACGCAAGCAAAGACAGTCGGATTTAGTGCAGCAGGCAGAGCCTTCCTTCTGGGAGGAGGCAGAGGCTGATGAAGCAGAAACGGGGGAGAGCACCCACGTGTTAGTTGACCAAGATTACTAGTAATAGAGAGGAGAGAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAA起始密碼子是加下劃線的，而終止密碼子以粗體顯示。核酸可以包含以SEQ ID N0.4顯示的序列的編碼部分，或其突變體、變體、同源物或片段。
術語“突變體”用于意指與主題序列相差一處或多處堿基添加、取代或缺失的核苷酸序列。突變體可以天然存在，或者可以人工創建(例如通過定點誘變進行)。突變體可以具有與主題序列的至少80%序列同一性或多至且包含20處突變。突變可以“符合讀碼框”，因此在編碼序列的相當一部分里沒有移碼。術語“變體”用于指與主題序列不同的天然存在的核酸序列。變體可以存在于相同寄生物品系內(例如剪接變體)或者可以存在于不同品系內。變體可以具有與主題序列的至少80%序列同一性或多至且包括20處突變。這里，術語“同源物”意指可源自另一屬、品系或物種的核酸，其編碼與主題蛋白質實施相似功能的蛋白質，和/或可以預測為就其序列而言共享共同進化史。在本上下文中，采取同源序列以包括可以通過直接比較，即在翻譯的或保守的推定蛋白質結構時氨基酸序列間的相似性鑒定的核苷酸序列。例如，對于惡性瘧原蟲和剛地弓形蟲特異性的SEQ ID N0.3的功能確認同源物僅共享29%氨基酸同源性，但是在相似的序列位置中保留相同數目的半胱氨酸殘基，并且必然可以預測為具有保守的蛋白質結構。通常，同源物會與主題氨基酸序列一樣包含一些至關重要的位點(例如，活性位點)或結構保守。載體
本發明還提供了包含本發明核酸的載體。如本文中所使用的，“載體”可以是能夠在宿主細胞中投遞或維持核酸的任何媒介物，并且包括病毒、細菌和真核載體、質粒、裸核酸、與多肽或其它分子復合的核酸或固定化到固相顆粒上的核酸。依照本發明的核酸可以通過病毒或非病毒技術投遞。非感染性投遞系統包括但不限于DNA轉染方法。這里，轉染包括使用非感染性載體來將本發明核酸投遞至靶細胞的方法。典型轉染方法包括電穿孔、核酸生物射彈、脂質介導的轉染、壓縮的核酸介導的轉染、脂質體、免疫脂質體、脂轉染(Iipofectin)、陽離子劑介導的、陽離子面部親水脂分子(cationic facial amphiphile, CFA)、多價陽離子諸如精胺、陽離子脂質或多聚賴氨酸、1，2，_ 二(油酰氧基)-3-(三甲基銨)丙烷(DOTAP)-膽固醇復合物及其組合。非病毒投遞系統還可以包括但不限于細菌投遞系統。先前已經使用細菌作為抗癌劑及作為抗癌藥物的投遞劑。細胞粘附分子是一大類牽涉多種細胞-細胞和細胞-胞外基質(ECM)相互作用的分子，并且可以被許多病原性微生物作為細胞進入受體利用。這些分析可以用于靶向及攝取基因和藥物投遞系統兩者。也可以使用基因槍投遞系統來投遞DNA。病毒投遞系統包括但不限于腺病毒載體、腺伴隨病毒(AAV)載體、皰疹病毒載體、逆轉錄病毒載體、慢病毒載體或桿狀病毒載體、委內瑞拉馬腦炎載體(VEE)、痘病毒諸如:金絲雀痘病毒(Taylor 等 1995Vaccinel3:539-549)、昆蟲痘病毒(Li Y 等 1998XIIthInternational Poxvirus Symposium ρ144.Abstract)、企鵝痘(penguine pox) (Standard等 J Gen Virol.199879:1637-46) alpha 病毒、和基于 alpha 病毒的 DNA 載體。載體的其它例子包括離體投遞系統，其包括但不限于DNA轉染方法，諸如電穿孔、DNA生物射彈、脂質介導的轉染和壓縮DNA介導的轉染。載體可以質粒DNA載體。如本文中所使用的，“質粒”指用于將異源DNA導入細胞中以實現其表達或復制的離散元件。
頂復門寄生物本發明的第四個方面涉及依照本發明的前三個方面中任一項的多肽、核酸或載體，其用于治療和/或預防與頂復門寄生物有關的疾病。頂復門是多種多樣的專性胞內寄生物的門，包括瘧原蟲物種，即瘧疾的原因；及隱孢子蟲(Cryptosporidium)物種、艾美球蟲物種、泰勒蟲物種和剛地弓形蟲，即具有相當大的醫學、動物傳染病和/或農業意義的寄生物。頂復門是具有稱作牽涉穿透宿主細胞的頂復體的結構的原生動物，并且大多數擁有稱作頂質體(apicoplast)的細胞器。大多數成員具有復雜的生活史，牽涉無性和有性繁殖兩者。通常，宿主組織經由寄生物的子體(zoite)形式的主動侵入(active invasion)而受到感染,然后所述寄生物的子體形式在細胞內分裂。最后，細胞脹破，釋放感染新細胞的子體。這可以發生幾次，直至生成配子母體，從而形成配子，其融合以產生新的孢囊(cyst)。然后，關于此基礎形式存在著許多變型，并且許多頂復門具有超過一種宿主。頂復門是一個非常大的且多種多樣的組，具有大大超過5000種命名的物種。存在有感染人的7個屬:巴貝蟲屬(Babesia),隱孢子蟲屬、環孢子蟲屬(Cyclospora)、等孢子球蟲屬(Isospora)、 痕原蟲屬、肉孢子蟲屬(Sarcocystis)和弓形體屬(Toxoplasma)。瘧原蟲屬(作為瘧疾的成因劑)對人類健康具有最大的影響。巴貝蟲屬是一種相對罕見的動物源性感染(zoonotic infection)。其它五種物種均分類為球蟲亞綱(coccidian)。幾種頂復門寄生物就獸醫醫學和農業而言也是重要的。最值得注意的是牛中的巴貝蟲和泰勒蟲以及家禽、牛和綿羊中的艾美球蟲。疫苗疫苗可以用于治療和/或預防疾病。“治療/處理”意指對具有現有疾病的受試者施用疫苗以減輕、減少或改善至少一種與疾病有關的癥狀和/或減緩、降低或阻斷疾病的進展。“預防”意指對尚未染上疾病和/或沒有顯示任何疾病癥狀的受試者施用疫苗以阻止或削弱疾病(例如感染)的原因或者降低或阻止至少一種與疾病有關的癥狀的形成。疫苗可以包含多種氨基酸/核酸序列，其對應于來自頂復門寄生物的不同品系和/或物種的SEQ ID N0.1同源物和/或SEQ ID N0.3同源物。此類“多品系”疫苗可以包含例如來自頂復門寄生物的2-10種品系的同源物。例如，品系可以代表那些最通常與特定地域或地區的發病機制有關的，或者它們可以基于與疾病的新近(例如在去年，或過去5年中)爆發有關的品系。疾病由頂復門生物體引起的疾病包括但不限于巴貝西蟲病(babesiosis)(巴貝蟲物種)和瘧疾(瘧原蟲物種)，及球蟲疾病，包括:球蟲病(艾美球蟲物種)；隱孢子蟲病(cryptosporidiosis)(隱孢子蟲物種)；環孢子蟲病(cyclosporiasis)(環孢子蟲物種)；等孢球蟲病(isosporiasis)(等孢子球蟲物種)；和弓形體病(toxoplasmosis)(剛地弓形蟲)。疾病球蟲病可以由艾美球蟲引起。
球蟲病是現代家畜生產中在經濟上最重要的疾病之一。對于雞，該疾病由7種艾美球蟲物種(通常同時存在幾種物種)的無性和/或有性階段的腸內復制引起，并且雖然集中飼養的家禽中的明顯臨床疾病現在是相對罕見的，但是亞臨床感染是標準。亞臨床感染對家畜生產可以具有大規模經濟影響，這招致降低的生長速率、較差的飼料轉化和對預防用藥控制的需要。球蟲病是一種可以引起家禽肉和蛋生產的嚴重損失的寄生物疾病。寄生物在腸中繁殖，并且引起組織損傷、降低的飼料攝取、自飼料吸收營養物較差、脫水、和失血。禽類也更可能由于繼發性細菌性感染而染病。艾美球蟲感染也可以傾向于由其它病原體，例如產氣莢膜梭菌(Clostridium perfringens)(即雞壞死性腸炎的原因)引起的臨床疾病。雞球蟲物種包括:堆形艾美球蟲；布氏艾美球蟲；巨型艾美球蟲；和緩艾美球蟲；毒害艾美球蟲；早熟艾美球蟲和柔嫩艾美球蟲。火雞球蟲物種包括:腺樣艾美球蟲(Eimeria adenoeides);分散艾美球蟲(Eimeria dispersa);加洛帕沃尼艾美球蟲(Eimeria gallopavonis)和珠雞和緩米堤艾美球蟲(Eimeria meleagrimitis)。牛球蟲物種包括:阿拉巴艾美球蟲(Eimeria alabamensis)、牛艾美球蟲(Eimeriabovis)和朱氏艾美球蟲(Eimeria zuernii)。施用疫苗可以以方便的方式，諸如通過口服、靜脈內、肌肉內、皮下、鼻內、皮內或栓劑途徑或植入(例如，使用緩慢釋放分子)施用。對于禽受試者，可以對孵出的雛雞或雞個別施用疫苗。雖然準確，這些方法對于例如大型烤子雞群可以是昂貴的。用于治療整個雞群的備選方法包括卵內疫苗接種(in ovovaccination)、噴霧接種、提供含有疫苗的凝膠塊或對飲用水或飼料投藥。
通常，內科醫生、獸醫或生產者會確定會最適合于個體受試者或受試者組的實際劑量，并且它可以隨特定受試者的年齡、重量和應答而變化。任選地，組合物可以包含藥學可接受載體、稀釋劑、賦形劑或佐劑。藥用載體、賦形劑或稀釋劑的選擇可以就意圖的施用途徑和標準的藥學實踐而言選擇。作為載體、賦形劑或稀釋劑(或在它們之外)，藥物組合物可以包含任何合適的粘合劑、滑潤劑、懸浮劑、涂層齊U、增溶劑、和其它可以幫助或提高疫苗投遞或免疫原性的載體藥劑。對于所有脊椎動物使用，可以通過注射(例如，皮下或肌肉內)胃腸外施用疫苗。適合于其它施用模式的其它配制劑包括栓劑和口服配制劑。在凍干疫苗組合物的情況下，凍干的材料在施用前可以例如作為懸浮液重建。可以將多肽以中性和鹽形式配制成疫苗。藥學可接受鹽包括酸加成鹽(與多肽的游離氨基基團形成)，且其與無機酸諸如例如，氫氯酸或磷酸，或此類有機酸諸如乙酸、草酸、酒石酸和馬來酸形成。與游離羧基基團形成的鹽也可以源自無機堿，諸如例如，氫氧化鈉、鉀、銨、鈣、或鐵，和有機堿諸如異丙胺、三甲胺、2-乙氨基乙醇、組氨酸和普魯卡因(procaine)。受試者受試者可以是易受頂復門寄生物感染的任何生物體。例如，受試者可以是人。受試者可以是家畜動物，諸如母牛、綿羊、山羊或豬。受試者可以是禽受試者，諸如矮腳雞、雞、鴨、鵝、珠雞、山鶉、雉或火雞。受試者可以是養殖的魚物種。在受試者是禽受試者的情況下，可以對雞(例如，新近孵出的或一天齡的雞)或對成年禽卵內施用疫苗。受試者可以易感頂復門感染。在使用疫苗來治療已建立的感染的情況下，受試者可以已經診斷為對疾病呈陽性和/或顯示一種或多種與感染有關的癥狀。本發明現在會通過實施例進一步描述，所述實施例意圖用來幫助本領域普通技術人員實施本發明，而并不以任何方式意圖限制本發明的范圍。
實施例實施例1:巨型艾美球蟲H和W品系的遺傳表征巨型艾美球蟲Houghton(H)和W品系是遺傳及表型獨特的(圖2)。H品系的特征在于對66ppm飲食用羅貝胍(robenidine)的敏感性及完全逃脫在近交系C白色來亨雞(White Leghorn chicken)中在傳代期間通過對W品系的先前宿主暴露誘導的W品系特異性免疫殺傷。比較而言，對W品系選擇對66ppm羅貝胍的抗性，但是完全易感W品系特異性免疫殺傷。使用擴增片段長度多態性(AFLP)及5種不同酶組合以使限制關聯偏愛最小化來遺傳表征巨型艾美球蟲H和ff品系,這產生總共3，230種遺傳fa志物(見表I) οAFLP 酶組合
權利要求
1.包含如以SEQID N0.1顯示的氨基酸序列的多肽或其同源物或片段。
2.—種核酸，其能夠編碼依照權利要求1的多肽。
3.依照權利要求2的核酸序列，其包含以SEQID N0.2，6，7或8顯示的核苷酸序列的編碼部分。
4.一種載體,其包含依照權利要求2或3的核酸。
5.依照前述權利要求中任一項的多肽、核酸或載體，其用于治療和/或預防與頂復門寄生物有關的疾病。
6.一種用于治療和/或預防與頂復門寄生物有關的疾病的疫苗，其包含: (i)如以SEQ ID N0.1顯示的氨基酸序列或其同源物或片段；和/或 ( )能夠編碼如以SEQ ID N0.1顯示的氨基酸序列或其同源物或片段的核酸序列。
7.依照權利要求6的疫苗，其中所述頂復門寄生物可以選自但不限于下組物種:巴貝蟲屬(Babesia)、貝諾孢子蟲屬(Besnoitia)、隱孢子蟲屬(Cryptosporidium)、環孢子蟲屬(Cyclospora)、艾美球蟲屬(Eimeria)、等孢子球蟲屬(Isospora)、新孢子蟲屬(Neospora)、痕原蟲屬(Plasmodium)、泰勒蟲屬(Theileria)和弓形體屬(Toxoplasma)。
8.依照權利要求6的疫苗，其中所述疾病可以選自但不限于下列各項:巴貝西蟲病(babesiosis)、球蟲病(coccidiosis)、隱抱子蟲病(cryptosporidiosis)、環抱子蟲病(cycl osporiasis)、等抱球蟲病(isosporiasis)、痕疾(malaria)和弓形體病(toxoplasmosis)。
9.依照權利要求5至8中任一項的疫苗，其包含與來自頂復門寄生物的不同物種或品系的SEQ ID N0.1同源物對應的多種氨基酸/核酸序列。
10.依照權利要求6至9中任一項的疫苗，其用于治療和/或預防與艾美球蟲屬物種的寄生物有關的疾病，所述疫苗還包含: (i)如以SEQ ID N0.3顯示的氨基酸序列或其同源物或片段；和/或 ( )能夠編碼如以SEQ ID N0.3顯示的氨基酸序列或其同源物或片段的核酸序列。
11.依照權利要求10的疫苗，其中所述疾病是球蟲病。
12.依照權利要求10或11的疫苗，其包含與來自不同艾美球蟲屬品系的SEQID N0.3同源物對應的多種氨基酸/核酸序列。
13.一種用于在受試者中治療和/或預防疾病的方法，其通過對所述受試者施用有效量的依照權利要求1的多肽、依照權利要求2或3的核酸、依照權利要求4的載體或依照權利要求6至12中任一項的疫苗來進行。
14.依照權利要求13的方法，其中所述受試者是家禽受試者。
全文摘要
本發明提供了包含如以SEQ ID No.1顯示的氨基酸序列的多肽或其同源物或片段、能夠編碼此類多肽的核酸及包含此類多肽/核酸的疫苗。疫苗可以用于治療和/或預防與頂復門寄生物有關的疾病。
文檔編號C07K14/455GK103201283SQ201180047928
公開日2013年7月10日 申請日期2011年8月2日 優先權日2010年8月2日
發明者D.布萊克, A.史密斯, M.雪莉 申請人:皮爾布萊特研究所