針對組織因子的人抗體藥物綴合物的制作方法

專利名稱：針對組織因子的人抗體藥物綴合物的制作方法
技術領域：
本發明涉及抗體藥物綴合物(ADC)，其中抗體結合組織因子上的表位。這樣的ADC對治療癌癥、炎癥和血管疾病尤其有用。
背景技術：
組織因子(TF)，亦稱為促凝血酶原激酶、因子III或⑶142，是一種從酶原凝血酶原起始凝血酶形成所必需的存在于內皮下組織、血小板和白細胞的蛋白。凝血酶形成最終導致血液凝固。組織因子能夠使得細胞起始血液凝固級聯，且其作為凝血因子VII (FVII)(一種絲氨酸蛋白酶)的高親和力受體起作用。所產生的復合物通過特定受限的蛋白水解提供負責起始凝血蛋白酶級聯的催化事件。與作為非功能性前體循環的這些蛋白酶級聯的其他輔因子不同，當該因子在細胞表面上表達時，其是全功能的強力抑制劑。組織因子是絲氨酸蛋白酶因子Vila (FVIIa)的細胞表面受體。FVIIa與組織因子的結合開始細胞內信號轉導過程，所述信號轉導功能在血管生成中起作用。然而血管生成是生長和發育以及傷口愈合中的正常過程，其亦是腫瘤從休眠狀態轉變為惡性狀態的基本步驟:當癌細胞獲得產生參與血管生成的蛋白(所謂的血管生成生長因子)的能力時，這些蛋白由腫瘤釋放進入周圍組織，并刺激新血管從現有的健康血管向腫瘤生長到腫瘤中。一旦新血管進入腫瘤，它可迅速擴大其大小并侵襲局部組織和器官。通過新血管，癌細胞可進一步逃脫到循環中并在其他器官暫住以形成新腫瘤(轉移)。此外，TF在炎癥中起作用。TF的作用被假定為由血液凝固所介導(A.J.Chu:“Tissue factor mediates inf Iammation (組織因子介導炎癥)”載于 Archives ofbiochemistry and biophysics, 2005,第 440 卷，第 2 號，第 123-132 頁)。因此,例如通過單克隆抗-TF抗體抑制TF在中斷凝血-炎癥循環中重要，其不僅有助于抗炎而且促進 血管疾病。在許多類型的癌癥中觀察到TF表達且其與更侵略性的疾病相關。此外，人TF亦以可溶性可變剪接形式(asHTF)存在。最近發現asHTF促進腫瘤生長(Hobbs等，2007Thrombosis Res.120(2) S13-S21)。雖然已取得許多進展，但是仍需治療嚴重疾病的改進方法，例如基于治療性抗體的癌癥、炎癥和血管疾病的改進治療。因此，本發明的目的在于提供高度特異和有效的抗-TF抗體藥物綴合物，尤其提供用于治療癌癥的用途。發明概述
本發明涉及新的抗-TF抗體藥物綴合物，其對治療癌癥、炎癥和血管疾病有用。本發明的抗-TF抗體藥物綴合物在殺死表達組織因子(TF)的細胞時是高度有效的。此外，抗-TF抗體藥物綴合物的益處在于具有有限的或無凝血抑制。附圖簡述


圖1:本發明的抗體序列的比對。SEQ ID NO在序列右邊的括號中列出。
根據Kabat的⑶R1XDR2和⑶R3如下所示:斜體并加粗的序列代表⑶Rl區，下劃線的序列代表⑶R2區，加粗的序列代表⑶R3區。圖2:1gG4 序列(SEQ ID NO: 81-82)
SEQ ID NO: 81:人IgG4的野生型CH區的氨基酸序列。斜體的序列代表CHl區，高亮的序列代表鉸鏈區，普通的序列代表CH2區和下劃線序列代表CH3區。SEQ ID NO: 82:人IgG4的無鉸鏈CH區的氨基酸序列。圖3:抗-TF HuMab與TF的細胞外結構域的結合。結合是通過ELISA測定的。EC5tl值是3次實驗的平均值。圖4:抗-TF HuMab與MDA-MD-231細胞上的膜結合的TF的結合。結合是通過FACS分析測定的，將抗體分成a)、b)和c)中所示的3組，亦參見WO 10/066803，其中抗體被分為交叉封閉組。圖5 =FVIIa結合被抗_TF HuMab抑制，是通過FACS分析測量的。顯示的數據是在增加濃度的抗-TF HuMab存在下FVIIa結合的平均熒光強度(MFI)。在抗-TF HuMab不存在下100 nM FVIIa的MFI是149,942。顯示一個代表性的實驗。圖6:通過抗-K -ETAj -綴合的抗_TF HuMab劑量依賴性地誘導細胞殺死。圖7:抗-TF HuMab和ADC與TF細胞外結構域的重組蛋白的結合，由ELISA測定。顯示一個代表性的實驗。圖8:通過抗-TF ADC體外劑量依賴性地誘導細胞殺死。對于各細胞系:A431 (a)、HPAF-1I (b)和NC1-H441 (c)，均顯示一個代表性的實驗。顯示的數據是用抗-TF ADC處理的細胞的一式兩份孔的百分比存活土 S.E.M.。圖9:抗-TF ADC在治療性處理SCID小鼠中的A431和HPAF-1I異種移植物時的體內功效。將建立A431 (A)或HPAF-1I (B)腫瘤的小鼠用抗-TF ADC處理。顯示的數據是平均腫瘤體積土 S.E.Μ./組(η = 7只小鼠/組)。圖10:ADC與未綴合的IgGl的SDS-PAGE分析以測試穩定性。在研究開始時(t=0) (a-d)或在5 °C和〈-65 °C儲存3個月后(e_h)，通過SDS-PAGE分析樣品。(a,
c)泳道1，9:分子量(MW)標志物，泳道2 =IgGl內部對照，泳道3:HuMab-TF-098,泳道 4 =HuMab-TF -098-vcMMAE,泳道 5 =HuMab-TF-O98-mcMMAF,泳道 6:HuMab-TF-OlI，泳道 7 =HuMab-TF-OlΙ-vcMMAE,泳道 8:HuMab-TFicMMAF。(b, d)泳道 1，9，10:MW 標志物，泳道 2 =IgGl 內部對照，泳道 3 =HuMab-TF-1ll,泳道 4 =HuMab-TF-111-vcMMAE,泳道 5 =HuMab-TF-1 I Ι-mcMMAF,泳道 6:1gGl_bl2，泳道 7:IgGl-bl2-vcMMAE,泳道 8:1gGl-bl2-mcMMAF0 (e, g)泳道 1，11:MW標志物，泳道2:1gGl 內部對照，泳道3:在〈-65°C
3個月后的 HuMab-TF-098-vcMMAE，泳道 4:在 5 °C 3 個月后的 HuMab-TF-098-vcMMAE，泳道5:在〈-65 °C 3個月后的HuMab-TF-098-mcMMAF，泳道6:在5 °C 3個月后的 HuMab-TF-098-mcMMAF，泳道 7:在〈-65 °C 3 個月后的 HuMab-TF-Ol1-vcMMAE，泳道8:在5 °C 3個月后的H uMab-TF-Ol1-vcMMAE，泳道9:在〈-65 °C 3個月后的 HuMab-TF-Ol 1-mcMMAF，泳道 10:在 5 °C 3 個月后的 HuMab-TF-Ol 1-mcMMAF。(f,
h)泳道1，11，12:MW標志物，泳道2 =IgGl內部對照，泳道3:在〈-65 °C 3個月后的 HuMab-TF-111-vcMMAE，泳道 4:在 5 °C 3 個月后的 HuMab-TF-l 11-vcMMAE，泳道5:在〈-65 °C 3個月后的HuMab-TF-111-mcMMAF，泳道6:在5 °C 3個月后的HuMab-TF-111-mcMMAF，泳道 7:在〈-65°C 3 個月后的 IgGl-bl2_vcMMAE，泳道 8:在 5°C 3個月后的 IgGl-bl2-vcMMAE，泳道 9:在〈-65°C 3 個月后的 IgGl-bl2_mcMMAF，泳道 10:在50C 3 個月后的 IgGl-bl2-mcMMAF。對于非還原條件，顯示不同的重鏈(H)-輕鏈(L)組合的大小:148 kDa (HHLL)、125 kDa (HHL)、99 kDa (HH)、67 kDa (HL),51 kDa (H)和 25 kDa (L)。圖 11:HuMab-TF-098-vcMMAE (a) , HuMab-TF-O98-mcMMAF (b)、HuMab-TF-On-vcMMAE (c), HuMab-TF-Ol1-mcMMAF (d), HuMab-TF-111-vcMMAE (e)、HuMab-TF-111-mcMMAF (f)、IgGl-bl2_vcMMAE (g)和 IgGl_b12-mcMMAF (h)在研究開始時和在51:或〈_65°C儲存3個月后的高效尺寸排阻層析(HP-SEC)圖。圖12 =ADC和未綴合的IgGl與TF-E⑶His的結合測定以測試穩定性。在研究開始時(t=0)或者在51:和〈_65°C儲存3個月后，對樣品進行結合分析。圖13:抗-TF ADC在治療性處理SCID小鼠中的HPAF-1I異種移植物時的體內劑量反應。將建立HPAF-1I腫瘤的小鼠用抗-TF vcMMAE ADC處理。顯示的數據是平均腫瘤體積土 S.E.Μ./組(η = 8只小鼠/組)。發明詳述 定義
術語“組織因子”、“TF”、“CD142”、“組織因子抗原”、“TF抗原”和“CD142抗原”本文可交換地使用，除非另外規定，否則該術語包括人組織因子的任何變體、同種型和物種同源物，人組織因子由細胞天然表達或者在用組織因子基因轉染的細胞上表達。組織因子可為實施例1中使用的序列Genbank登錄號NP_001984。術語“免疫球蛋白”指，一類由兩對多肽鏈組成的結構上相關的糖蛋白，一對輕(L)低分子量鏈和一對重(H)鏈， 所有四條鏈由二硫鍵相互連接。免疫球蛋白的結構已被很好地表征。參見例如Fundamental Immunology第7章(Paul, W.，主編，第二版RavenPress, N.Y.(1989))。簡言之，各重鏈通常由重鏈可變區(本文縮寫為Vh或VH)和重鏈恒定區(Ch*CH)組成。重鏈恒定區通常由三個結構域^^^^和^^組成。各輕鏈通常由輕鏈可變區(本文縮寫為'或VL)和輕鏈恒定區或CL)組成。輕鏈恒定區通常由一個結構域(Q)組成。V1^P'區可進一步細分為散布于更保守的稱為框架區(FR)的區的高變化性的區(或高變區，其在序列和/或結構上限定的環形式中可為高變的)，亦稱為互補決定區(CDR)。各Vh和\通常由3個CDR和4個FR組成，從氨基端至羧基端以下述次序排列:FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4 (亦參見 Chothia 和 Lesk J.Mol.Biol.196.901-917 (1987))。通常，該區中的氨基酸殘基的編號由以下所述的方法進行:Kabat等，Sequences of Proteins of Immunological Interest,第5版 Public Health Service,National Institutes of Health, Bethesda, MD.(1991)(短語例如 Kabat 中或根據Kabat的可變結構域殘基編號本文指，重鏈可變結構域或輕鏈可變結構域的該編號系統)。使用該編號系統，肽的真實線性氨基酸序列可包含較少的或另外的對應于可變結構域的FR或⑶R縮短或插入其中的氨基酸。例如，重鏈可變區可包含Vh⑶R2的殘基52后的單氨基酸插入物(根據Kabat的殘基52a)和重鏈FR殘基82后的插入殘基(例如根據Kabat的殘基82a、82b和82c等)。通過在抗體序列與“標準"Kabat編號序列有同源性的區上比對，可確定給定抗體的殘基的Kabat編號。
本發明的上下文中的術語“抗體”(Ab)指，免疫球蛋白分子、免疫球蛋白分子的片段或者它們之一的衍生物，其在典型的生理條件下具有與抗原特異性結合的能力，具有顯著時間段的半壽期(例如至少約30分鐘、至少約45分鐘、至少約I小時、至少約2小時、至少約4小時、至少約8小時、至少約12小時、約24小時以上、約48小時以上、約3、4、5、6、7天以上等)或任何其他相關的功能上限定的時期(例如足夠誘導、促進、增強和/或調節與抗體結合抗原相關的生理反應的時間和/或足夠抗體募集效應子活性的時間)。免疫球蛋白分子的重鏈和輕鏈的可變區包含與抗原相互作用的結合結構域。抗體(Ab)的恒定區可介導免疫球蛋白與宿主組織或因子(包括免疫系統的多種細胞(例如效應細胞))和補體系統的成分例如Clq (補體激活的經典途徑中的第一成分)的結合。如上文所示，除非另外說明或被上下文明顯抵觸，否則術語抗體在本文中包括保留與抗原特異性結合的能力的抗體片段。已顯示，抗體的抗原結合功能可由全長抗體的片段進行。術語“抗體”內所涵蓋的結合片段的實例包括:(i) Fab’或Fab片段、由\、VH、(^和ChI結構域組成的單價片段或W02007059782 (Genmab A/S)中所述的單價抗體；(ii) F (ab’)2片段，包含在鉸鏈區由二硫鍵連接的兩個Fab片段的二價片段；(iii)基本上由Vh和ChI結構域組成的Fd片段；(iv)基本上由抗體單臂的\和Vh結構域組成的Fv片段；(V) dAb片段(Ward等，Nature 341，544-546 (1989))，其基·本上由Vh結構域組成并亦稱為結構域抗體(Holt等；TrendsBiotechnol.2003 年 11 月;21 (11): 484-90) ； (vi)胳馬它科(cameI id)抗體或納米抗體(nanobody)(Revets 等;Expert Opin Biol Ther.2005 年 I 月;5(1):111—24)和(vii)分離的互補決定區(CDR)。此外，雖然Fv片段的兩個結構域(八和Vh)由單獨的基因所編碼，但是使用重組方法，可通過能夠使它們成為單蛋白鏈的合成接頭將它們連接，其中'和Vh區成對以形成單價分子(稱為單鏈抗體或單鏈Fv (scFv),參見例如Bird等，Science242.423-426 (1988)和 Huston 等，PNAS USA 迎，5879-5883 (1988))。除非上下文另外指出或明確表示，否則這樣的單鏈抗體涵蓋在術語抗體內。雖然這樣的片段一般包含在抗體的涵義內，但是它們共同并各獨立地為本發明的獨特特征，顯示不同的生物學性質和效用。本文另外討論本發明上下文的這些和其他有用的抗體片段。還應該理解，除非另外說明，否則術語抗體亦包括多克隆抗體、單克隆抗體(mAb)、抗體樣多肽，例如由任何已知的技術(例如酶促切割、肽合成和重組技術)所提供的嵌合抗體和人源化抗體以及保留與抗原特異性結合的能力的抗體片段(抗原結合片段)。產生的抗體可具有任何同種型。在本發明的上下文中，術語“ADC”指抗體藥物綴合物，其在本發明的上下文中指與本申請中所述的另一部分偶聯的抗-TF抗體。“抗-TF抗體”是上文所述的抗體，其與抗原組織因子或組織因子抗原特異性結合。本文使用的術語“人抗體”旨在包括，具有來源于人種系免疫球蛋白序列的可變區和恒定區的抗體。本發明的人抗體可包括不由人種系免疫球蛋白序列編碼的氨基酸殘基(例如通過體外隨機或位點特異性誘變或者通過體內體細胞突變所導入的突變)。然而，本文使用的術語“人抗體”不旨在包括其中來源于另一哺乳動物物種(例如小鼠)的種系的CDR序列被移植到人框架序列上的抗體。在一個優選實施方案中，抗體藥物綴合物的抗體或本發明的抗體藥物綴合物是分離的。本文使用的“分離的抗體”或“分離的抗體藥物綴合物”旨在指，實質上無具有不同抗原特異性的其他抗體的抗體或抗體藥物綴合物(例如，與組織因子特異性結合的分離的抗體實質上無與非組織因子抗原特異性結合的抗體)。本文使用的分離的抗體藥物綴合物旨在指，亦實質上無“游離毒素”的抗體藥物綴合物，其中“游離毒素”旨在意指不與抗體綴合的毒素。當如實施例16所述測定時，所使用的與毒素相關的術語“實質上無”可尤其意指，存在少于5% (例如少于4%，或少于3%，或少于2%，或少于1.5%，或少于1%，或少于0.5%)的未綴合藥物。然而，與人組織因子的表位、同種型或變體特異性結合的分離的抗體或分離的抗體藥物綴合物可，對其他相關的抗原(例如來自其他物種(例如組織因子物種同源物))具有交叉反應性。此外，分離的抗體或抗體藥物綴合物可實質上無其他細胞物質和/或化學品。在本發明的一個實施方案中，在一個明確的組合物中組合兩個或更多個具有不同抗原結合特異性的“分離的”單克隆抗體或抗體藥物綴合物。當本文在兩個或更多個抗體的上下文中使用時，術語“與…競爭”或“與…交叉競爭”表示，兩個或更多個抗體競爭結合TF，例如在WO 10/066803的實施例12所述的測定中競爭TF結合。對于一些抗體對，當一個抗體包被在板上和另一個用于競爭時，才觀察到如WO 10/066803的實施例12的測定中的競爭，反之不亦然。本文使用的術語“與…競爭”亦旨在涵蓋抗體的這種組合。本文使用的術語“單克隆抗體”或“單克隆抗體組合物”指單分子組成的抗體分子的制備物。單克隆抗體或其組合物可為本發明的藥物綴合的抗體。單克隆抗體組合物對特定表位顯示單一結合特異性和親和力。因此，術語“人單克隆抗體”指，具有來源于人種系免疫球蛋白序列的可變區和恒定區的顯示單一結合特異性的抗體。人單克隆抗體可由雜交瘤產生，雜交瘤包括與無限增殖化細胞融合的獲自轉基因或轉染色體非人動物(例如具有包含人重鏈轉基因和輕鏈轉基因的基因組的轉基因小鼠)的B細胞。在抗體與預定的抗原結合的上下文中，當使用抗原作為配體和抗體作為分析物通過例如表面等離振子共振(SPR)技術在BIAcore 3000儀器中測定時，本文使用的術語“結合”或“特異性結合”通常是，具有對應于約10_7M以下(例如約10_8M以下、例如約10_9M以下、約ΙΟ,Μ以下或約10_ηΜ或甚至更小)的Kd的親和力的結合，且以對應于比與除預定的抗原或密切相關的抗原外的非特異性抗原(例如BSA、酪蛋白)結合的親和力至少低10倍(例如至少低100 倍、例如至少低1，000倍、例如至少低10，000倍、例如至少低100，000倍)的Kd的親和力與預定的抗原結合。親和力為較低的量取決于抗體的KD，使得當抗體的Kd非常低時(即抗體是高度特異的)，那么抗原的親和力低于非特異性抗原的親和力的量可為至少10，000倍。本文使用的術語“kd”(sec—1)指，特定抗體-抗原相互作用的解離速率常數。所述值亦被稱為Iwf值。本文使用的術語“k/’W X sec-1)指，特定抗體-抗原相互作用的締合速率常數。本文使用的術語“KD” (M)指，特定抗體-抗原相互作用的解離平衡常數。本文使用的術語“KA” (Μ-1)指，特定抗體-抗原相互作用的締合平衡常數并由ka除以kd獲得。當在TF抗體的上下文中使用時，本文使用的術語“內化”包括，抗體從細胞表面內化到表達TF的細胞中的任何機制。抗體的內化可在測量內化的抗體-毒素綴合物或復合物的作用的間接或直接測定中評價(例如實施例15的抗-K -ETA’測定或實施例18的內化和細胞殺死測定)。通常，直接測定用于測量抗體藥物綴合物的內化，例如本文實施例18所述的測定，而間接測定可用于測量然后與第二綴合抗體預孵育的抗體的內化，例如本文實施例15所述的測定。在一個實施方案中，本發明亦提供包含實施例抗體的 '區、Vh區或者一個或多個CDR的功能變體的抗體。在抗-TF抗體的上下文中所使用的\、Vh或CDR的功能變體仍允許抗體保留母抗體親和力/親合力和/或特異性/選擇性的至少實質比例(至少約50%、60%、70%、80%、90%、95%以上)，并在一些情況下與母抗體相比這樣的抗-TF抗體可與較大的親和力、選擇性和/或特異性相關。這樣的功能變體通常對母抗體保持顯著的序列同一性。考慮需要被引入用于兩條序列的最優比對的空位數量和各空位長度，兩條序列之間的百分比同一性是序列所共有的相同位置的數量的函數(即％同源性=相同位置的#/位置的總# X 100)。兩條序列之間的序列比較和百分比同一性測定可使用如下文非限制性實施例中所述的數學算法實現。兩條核苷酸序列之間的百分比同一'丨生可使用GCG軟件包(http://www.gcg.com上可得)中的GAP程序(使用NWSgapdna.CMP矩陣和空位權重為40、50、60、70或80以及長度權重為1、2、3、4、5或6)測定。兩條核苷酸或氨基酸序列之間的百分比同一性亦可使用已結合到 ALIGN 程序(版本 2.0)中的 E.Meyers 和 W.Miller, Comput.Appl.Biosci 4,11-17 (1988)的算法(使用PAM120權重殘基表、空位長度罰分為12和空位罰分為4)測定。另外，兩條氨基酸序列之間的百分比同一'I"生可使用已結合到GCG軟件包(http://www.gcg.com上可得)的 GAP 程序中的 Needleman 和 Wunsch, J.Mol.Biol.48, 444-453 (1970))算法(使用Blossum 62矩陣或PAM250矩陣和空位權重為16、14、12、10、8、6或4以及長度權重為1、2、3、4、5或6)測定。CDR變體的序列可通過大部分保守取代與母抗體序列的CDR序列不同；例如變體中至少約35%、約50%以上、約60%以上、約70%以上、約75%以上、約80%以上、約85%以上、約90%以上、約95%以上(例如約65-99%，例如約96%、97%或98%)的取代是保守氨基酸殘 基置換。CDR變體的序列可通過大部分保守取代與母抗體序列的CDR序列不同；例如變體中至少10 (例如9、8、7、6、5、4、3、2或I)個取代是保守氨基酸殘基置換。在本發明的上下文中，保守取代可通過下述3個表中的一個或多個所顯示的氨基酸種類內的取代所定義。保守取代的氨基酸殘基種類 面￥殘基|Asp(D^PGlu(E)
M殘基Lys (K)、Arg (R)和 His (H)
栗采不帶電荷的殘基 Ser (S)、Thr (T)、Asn (N)和Gln (Q)
族不帶電荷的殘基 Gly (G)、Ala (A)、Val (V)、Leu (L)和 Ile(I)—
非極性不帶電荷的殘基 Cys (C)、Met (M)和Pro(P)_
芳￥族殘基|Phe (F)、Tyr (Y)和 Trp (W)
備選的保守氨基酸殘基取代種類
i|a|s|t
2P E
3N Q
4R K 5ILM~
6|f|y|w氨基酸殘基的備選的物理和功能分類
權利要求
1.一種包含抗體的抗體藥物綴合物，所述抗體與組織因子結合并包含: (i)包含具有SEQID NO: 6所示的氨基酸序列的⑶Rl區、具有SEQ ID NO: 7所示的氨基酸序列的⑶R2區和具有SEQ ID NO: 8所示的氨基酸序列的⑶R3區的VH區，和包含具有SEQ ID NO: 46所示的氨基酸序列的⑶Rl區、具有SEQ ID NO: 47所示的氨基酸序列的⑶R2區和具有SEQ ID NO: 48所示的氨基酸序列的⑶R3區的VL區， (ii)包含具有SEQID NO: 34所示的氨基酸序列的CDRl區、具有SEQ ID NO: 35所示的氨基酸序列的⑶R2區和具有SEQ ID NO: 36所示的氨基酸序列的⑶R3區的VH區，和包含具有SEQ ID NO: 74所示的氨基酸序列的⑶Rl區、具有SEQ ID NO: 75所示的氨基酸序列的CDR2區和具有SEQ ID NO: 76所示的氨基酸序列的CDR3區的VL區，或 (iii)包含具有SEQID NO: 38所示的氨基酸序列的CDRl區、具有SEQ ID NO: 39所不的氣基酸序列的⑶R2區和具有SEQ ID NO: 40所不的氣基酸序列的CDR3區的VH區,和包含具有SEQ ID NO: 78所示的氨基酸序列的⑶Rl區、具有SEQ ID NO: 79所示的氨基酸序列的⑶R2區和具有SEQ ID NO: 80所示的氨基酸序列的⑶R3區的VL區，或 (iv)包含具有SEQID NO: 2所示的氨基酸序列的⑶Rl區、具有SEQ ID NO: 3所示的氨基酸序列的⑶R2區和具有SEQ ID NO: 4所示的氨基酸序列的⑶R3區的VH區，和包含具有SEQ ID NO: 42所示的氨基酸序列的⑶Rl區、具有SEQ ID NO: 43所示的氨基酸序列的⑶R2區和具有SEQ ID NO: 44所示的氨基酸序列的⑶R3區的VL區，或 (v)所述抗體中任一個的變體，其中所述變體在所述序列中優選具有至多1、2或3個氨基酸修飾，更優選氨基酸取代，例如保守氨基酸取代， 其中所述抗體經由接頭與auristatin或其功能肽類似物或衍生物綴合。
2.權利要求1的抗體藥物綴合物，其中所述抗體包含: (i)包含SEQID NO: 5的氨基酸序列的VH區和包含SEQ ID NO: 45的氨基酸序列的VL區，或 (ii)包含SEQID NO: 33的氨基酸序列的VH區和包含SEQ ID NO: 73的氨基酸序列的VL區，或 (iii)包含SEQID NO: 37的氨基酸序列的VH區和包含SEQ ID NO: 77的氨基酸序列的VL區，或 (iv)包含SEQID NO:1的氨基酸序列的VH區和包含SEQ ID NO: 41的氨基酸序列的VL區。
3.權利要求1或2的抗體藥物綴合物，其中所述抗體是全長抗體。
4.前述權利要求中任一項的抗體藥物綴合物，其中所述抗體是全人單克隆IgGl抗體，例如 IgGl, K。
5.前述權利要求中任一項的抗體藥物綴合物，其中所述auristatin是單甲基auristatin E (MMAE):
6.權利要求1-4中任一項的抗體藥物綴合物，其中所述auristatin是單甲基auristatin F (MMAF):
7.前述權利要求中任一項的抗體藥物綴合物，其中接頭與通過(部分)還原抗-TF抗體所獲得的抗-TF抗體的巰基殘基連接。
8.權利要求1-5或7中任一項的抗體藥物綴合物，其中接頭-auristatin是vcMMAF或 vcMMAE:
9.權利要求8的抗體藥物綴合物,其中接頭-auristatin是權利要求8中所定義的vcMMAEο
10.權利要求1-4或6-7中任一項的抗體藥物綴合物，其中接頭-綴合物是mcMMAF:
11.一種藥物組合物，其包含權利要求ι- ο中任一項所定義的抗體藥物綴合物和藥學上可接受的載體。
12.權利要求1-10中任一項所定義的抗體藥物綴合物，其用作藥物。
13.權利要求1-10中任一項所定義的抗體藥物綴合物，其用于治療癌癥。
14.權利要求13的抗體藥物綴合物，其中所述癌癥選自:中樞神經系統的腫瘤、頭頸癌、肺癌例如NSCLC、乳腺癌具體地三陰乳腺癌、食道癌、胃癌、肝膽癌、胰腺癌、結直腸癌、膀胱癌、腎癌、前列腺癌、子宮內膜癌、卵巢癌、惡性黑色素瘤、肉瘤、未知原發來源的腫瘤、骨髓癌、急性成淋巴細胞白血病、AML、慢性成淋巴細胞白血病和非霍奇金淋巴瘤、皮膚癌、神經膠質瘤、腦癌、子宮癌和直腸癌。
15.權利要求13的抗體藥物綴合物，其中所述用途是用于治療胰腺癌。
16.權利要求13的抗體藥物綴合物，其中所述用途是用于治療結直腸癌。
17.權利要求13的抗體藥物綴合物，其中所述用途是用于治療卵巢癌。
18.權利要求13的抗體藥物綴合物，其中所述用途是用于治療乳腺癌。
19.權利要求13的抗體藥物綴合物，其中所述用途是用于治療前列腺癌。
20.權利要求13的抗體藥物綴合物，其中所述用途是用于治療膀胱癌。
21.權利要求12的抗體藥物綴合物，其中所述藥物是用于與一種或多種另外的治療劑例如化學治療劑聯合治療癌癥。
22.權利要求1-10中任一項的抗體藥物綴合物用于制造用于治療癌癥的藥物的用途。
23.權利要求21的用途，其包含權利要求14-20中任一項的另外的特征。
24.一種用于誘導表達組織因子的腫瘤細胞的細胞死亡或者抑制其生長和/或增殖的方法，其包括向有需要的個體給予有效量的權利要求ι- ο中任一項的抗體藥物綴合物。
25.一種治療權利要求14-20中任何疾病的方法，所述方法是通過向有需要的個體給予有效量的權利要求1-10中任一項 的抗體藥物綴合物。
26.權利要求25的方法，其中所述抗體藥物綴合物與一種或多種另外的治療劑例如化學治療劑聯合給予。
全文摘要
針對組織因子的抗體藥物綴合物。亦公開了包含抗體和抗體藥物綴合物的藥物組合物，以及使用抗體和抗體藥物綴合物的治療和診斷方法。
文檔編號C07K16/36GK103119065SQ201180039935
公開日2013年5月22日 申請日期2011年6月15日 優先權日2010年6月15日
發明者D.薩蒂恩, S.弗普洛根, W.布利克, S.利斯比, J.v.d.溫克爾, P.v.伯克爾, P.帕倫 申請人:根馬布股份公司