專利名稱：與her3相關的生物材料的制作方法
與HER3相關的生物材料本發明涉及針對(如本文中定義的)HER3的氨基酸序列以及涉及化合物或構建體，具體地蛋 白質和多肽，所述蛋白質和多肽包含一個或多個這樣的氨基酸序列(在本文中也分別稱為“本發明的氨基酸序列”、“本發明的化合物”和“本發明的多肽”)或基本上由其組成。在一些具體但非限定性方面(本文中更詳細描述的)，本發明提供了 -針對(如本文中定義的)HER3并且能夠抑制或阻斷(完全或部分地，如本文中進一步描述的)HRG對HER3的結合(如本文中進一步描述的)的氨基酸序列；-針對(如本文中定義的)HER3并且能夠抑制或阻斷(完全或部分地，如本文中進一步描述的)HER3的異二聚化(如本文中進一步描述的)的氨基酸序列；-針對(如本文中定義的)HER3并且能夠結合HER3的結構域II的氨基酸序列；和/或-針對(如本文中定義的)HER3并且能夠抑制或阻斷(完全或部分地，如本文中進一步描述的)HER3磷酸化(如本文中進一步描述的)的氨基酸序列。如本文中進一步描述的，在特別優選的但非限定性的方面，本文中描述的針對HER3的各種氨基酸序列(包括根據特定方面的氨基酸序列)優選地為免疫球蛋白單可變結構域(在本文也稱為“ISV”)。免疫球蛋白單可變結構域為這樣的氨基酸序列，所述氨基酸序列-包含免疫球蛋白折疊或在適當的條件(例如生理條件)下能夠形成免疫球蛋白折疊(即通過折疊)，即，以便形成免疫球蛋白可變結構域(例如，VH、VL或VHH結構域)；以及-形成(或在適當的條件下能夠形成)免疫球蛋白可變結構域，所述免疫球蛋白可變結構域包含功能性抗原結合活性(在下列意義上其不需要與另一個免疫球蛋白可變結構域相互作用(例如VH-VL相互作用)以形成功能性抗原結合位點)。作為ISV的本發明的氨基酸序列在本文中也稱為“本發明的ISV”。適用于本發明的免疫球蛋白單可變結構域的一些優選實例將根據本文中的進一步描述變得清楚，并且例如包括VHH和/或(其它)納米抗體(優選的)例如人源化VHH或駱駝源化VH例如駱駝源化人VH、dAb和(單)結構域抗體。如本文中還進一步描述的，本文中描述的針對HER3的各種氨基酸序列(包括根據特定方面的氨基酸序列)可有利地用作構建塊，以提供本發明的多價(如本文中所描述的，例如二價或三價)、多特異性(如本文中所描述的，例如雙或三特異性)或多互補位(multiparatopic)(如本文中所描述的,例如雙互補位)多肽，以及用于本發明的其它優選但非限定性方面的本發明的此類多肽。再次地，還在本發明的這些方面，存在于這類序列中的本發明的氨基酸序列優選為ISV(和優選地本文中描述的納米抗體)。例如但非限制性的，在本發明的一個特定方面，這樣的多肽可包含至少一個(例如I個或2個)ISV (和優選地納米抗體)，所述ISV或納米抗體是針對(如本文中定義的)HER3的，并且能夠抑制或阻斷(完全或部分地，如本文中進一步描述的)HRG對HER3的結合(如本文中進一步描述的);和至少一個(例如I個或2個)ISV (和優選地納米抗體)，所述ISV或納米抗體是針對(如本文中定義的)HER3的并且能夠抑制或阻斷(完全或部分地，如本文中進一步描述的)HER3的異二聚化(如本文中進一步描述的)。還可提供具有增加的體內半衰期的本發明的此類和其它氨基酸序列和多肽，如本文中進一步描述的。根據本文中進一步描述，本發明的各種氨基酸序列和多肽的一些優選但非限定性實例將變得清楚。本發明還涉及編碼此類氨基酸序列和多肽的核酸(在本文中也稱為“本發明的核酸”或“本發明的核苷酸序列”)；涉及用于制備此類氨基酸序列和多肽的方法；涉及表達或能夠表達此類氨基酸序列或多肽的宿主細胞；涉及組合物，具體地涉及藥物組合物，所述組合物包含此類氨基酸序列、多肽、核酸和/或宿主細胞；以及涉及此類氨基酸序列或多肽、核酸、宿主細胞和/或組合物的用途，具體地用于預防、治療或診斷目的，例如本文中提及的預防、治療或診斷目的用途。
根據本文中的進一步描述本發明的其它方面、實施方案、有利方面和應用將變得清楚。
背景技術：
HER3(人表皮生長因子受體3)屬于多肽生長因子受體的ErbB/HER超家族，其包括表皮生長因子(EGF)受體(EGFR、ErbBl、HERl)、neu癌基因產物(ErbB2、HER2)和最近鑒定的 ErbB3、HER3 和 ErbB4、HER4 受體蛋白(參見，例如，Plowman 等人(1990), Proc. Natl.Acad. Sci. USA 87, 4905-4909 ；Hynes 等人(1994)Biochim. Biophys. Acta Rev. Cancer1198, 165-184)。已知HER3可結合多種配體例如heregulin和神經調節蛋白(neuregulin) I和2 ;但其缺乏固有的酪氨酸激酶活性(并且因為其不具激酶活性，因此當與另一個HER家族成員例如HER1、HER2或HER4 二聚化時，受體僅可起始信號轉導)。更具體地，HER3為膜結合蛋白并且具有神經調節蛋白結合結構域但不具有活性激酶結構域。因此其可結合該配體但不能將信號通過蛋白質磷酸化傳入細胞。然而，其與確實具有激酶活性的其它EGF受體家族成員形成異二聚體。異二聚化導致引起細胞分裂、增殖、分化、遷移和其它細胞過程的途徑激活。復雜的多層次信號傳導產生受體交聯并且側向信號傳導在EGFR家族內和其它受體酪氨酸激酶樣MET中逐漸變得明顯(Engelmann等人(2007), Science 316,1039-1043)。因活性自分泌環的突變、擴增和存在而引起的脫調控、異常的信號轉導可參與癌癥和其它疾病的發展。在許多癌癥包括前列腺癌、膀胱癌和乳腺癌中已報道了該基因的擴增和/或其蛋白質的過表達(參見例如 W02008100624, W02007077028, Horst 等人(2005)Int J Cancer, 115, 519-527 ；Xue 等人(2006) Cancer Res. 66，1418-1426)。HER3 也稱為 LCCS2 ；ErbB-3 ；c-erbB3 ；erbB3-S ；MDA-BF-I ；MGC88033 ；c-erbB-3 ；pl80-ErbB3 ；p45-sErbB3 ；p85-sErbB3 ;ERBB3。就HER3在癌癥中的作用而言，已有人提出HER3可能是HER2-介導的腫瘤發生所必需的HER2可能需要HER3來將正常細胞轉化成癌細胞。例如，已發現HER3的增加的表達增強了 HER2的信號轉導效力，然而減少的HER3表達導致HER2活性的丟失。這已產生下列假說HER3可通過與HER2 二聚化參與HER2-介導的腫瘤發生。還有人提出HER3可使得能夠逃脫其它HER受體的抑制。例如，臨床前研究已顯示HER3活性的上調可以是腫瘤可籍以逃脫HER家族受體的酪氨酸激酶抑制的機制，并且腫瘤細胞可通過增加HER3的表達(其不具有激酶活性)來補償其它HER受體的酪氨酸激酶抑制。還已發現在HER2:HER3異二聚體中，HER2轉磷酸化(transphosphorylate) HER3。還已發現HER3在幾種類型的癌癥(包括但不限于乳腺癌和前列腺癌)中過表達，并且已發現HER2/HER3的表達與從非侵襲性至侵襲性階段的進展之間可存在關聯(Baselga 等人，2009Nature Reviews Cancer 9, 463-475)。雖然已經指出了 HER3在癌癥和致癌基因信號轉導中的作用(上文)，但其在抗癌治療中的重要性仍然還不清楚，這是因為其中HER3為其組分的復雜ErbB網絡。目前的免疫療法主要集中在抑制HER2的作用，具體地HER2/HER3復合物的異二聚化(參見，例如，·Sliwkowski 等人(1994) J. Biol. Chem. 269(20) : 14661-14665)。本發明的目的是提供有效地抑制HER3信號轉導并且可用于治療和診斷多種癌癥的改進的免疫療法。
發明概述在本發明中，已鑒定和表征了許多免疫球蛋白單可變結構域(如本文中進一步描述的)(并且其中適當地人源化的和/或序列優化的)，所述結構域可結合HER3 (具體地特異性結合HER3，如本文中進一步定義的)并且可(用于)調節(如本文中定義的)HER3介導的信號轉導和/或調節(一部分或全部)HER3的生物效應和/或調節(一部分或全部)其中涉及HER3和/或HER3個導的信號轉導的生物機制/途徑。還已發現本發明提供的免疫球蛋白單可變結構域不僅本身能夠用于這樣的調節，而且還可有利地彼此連接/組合(即，以便提供多價、多特異性和/或雙互補位構建體，如本文中進一步定義的)和/或與其它部分、結合結構域或結合單元連接/組合以提供可用于這樣的調節的蛋白質、多肽或(其它)化合物或構建體。因此，由本發明提供的免疫球蛋白單可變結構域(或“ISV”)作為用于提供這樣的蛋白質、多肽或(其它)化合物或構建體的“構建塊”的用途形成本發明的重要有優點和方面。例如，有利地但非限定性地，已發現由本發明提供的各種免疫球蛋白單可變結構域或“ISV”可以不同方式結合HER3，從而以它們與HER3相互作用和/或調節HER3介導的信號轉導的方式提供不同的作用模式。例如，由本發明提供的一些ISV能夠抑制HRG對HER3的結合，然而其它ISV可結合HER3的結構域II和/或阻斷HER3轉磷酸化。其它ISV還可阻斷HER3與其本身或與HER家族的其它成員(例如HER1、HER2或HER3)的二聚化。因此，本發明的氨基酸(或ISV)被當作構建塊。因此，本發明提供了許多不同的ISV，所述ISV可影響HER3、HER3介導的信號轉導和/或與HER3和/或與HER3介導的信號轉導相關的生物效應。此外，當將本發明提供的ISV適當地用作或組合為構建塊以提供其它蛋白質、多肽或(其它)化合物或構建體時，本發明例如使得可能有利地將不同的與HER3的相互作用和/或將不同的作用模式組合入單個分子、化合物、構建體、蛋白質或多肽。其實例通過本文中的進一步描述將得清楚。由本發明提供的各種ISV、蛋白質、多肽、化合物和/或構建體具有的對HER3和HER3介導的信號轉導(包括它們的作用模式)的作用或影響可使用多種適當的測定法和體內模型來測定，所述測定法或模型為例如HER3內化測定(例如測量適當的細胞例如MCF7和MALME-3M細胞上HER3表面表達的減少);配體阻斷測定(例如HRG競爭性Alphascreen或FACS測定);HRG誘導的HER3信號轉導阻斷測定(例如測量HER3-配體刺激的MCF7、CH0-HER2-HER3、BT474和MDA-MB4 68細胞中pHER3的抑制的測定);測量異二聚化阻斷的測定(例如 TGF- α -刺激的 CH0-EGFR-HER3、β -cellulin-刺激的 MDA-MB468 細胞的 pHER3阻斷);測量下游信號轉導的抑制的測定(例如測量HER3-配體刺激的MCF7、A549和BT474細胞中pAKT和/或pMAPK信號轉導的測定);或細胞遷移測定(例如測量HRG誘導的A431細胞的遷移的測定)。參考例如本文中所示的實施例部分和結果。因此，本發明的ISV、多肽和組合物通常可用于調節，具體地抑制和/或阻止HER3對Heregulin的結合和/或阻斷與MET、EGFR或HER2的異二聚化(參見例如Hsieh和Moasser, 2007, British Journal of Cancer),從而調節，具體地抑制或阻止由HER3和/或Heregulin介導的信號轉導,調節HER3和/或Heregulin所參與的生物途徑,和/或調節與這樣的信號轉導或這些途徑相關的生物機制、應答和效應。這樣，本發明的多肽和組合物可用于診斷和治療(如本文中定義的)多種癌癥。一般地，“多種癌癥”可定義為可分別通過適當地給有此需要的受試者(即，具有疾病或障礙或其至少一個癥狀和/或處于誘發或發生疾病或障礙的風險中)施用本發明的多肽或組合物(具體地，其藥學活性量的)和/或已知具有抗HER3或HER3所參與的生物途徑或機制的活性的成分(具體地，其藥學活性量的)來預防和/或治療的疾病和障礙。基于本文中的公開內容，這樣多樣的癌癥的實例對于本領域技術人員來說是清楚明了的，例如包括下列疾病和障礙癌癥(Sithanandam和 Anderson 的綜述(2OO8)Cancer Gene Therapy15(7)，413-448 ;乳腺癌(Lemoine 等人(1992)Br J Cancer 66，1116-1121 ;WUton 等人(2003) J Pathol 200(3) :290-297 ;Koutras 等人(2010) Crit Rev Oncol HematoI. 74(2)73-78)；肺癌(MUller-Tidow(2005)Cancer Res 65(5) 1778-1782 ；Timotheadou等人,(2007)Anticancer Res. 27 (6C) :4481-4489);卵巢癌(Tanner 等人(2006)J Clin Oncol 24(26) :4317-4323);前列腺癌(Lozano 等人(2005)BMC Genomics 6 109 ；Soler 等人，2009. Int J Cancerl25 (11) :2565-2575)、膀胱癌(Rajkumar 等人(1996)J Pathol, 179(4) :381-385)；腦癌(Addo-Yobo 等人(2006)J Neuropathol ExpNeurol65 (8) :769-775, Andersson 等人(2004) Acta Neuropathol, 108(2) 135-142);視網膜母細胞瘤(Chakraborty 等人(2007)Genomics 90(3) :344-353);黑色素瘤(Segal等人(2003)J Clin Oncol. 2003May I ;21 (9) : 1775-1781 ;Schaefer 等人(2004)CancerRes 64 :3395-3405 ;Reschke 等人，2008Clin Cancer Res. 14(16) :5188-97);結腸直腸癌(Grivas 等人(2007)Eur J Cancer 43(17) :2602-2611 ;Ciardiello 等人(1991)ProcNatl Acad Sci U S A. 88(17) :7792-7796);胰腺癌(Friess 等人(1995) Clin Cancer Res1(11) :1413-20) ;Lemoine 等人，1992J. Pathol. 168 :269-273);胃癌(Sanidas (1993)，IntJ Cancer 54(6) :935-40, Hayashi 等人(2008)Clin Cancer Res 14(23) :7843-7849;Hayashi 等人,(2008)Clin Cancer Res. 14(23) :7843-9);頭頸癌(Funayama(1998)Oncology 55(2) :161-167, Erjala(2006)Clin Cancer Res 12(13) :4103-4111)；子宮頸癌(Fuchs 等人，2007Anticancer Res. 27(2) :959-63);食道癌(Wei 等人，2007Int JOncol. 31 (3) :493-9.);和 / 或神經再生(Lindholm 等人(2002) Exp Brain Res) 2002Jan ；142(1) :81-90。具體地，本發明的多肽和組合物可用于診斷和治療多種癌癥，所述癌癥的特征在于由蛋白質的ErbB網絡或一般地由其中HER3所參與的任何途徑介導的過度的和/或不期望的信號轉導。基于本說明書，這樣多樣的癌癥的實例再次對于本領域技術人員來說是清楚明了的。因此，然而不限于此，還預期本發明的多肽可用于預防和/或治療所有這樣的疾病和障礙，針對所述疾病和障礙目前正在開發，已提出或將來將提出或開發利用此類活性成分的治療。此外，由于它們的有利性質(如本文中進一步描述的)，預期本發明的多肽可用于預防和治療除對其正在使用或將提出或開發此類已知的活性成分的疾病和障礙外的其它疾病和障礙；和/或本發明的多肽可提供用于治療本文中描述的疾病和障礙的新方法和方案。·根據本文中的進一步公開內容，本發明的氨基酸序列和多肽的其它應用和用途對于本領域技術人員將變得清楚。一般地，本發明的目的是提供可用于診斷、預防和/或治療多種癌癥和本文中提及的其它疾病和障礙的藥理學活性劑以及包含所述藥理學活性劑的組合物；和提供用于診斷、預防和/或治療此類疾病和障礙的方法，所述方法包括施用和/或使用此類試劑和組合物。具體地，本發明的目的是提供與目前使用的和/或本領域已知的試劑、組合物和/或方法相比較具有某些有利方面的這樣的藥理學活性劑、組合物和/或方法。根據下面進一步描述這些有利方面將變得清楚。更具體地，本發明的目的是提供可用作藥理學活性劑的治療性蛋白質以及包含所述蛋白質的組合物，用于診斷、預防和/或治療多種癌癥和本文中提及的其它疾病和障礙；和提供用于診斷、預防和/或治療此類疾病和障礙的方法，包括施用和/或使用此類治療性蛋白質和組合物。因此，本發明的具體目的是提供針對(如本文中定義的)HER3，具體針對來自溫血動物的HER3，更具體地針對來自哺乳動物的HER3，具體地針對人HER3 (SEQ ID NO I)的氨基酸序列；和提供包含至少一個這樣的氨基酸序列或基本上由其組成的蛋白質和多肽。具體地，本發明的具體目的是提供適用于預防性、治療性和/或診斷性用于溫血動物，具體地用于哺乳動物，更具體地用于人類的此類氨基酸序列和此類蛋白質和/或多肽。更具體地，本發明的具體目的是提供可用于預防、治療、緩解和/或診斷溫血動物的、具體地哺乳動物的，更具體地人類的與HER3相關的和/或由HER3介導的一種或多種疾病、障礙或病況(例如本文中提及的疾病、障礙和病況)的此類氨基酸序列和此類蛋白質和
/或多肽。本發明的具體目的還包括提供可用于制備藥物或獸醫用組合物的此類氨基酸序列和此類蛋白質和/或多肽，所述組合物用于預防和/或治療溫血動物的、具體地哺乳動物的，更具體地人類的與HER3相關的和/或由HER3介導的一種或多種疾病、障礙或病況(例如本文中提及的疾病、障礙和病況)。在本發明中，一般地，這些目的通過使用本文中描述的氨基酸序列、蛋白質、多肽和組合物來實現。—般地，本發明提供了針對(如本文中定義的)和/或可特異性結合(如本文中定義的)HER3的氨基酸序列；以及包含至少一個這樣的氨基酸序列的化合物和構建體，具體地蛋白質和多肽。如已提及的，在一些具體的但非限定性的方面(在本文中更詳細地描述的)，本發明提供了 針對(如本文中定義的)HER3并且能夠抑制或阻斷(完全或部分地，如本文中進一步描述的)配體結合，具體地抑制或阻斷(完全或部分地，如本文中進一步描述的)HRG對HER3的結合(如本文中進一步描述的)的氨基酸序列。此類氨基酸序列在本文中也稱為“HRG-阻斷性氨基酸序列”或“HRG-阻斷性構建塊”。優選地，此類HRG-阻斷性氨基酸序 列為ISV (如本文中所描述的)，在該情況下它們也稱為“HRG-阻斷性ISV”。優選地，任何HRG-阻斷性氨基酸序列、HRG-阻斷性構建塊或HRG-阻斷性ISV是這樣的序列它們具有阻斷活性，即部分或完全地阻斷HRG對HER3的結合，這可利用本領域技術人員已知的任何適當的測定，例如，利用Alphascreen測定或利用FACS競爭性測定(例如，本文中描述的)來確定。優選地，阻斷活性利用實施例9中描述的FACS競爭性測定來測定。優選地，ISV在CHO細胞中具有阻斷或競爭HRGl-β I對HER3的結合的阻斷活性或競爭能力，IC50低于600ηΜ，優選為 500nM、400nM、300nM、200nM、IOOnM 或甚至更低。-例如，04C07-樣ISV在該測定中具有阻斷活性或競爭能力，其IC50低于ΙΟΟηΜ，更優選低于75nM、50nM或甚至更低，例如低于20nM或15nM、10nM、9nM、8nM、7nM或6ηΜ或更優選低于5ηΜ。-例如，17Β05-樣ISV在該測定中具有阻斷活性或競爭能力，其IC50低于150ηΜ，更優選低于100ηΜ、90ηΜ、80ηΜ或甚至更低，例如低于70ηΜ或60ηΜ、50ηΜ或40ηΜ或更優選低于35ηΜ。-例如，21F06-樣ISV在該測定中具有阻斷活性或競爭能力，其IC50低于ΙΟΟηΜ，更優選，低于8011]\1、7011]\1或甚至更低，例如低于6011]\1或5011]\1、4011]\1、3011]\1、2011]\1、1511]\1或 13nM或更優選低于llnM。在一個具體的但非限定性的方面，(一些)“HRG-阻斷性氨基酸序列”或“HRG-阻斷性構建塊”可以是(和優選地是)這樣的序列，它們能夠抑制或阻斷HER3信號轉導(參見實施例9和10)，例如在實施例10中使用的磷酸化測定中。優選地，任何HRG-阻斷性氨基酸序列、HRG-阻斷性構建塊或HRG-阻斷性ISV是這樣的序列，它們具有阻斷活性，即部分或完全阻斷或抑制HRG介導的HER3磷酸化，這可利用本領域技術人員已知的任何適當的測定，例如利用任何適當的磷酸化測定，例如HER3磷酸化測定、AKT磷酸化測定或ERK1/2磷酸化測定(如本文中描述的)來確定。優選地，磷酸化的阻斷活性或抑制能力通過實施例10中描述的HER3磷酸化測定來測定。優選地，ISV具有阻斷活性或抑制MCF-7細胞中配體(例如HRGl-β I)誘導的pHER3磷酸化的能力，IC50低于600nM，但優選為500nM、400nM、300nM、200nM、IOOnM或甚至更低。-例如，04C07-樣ISV在該測定中具有阻斷活性或競爭能力，IC50低于ΙΟΟηΜ，更優選，低于75nM, 50nM或甚至更低，例如低于20nM或15nM、10nM、9nM、8nM、7nM或6nM或更優選低于5、4、3或2nM。-例如，17B05-樣ISV在該測定中具有阻斷活性或競爭能力，IC50低于150nM，更優選，低于ΙΟΟηΜ、90nM、80nM或甚至更低，例如低于70nM或60nM、50nM或40nM或更優選低于35nM，例如低于20nM或 15nM、10nM、9nM、8nM或7nM或更優選低于6nM。-例如，21F06-樣ISV在該測定中具有阻斷活性或競爭能力，IC50低于150nM，更優選，低于ΙΟΟηΜ、90nM、80nM或甚至更低，例如低于70nM或60nM、50nM或40nM或更優選低于35nM，例如低于20nM或15nM、10nM、9nM、8nM或更優選低于7nM。優選地，信號轉導的阻斷活性或抑制能力利用實施例10. I中描述的AKT磷酸化測定來測定。優選地，ISV具有阻斷活性或抑制MCF-7細胞中配體(例如HRGl-βΙ)誘導的Akt磷酸化的能力，IC50低于600nM，但優選地為500nM, 400nM, 300nM, 200nM, IOOnM或甚至更低。-例如，04C07-樣ISV在該測定中具有阻斷活性或競爭能力，IC50低于ΙΟΟηΜ，更優選，低于80nM、70nM或甚至更低，例如低于60nM或50nM、45nM、40nM、35nM、30nM或更優選低于20nM。-例如，17B05-樣ISV在該測定中具有阻斷活性或競爭能力，IC50低于150nM，更優選，低于ΙΟΟηΜ、90nM、80nM或甚至更低，例如低于70nM或60nM、50nM或40nM或更優選低于35nM，例如低于20nM或15nM、12nM、llnM、IOnM或9nM或更優選低于8nM。-例如，21F06-樣ISV在該測定中具有阻斷活性或競爭能力，IC50低于150nM，更優選，低于ΙΟΟηΜ、90nM、80nM或甚至更低，例如低于70nM或60nM、55nM或50nM或更優選低于45nM，例如低于40nM或35nM、30nM、27. 5nM、25nM或更優選低于24nM。優選地，信號轉導的阻斷活性或抑制能力利用實施例10. 2中描述的ERK1/2磷酸化測定來測定。優選地，ISV具有阻斷活性或抑制MCF-7細胞中配體(例如HRGl-β I)誘導的 ERK1/2-磷酸化的能力，IC50 低于 600ηΜ，但優選地為 500ηΜ、400ηΜ、300ηΜ、200ηΜ、150ηΜ或甚至更低。-例如，04C07-樣ISV在該測定中具有阻斷活性或競爭能力，IC50低于150ηΜ，更優選，低于ΙΟΟηΜ、90ηΜ、80ηΜ或甚至更低，例如低于80ηΜ、70ηΜ或60ηΜ、55ηΜ或50ηΜ或更優選低于45ηΜ，例如低于40ηΜ或35ηΜ或更優選低于30ηΜ。-例如，17Β05-樣ISV在該測定中具有阻斷活性或競爭能力，IC50低于150ηΜ，更優選，低于ΙΟΟηΜ、90ηΜ、80ηΜ或甚至更低，例如低于70ηΜ或60ηΜ、50ηΜ或40ηΜ或更優選低于35ηΜ，例如低于20ηΜ或15ηΜ、10ηΜ、7. 5ηΜ、5ηΜ或4ηΜ或更優選低于3ηΜ。-例如，21F06-樣ISV在該測定中具有阻斷活性或競爭能力，IC50低于150ηΜ，例如優選低于120ηΜ。在另一個具體的但非限定性方面，HRG-阻斷性氨基酸序列(或HRG-阻斷性ISV)為氨基酸序列(或ISV)，所述氨基酸序列例如和具體地在實施例2中描述的測定(部分2.9)中與氨基酸序列21R)6(SEQ ID NO :22)和/或氨基酸序列04C07 (SEQ ID NO :15)競爭對HER3的結合和/或能夠交叉阻斷(如本文中定義的)21F06和/或04C07對HER3的結合。此類HRG-阻斷性ISV的一些優選但非限定性實例為“21R)6-樣序列”和“04C07-樣序列”(如本文中進一步描述的)。一些21R)6-樣序列可以為能夠阻斷/抑制配體結合以及抑制/阻斷信號轉導的本發明的ISV的非限定性實例。類似地，本文中描述的17B05-樣序列為能夠阻斷/抑制(轉)磷酸化以及配體/HRG結合的本發明的ISV的實例。本發明提供了氨基酸序列，所述氨基酸序列是針對(如本文中定義的)HER3的并且能夠抑制或阻斷(完全或部分地，如本文中進一步描述的)HER3的(異)二聚化(如本文中進一步描述的)，例如EGFR/HER1-HER3 (異)二聚化(參見例如實施例13和16)和/或HER-2/HER3 (異)二聚化)，例如在實施例13中使用的HER-1/HER3 (異)二聚化測定中。此類氨基酸序列在本文中也稱為“二聚化-阻斷性氨基酸序列”或“二聚化-阻斷性構建塊”。優選地，此類二聚化-阻斷性氨基酸序列為ISV (如本文中所描述的)，在該情況下它們也稱為“二聚化-阻斷性ISV”。優選地，任何二聚化-阻斷性氨基酸序列、二聚化-阻斷性構建塊或二聚化-阻斷性ISV是這樣的序列，它們阻斷或抑制(異)二聚化，即完全或部分地阻斷或抑制HER3與MET、EGFR和/或HER2的二聚化，這可利用本領域技術人員已知的任何適當的測定，例如，利用轉磷酸化測定(例如，如本文中所描述折)來測定。優選地，阻斷或抑制能力利用實施例10或13中描述的轉磷酸化測定，例如，通過測定EGFR配體(例如TGF- α )誘導的HER3轉磷酸化(如在MDAMB468細胞或CHO EGFR/HER3細胞的細胞測定中測量的)來測定。 -優選地，ISV在CHOEGFR/HER3細胞中具有阻斷或抑制HER3與EGFR的二聚化的(異)二聚化的阻斷或抑制活性，IC50低于600ηΜ，但優選地為500ηΜ、400ηΜ、300ηΜ、200ηΜ、IOOnM或甚至更低。-例如，17Β05-樣ISV在該測定中具有阻斷活性或抑制能力，IC50低于ΙΟΟηΜ，更優選低于7511]\1、5011]\1或甚至更低，例如低于2011]\1或1511]\1、1011]\1、511]\1、411]\1、311]\1或211]\1或更優選低于InM。在一個具體的但非限定性的方面，(一些)二聚化-阻斷性氨基酸序列或二聚化-阻斷性構建塊可以是(和優選地也是)這樣的序列它們能夠抑制或阻斷(完全或部分地，如本文中進一步描述的)配體結合，具體地能夠抑制或阻斷(完全或部分地，如本文中進一步描述的)HRG對HER3的結合。在一個具體但非限定性方面，二聚化_阻斷性氨基酸序列(或二聚化-阻斷性ISV)為氨基酸序列(或ISV)，所述氨基酸序列例如和具體地在實施例2 (部分2. 9)和實施例8中描述的測定中與氨基酸序列17B05(SEQ ID NO 13)競爭對HER3的結合和/或能夠交叉阻斷(如本文中定義的)17B05對HER3的結合。此類二聚化-阻斷性ISV的一些優選但非限定性實例為本文中進一步描述的“17B05-樣序列”。此類17B05-樣序列中的至少一些也是能夠阻斷/抑制(轉)磷酸化以及配體/HRG結合的本發明的ISV的非限定性實例。本發明提供了氨基酸序列，所述氨基酸序列是針對(如本文中定義的)HER3的并且能夠結合HER3的結構域II。此類氨基酸序列在本文中也稱為“結構域II-結合氨基酸序列”或“結構域II-結合構建塊”。優選地，此類結構域II-結合氨基酸序列為ISV(如本文中所描述的)，在該情況下它們也稱為“結構域II-結合ISV”。優選地，任何結構域II-結合氨基酸序列、結構域II-結合構建塊或結構域II-結合ISV是這樣的序列它們結合HER3的結構域II，其可利用本領域技術人員已知的任何適當的測定，例如，利用表位競爭或結構域交換測定(例如如本文中所描述的)來測定。優選地，對結構域II的結合能力可通過如實施例8中描述的對嵌合HER3蛋白的結合來測定，例如通過用雞HER3結構域交換人HER3結構域來測定。
由本發明提供的結構域II-結合氨基酸序列/ISV或結構域II-結合構建塊/ISV還可具有對配體/HRG結合(具體地，它們可在有限/部分的程度上能夠抑制或阻斷配體/HRG對HER3的結合)和/或對HER3的(異)二聚化的作用(所述作用可以是有限的/部分的或更顯著的)。在 一個具體的但非限定性的方面，(一些)“結構域II-結合氨基酸序列”或“結構域II-結合構建塊”可以是(和優選也是)這樣的序列，它們能夠例抑制或阻斷HER3磷酸化(參見實施例10)，如在實施例10中使用的磷酸化測定中。優選地，任何結構域II-結合氨基酸序列或結構域II-結合構建塊或結構域II-結合ISV是這樣的序列它們具有阻斷活性，即部分或完全地阻斷或抑制HRG介導的HER3磷酸化，這可利用本領域技術人員已知的任何適當的測定，例如利用任何適當的磷酸化測定，例如本文中所描述的HER3磷酸化測定、AKT磷酸化測定或ERK1/2磷酸化測定來測定。優選地，磷酸化的阻斷活性或抑制能力利用如實施例10中描述的HER3磷酸化測定來測定。優選地，ISV具有阻斷活性或抑制MCF-7細胞中配體(例如HRGl-βΙ)誘導的PHER3磷酸化的能力，IC50低于600nM,但優選地低于500nM、400nM、300nM、200nM、IOOnM或
甚至更低。-例如，18G11-樣ISV在該測定中具有阻斷活性或競爭能力，IC50低于150nM，更優選，低于ΙΟΟηΜ、90nM、80nM或甚至更低，例如低于70nM或60nM、50nM或40nM或更優選低于35nM，例如低于20nM或15nM、14nM、13nM、12nM或更優選低于llnM.-例如，34C07-樣ISV在該測定中具有阻斷活性或競爭能力，IC50低于150nM，更優選，低于ΙΟΟηΜ、90nM、80nM或甚至更低，例如低于70nM或60nM、50nM或40nM或更優選低于35nM，例如低于20nM或16nM、15nM、14nM、13nM或更優選低于12nM。優選地，磷酸化的阻斷活性或抑制能力利用如實施例10. I中描述的AKT磷酸化測定來測定。優選地，ISV具有阻斷活性或抑制MCF-7細胞中配體(例如HRGl-βΙ)誘導的Akt-磷酸化的能力，IC50低于600nM，但優選地為500nM, 400nM, 300nM, 200nM, 150nM或甚至更低。-例如，18G11-樣ISV在該測定中具有阻斷活性或競爭能力，IC50低于150nM，更優選低于140nM。-例如，34C07-樣ISV在該測定中具有阻斷活性或競爭能力，IC50低于150nM，更優選，低于IOOnM或90nM、80nM、70nM、60nM或更優選低于50nM。優選地，磷酸化的阻斷活性或抑制能力利用實施例10. 2中描述的ERK1/2磷酸化測定來測定。優選地，ISV具有阻斷活性或抑制MCF-7細胞中配體(例如HRGl-βΙ)誘導的ERKl/2-磷酸化的能力，IC50M低于600nM，但優選地為500nM、400nM、300nM、200nM、150nM
或甚至更低。-例如，34C07-樣ISV在該測定中具有阻斷活性或競爭能力，IC50低于150nM，例如低于120nM。在一個具體但非限定性方面，結構域II-結合氨基酸序列(或結構域II-結合ISV)為氨基酸序列(或ISV)，所述氨基酸序列例如和具體地在實施例2 (部分2. 9)中描述的測定中與氨基酸序列18G11(SEQ ID NO :16)和/或與氨基酸序列34C07 (SEQ ID NO :18)競爭對HER3的結合和/或能夠交叉阻斷(如本文中定義的)18G11和/或34C07對HER3的結合。同樣地，在一個具體但非限定性方面，結構域II-結合氨基酸序列能夠抑制或阻斷HER3磷酸化(參見實施例9和10)，例如在實施例10中使用的磷酸化測定中，優選基本上不阻斷或顯著抑制配體結合。此類結構域II-結合ISV的一些優選但非限定性實例為如本文中進一步描述的“ 18G11-樣序列”和“ 34C07-樣序列”。在這些之中，一些34C07-樣序列為不僅結合結構域II而且還在有限/部分程度上能夠抑制配體/HER3結合的本發明的ISV的實例。同樣地，在本說明書和權利要求中，如下定義下列術語A) 21F06-樣序列“21F06_ 樣序列”、“21F06-樣 ISV” 或 “21F06-樣構建塊”被定義為ISV(如本文中所描述的)，其包含a)⑶Rl，其包含如下氨基酸序列或基本上由其組成(i)氨基酸序列LNAMG (SEQ IDNO 67)或(ii)與氨基酸序列LNAMG僅具有3、2或I個氨基酸差異(如本文中定義的)的氨基酸序列；和/或·b)⑶R2，其包含如下氨基酸序列或基本上由其組成(i)氨基酸序列AIDffSDGNKDYADSVKG(SEQ ID NO 97)或(ii)與氨基酸序列 AIDWSDGNKDYADSVKG 具有至少80%，例如至少85%，例如至少90%或超過95%的序列同一性的氨基酸序列；或(iii)與氨基酸序列AIDWSDGNKDYADSVKG僅具有7、6、5、4、3、2或I個氨基酸差異(如本文中定義的)的
氨基酸序列；和/或c)⑶R3，其包含如下氨基酸序列或基本上由其組成(i)氨基酸序列DTPPWGPMIYIESYDS(SEQ ID NO :127)或(ii)與氨基酸序列 DTPPWGPMIHESYDS 具有至少80%，例如至少85%，例如至少90%或超過95%的序列同一性的氨基酸序列；或(iii)與氨基酸序列DTPPWGPMIHESYDS僅具有7、6、5、4、3、2或I個氨基酸差異(如本文中定義的)的
氨基酸序列；其中存在于這樣的ISV中的構架序列是如本文中進一步描述的，并且其中⑶R1、⑶R2和⑶R3優選使得21R)6-樣ISV具有阻斷活性，例如如上所述，部分或完全地阻斷HRG對HER3的結合，和/或在HER3磷酸化測定和/或pAKT磷酸化測定和/或ERK1/2磷酸化測定(全都如上文中所描述的)中具有阻斷活性或抑制磷酸化的能力。如本文中還提及的，(一些)21F06_樣序列可以是(和優選地也是)這樣的序列它們能夠例抑制或阻斷HER3磷酸化(參見實施例9和10)，如在實施例10中使用的磷酸化測定中。優選地，在這樣的21R)6-樣序列中，⑶Rl和⑶R2分別如在a)和b)下所定義的；或CDRl和CDR3分別如在a)和c)下所定義的；或CDR2和CDR3分別如在b)和c)所定義的。更優選地，在這樣的21F06-樣序列中，CDRl、CDR2和CDR3全都分別如在a)、b)和c)下所定義的。再次地，在這樣的21R)6-樣序列中，⑶R1、⑶R2和⑶R3優選使得21R)6_樣ISV具有阻斷活性，例如如上所述，部分或完全地阻斷HRG對HER3的結合，和/或在HER3磷酸化測定和/或PAKT磷酸化測定和/或ERK1/2磷酸化(全都如上文中所描述的)測定中具有阻斷活性或抑制磷酸化的能力。例如，在這樣的21R)6_樣序列中ADRl可包含氨基酸序列LNAMG或基本上由所述序列組成(CDR2和CDR3分別如在b)和c)下所定義的)；和/或CDR2可包含氨基酸序列AIDWSDGNKDYADSVKG或基本上由所述序列組成(⑶Rl和⑶R3分別如在a)和c)下所定義的)；和/或⑶R3可包含氨基酸序列DTPPWGPMIHESYDS或基本上由所述序列組成(CDR1和CDR2分別如在a)和b)下所定義的)。具體地，當21F06-樣序列是根據該方面時CDR1可包含氨基酸序列LNAMG或基本上由所述序列組成并且CDR2可包含氨基酸序列AIDWSDGNKDYADSVKG或基本上由所述序列組成(CDR3如上文中在c)下所定義的)；和/或CDRl可包含氨基酸序列LNAMG或基本上由所述序列組成并且CDR3可包含氨基酸序列DTPPWGPMIHESYDS或基本上由所述序列組成(⑶R2如上文中在b)下所定義的)；和/或⑶R2可包含氨基酸序列AIDWSDGNKDYADSVKG或基本上由所述序列組成，并且⑶R3可包含氨基酸序列DTPPWGPMIHESYDS或基本上由所述序列組成(⑶Rl如上文中在a)下所定義的)。再次地，在這樣的·21R)6-樣序列中，CDR1、CDR2和CDR3優選使得21R)6_樣ISV具有阻斷活性，例如如上所述，部分或完全地阻斷HRG對HER3的結合，和/或在HER3磷酸化測定和/或PAKT磷酸化測定和/或ERK1/2磷酸化測定(全都如上文中所描述的)中具有阻斷活性或抑制磷酸化的能力。在特別優選的方面，"21F06-樣序列”、“21F06-樣ISV”或"21F06-樣構建塊”為ISV，其包含d)⑶Rl，其為(i)氨基酸序列LNAMG或(ii)與氨基酸序列LNAMG僅具有3、2或I個氨基酸差異(如本文中定義的)的氨基酸序列；和/或e)CDR2，其為⑴氨基酸序列AIDWSDGNKDYADSVKG或(ii)與氨基酸序列AIDWSDGNKDYADSVKG具有至少80%，例如至少85%，例如至少90%或超過95%的序列同一性的氨基酸序列；或(iii)與氨基酸序列AIDWSDGNKDYADSVKG僅具有7、6、5、4、3、2或I個氨基酸差異(如本文中定義的)的氨基酸序列；和/或f)CDR3，其為⑴氨基酸序列DTPPWGPMHIESYDS或(ii)與氨基酸序列DTPPWGPMIYIESYDS具有至少80%，例如至少85%，例如至少90%或超過95%的序列同一性的氨基酸序列；或(iii)與氨基酸序列DTPPWGPMIHESYDS僅具有7、6、5、4、3、2或I個氨基酸差異(如本文中定義的)的氨基酸序列；其中存在于這樣的ISV中的構架序列是如本文中進一步描述的，并且其中⑶R1、⑶R2和⑶R3優選地使得21R)6-樣ISV具有阻斷活性，例如如上所述，部分或完全地阻斷HRG對HER3的結合，和/或在HER3磷酸化測定和/或pAKT磷酸化測定和/或ERKI/2磷酸化測定(全都如上文中所描述的)中具有阻斷活性或抑制磷酸化的能力。優選地，在根據該特別優選方面的21R)6-樣序列中，CDRl和CDR2分別如d)和e)下所定義的；或CDRl和CDR3分別如在d)和f)下所定義的；或CDR2和CDR3分別如在e)和f)下所定義的。更優選地，在這樣的21R)6-樣序列中，⑶R1、⑶R2和⑶R3全都分別如在d)、e)和f)下所定義的。再次地，在這樣的21R)6-樣序列中，CDRl、CDR2和CDR3優選使得21R)6_樣ISV具有阻斷活性，例如如上所述，部分或完全地阻斷HRG對HER3的結合，和/或在HER3磷酸化測定和/或pAKT磷酸化測定和/或ERK1/2磷酸化測定(全都如上文中所描述的)中具有阻斷活性或抑制磷酸化的能力。例如，在根據該特別優選方面的21R)6_樣序列中CDR1為氨基酸序列LNAMG (CDR2和CDR3分別如在e)和f)下所定義的)；和/或CDR2為氨基酸序列AIDWSDGNKDYADSVKG (CDR1和CDR3分別如在d)和f)下所定義的)；和/或CDR3為氨基酸序列DTPPWGPMIYIESYDS (CDR1和CDR2分別如在d)和e)下所定義的)。具體地，當21R)6-樣序列根據該方面時CDR1為氨基酸序列LNAMG并且CDR2為氨基酸序列AIDWSDGNKDYADSVKG (CDR3如上文中在f)下所定義的);和/或CDRl為氨基酸序列LNAMG并且⑶R3為氨基酸序列DTPPWGPMIHESYDS (⑶R2如上文中在e)下所定義的)；和/或⑶R2為氨基酸序列AIDWSDGNKDYADSVKG并且CDR3為DTPPWGPMIHESYDS (CDR1如上文中在d)下所定義的)。再次地，在這樣的21R)6-樣序列中，⑶R1XDR2和⑶R3優選地使得21R)6_樣ISV具有阻斷活性，例如如上所述，部分或完全地阻斷HRG對HER3的結合，和/或在HER3磷酸化測定和/或PAKT磷酸化測定和/或ERK1/2磷酸化測定(全都如上文中所描述的)中具有阻斷活性或抑制磷酸化的能力。在特別優選的21R)6_樣序列中ADRl為氨基酸序列LNAMG，⑶R2為氨基酸序列AIDWSDGNKDYADSVKG ;以及 CDR3 為氨基酸序列 DTPPWGPMIHESYDS。在該段落A)中描述的所有21R)6_樣序列中，構架序列可以如本文中進一步描述的。優選地,構架序列是這樣的序列構架序列與21F06的構架序列具有至少80%，例如至少85%，例如至少90%，例如至少95%的序列同一性(這例如可通過在不考慮⑶R的情況下,測定給定的序列與21F06的序列的序列同一性的總體程度來測定)。再次地，存在于給定的序列中的⑶R與構架的組合優選地使得所得的21R)6-樣ISV具有阻斷活性，例如如上所述，部分或完全地阻斷HRG對HER3的結合，和/或在HER3磷酸化測定和/或pAKT磷酸化測定 和/或ERK1/2磷酸化測定(全都如上文中所描述的)中具有阻斷活性或抑制磷酸化的能力。在一個具體方面，21F06-樣序列為與21F06的氨基酸序列(SEQ ID NO 22)具有至少70%、例如至少80%，例如至少85%，例如至少90%或超過95%的序列同一性的ISV。例如，在根據該方面的21R)6-樣序列中，CDR可根據上述特別優選的方面，并且可以具體地(但非限制性地)為 LNAMG (CDRl) ；AlDffSDGNKDYADSVKG (CDR2);和 DTPPWGPMIHESYDS (CDR3)。再次地，優選地，存在于這樣的21R)6-樣ISV中的⑶R與構架的組合使得所得的21R)6-樣ISV具有阻斷活性，例如如上所述，部分或完全地阻斷HRG對HER3的結合，和/或在HER3磷酸化測定和/或PAKT磷酸化測定和/或ERK1/2磷酸化測定(全都如上文中所描述的)中具有阻斷活性或抑制磷酸化的能力。在一個具體方面，任何21R)6_樣序列可以是人源化和/或經序列優化的序列，如本文中進一步描述的。B)04C07-樣序列“04C07_ 樣序列”、“04C07-樣 ISV” 或“04C07-樣構建塊”被定義為ISV(如本文中所描述的)，其包含a)⑶R1，其包含如下氨基酸序列或基本上由所述序列組成(i)氨基酸序列氨基酸序列SYPMS (SEQ ID NO 60)或(ii)與氨基酸序列SYPMS僅具有3、2或I個氨基酸差異(如本文中定義的)的氨基酸序列；和/或b)⑶R2，其包含如下氨基酸序列或基本上由所述序列組成(i)氨基酸序列TVSPGGITTSYADSVKG(SEQ ID NO 90)或(ii)與氨基酸序列 TVSPGGITTSYADSVKG 具有至少80%，例如至少85%，例如至少90%或超過95%的序列同一性的氨基酸序列；或(iii)與氨基酸序列TVSPGGITTSYADSVKG僅具有7、6、5、4、3、2或I個氨基酸差異(如本文中定義的)的
氨基酸序列；和/或c)⑶R3，其包含如下氨基酸序列或基本上由所述序列組成(i)氨基酸序列DLNN(SEQ ID NO :120)或(ii)與氨基酸序列DLNN具有至少50%，例如至少75%的序列同一性的氨基酸序列；或(iii)與氨基酸序列DLNN僅具有2或I個氨基酸差異(如本文中定義的)的氨基酸序列；
其中存在于這樣的ISV中的構架序列是如本文中進一步描述的，并且其中⑶R1、⑶R2和⑶R3優選使得04C07-樣ISV具有阻斷活性，例如如上所述，部分或完全地阻斷HRG對HER3的結合，和/或在HER3磷酸化測定和/或pAKT磷酸化測定和/或ERK1/2磷酸化測定(全都如上文中所描述的)中具有阻斷活性或抑制磷酸化的能力。優選地，在這樣的04C07-樣序列中，CDRl和CDR2分別如在a)和b)下所定義的；或CDRl和CDR3分別如在a)和c)下所定義的；或CDR2和CDR3分別如在b)和c)下所定義的。更優選地，在這樣的04C07-樣序列中，⑶R1XDR2和⑶R3全都分別如在a)、b)和c)下所定義的。再次地，在這樣的04C07-樣序列中，⑶R1、⑶R2和⑶R3優選使得04C07-樣ISV具有阻斷活性，例如如上所述，部分或完全地阻斷HRG對HER3的結合，和/或在HER3磷酸化測定和/或PAKT磷酸化測定和/或ERK1/2磷酸化測定(全都如上文中所描述的)中具有阻斷活性或抑制磷酸化的能力。
例如，在這樣的04C07-樣序列中ADRl可包含氨基酸序列SYPMS或基本上由所述序列組成(CDR2和CDR3分別如在b)和c)下所定義的)；和/或CDR2可包含氨基酸序列TVSPGGITTSYADSVKG或基本上由所述序列組成(⑶Rl和⑶R3分別如在a)和c)下所定義的)；和/或⑶R3可包含氨基酸序列DLNN或基本上由所述序列組成(⑶Rl和⑶R2分別如在a)和b)下所定義的)。具體地，當04C07-樣序列根據該方面時CDR1可包含氨基酸序列SYPMS或基本上由所述序列組成并且⑶R2可包含氨基酸序列TVSPGGITTSYADSVKG或基本上由所述序列組成(CDR3如上文中在c)下所定義的)；和/或CDRl可包含氨基酸序列SYPMS或基本上由所述序列組成并且⑶R3可包含氨基酸序列DLNN或基本上由所述序列組成(⑶R2如上文中在b)下所定義的)；和/或⑶R2可包含氨基酸序列TVSPGGITTSYADSVKG或基本上由所述序列組成，并且CDR3可包含氨基酸序列DLNN或基本上由所述序列組成(⑶Rl如上文中在a)下所定義的)。再次地，在這樣的04C07-樣序列中，⑶R1XDR2和⑶R3優選使得04C07-樣ISV具有阻斷活性，例如如上所述，部分或完全地阻斷HRG對HER3的結合，和/或在HER3磷酸化測定和/或pAKT磷酸化測定和/或ERK1/2磷酸化測定(全都如上文中所描述的)中具有阻斷活性或抑制磷酸化的能力。在特別優選的方面，“04C07-樣序列”、“04C07-樣ISV”或“04C07-樣構建塊”為ISV，其包含d)⑶R1，其為(i)氨基酸序列SYPMS或(ii)與氨基酸序列SYPMS僅具有3、2或I個氨基酸差異(如本文中定義的)的氨基酸序列；和/或e)CDR2,其為⑴氨基酸序列TVSPGGITTSYADSVKG或(ii)與氨基酸序列TVSPGGITTSYADSVKG具有至少80%，例如至少85%，例如至少90%或超過95%的序列同一性的氨基酸序列；或(iii)與氨基酸序列TVSPGGITTSYADSVKG僅具有7、6、5、4、3、2或I個氨基酸差異(如本文中定義的)的氨基酸序列；和/或f)⑶R3，其為⑴氨基酸序列DLNN或(ii)與氨基酸序列DLNN具有至少50%，例如至少75%的序列同一性的氨基酸序列；或(iii)與氨基酸序列DLNN僅具有2或I個氨基酸差異(如本文中定義的)的氨基酸序列；其中存在于這樣的ISV中的構架序列是如本文中進一步描述的，并且其中⑶R1、⑶R2和⑶R3優選地使得04C07-樣ISV具有阻斷活性，例如如上所述，部分或完全地阻斷HRG對HER3的結合，和/或在HER3磷酸化測定和/或pAKT磷酸化測定和/或ERKI/2磷酸化測定(全都如上文中所描述的)中具有阻斷活性或抑制磷酸化的能力。優選地，在根據該特別優選方面的04C07-樣序列中，⑶Rl和⑶R2分別如d)和e)下所定義的；或CDRl和CDR3分別如在d)和f)下所定義的；或CDR2和CDR3分別如在e)和f)下所定義的。更優選地，在這樣的04C07-樣序列中，⑶R1、⑶R2和⑶R3全都分別如在d)、e)和f)下所定義的。再次地，在這樣的04C07-樣序列中，⑶R1、⑶R2和⑶R3優選使得04C07-樣ISV具有阻 斷活性，例如如上所述，部分或完全地阻斷HRG對HER3的結合，和/或在HER3磷酸化測定和/或pAKT磷酸化測定和/或ERK1/2磷酸化測定(全都如上文中所描述的)中具有阻斷活性或抑制磷酸化的能力。例如，在根據該特別優選方面的04C07-樣序列中CDR1為氨基酸序列SYPMS (CDR2和CDR3分別如在e)和f)下所定義的)；和/或CDR2為氨基酸序列TVSPGGITTSYADSVKG (⑶Rl和⑶R3分別如在d)和f)下所定義的);和/或⑶R3為氨基酸序列DLNN(⑶Rl和⑶R2分別如在d)和e)下所定義的)。具體地，當04C07-樣序列根據該方面時KDRl為氨基酸序列SYPMS并且⑶R2為氨基酸序列TVSPGGITTSYADSVKG (⑶R3如上文中在f)下所定義的)；和/或CDRl為氨基酸序列SYPMS并且CDR3為氨基酸序列DLNN(CDR2如上文中在e)下所定義的);和/或⑶R2為氨基酸序列TVSPGGITTSYADSVKG并且⑶R3為DLNN(⑶Rl如上文中在d)下所定義的)。再次地，在這樣的04C07-樣序列中，⑶R1、⑶R2和⑶R3優選地使得04C07-樣ISV具有阻斷活性，例如如上所述，部分或完全地阻斷HRG對HER3的結合，和/或在HER3磷酸化測定和/或pAKT磷酸化測定和/或ERKI/2磷酸化測定(全都如上文中所描述的)中具有阻斷活性或抑制磷酸化的能力。在特別優選的04C07-樣序列中ADRl為氨基酸序列SYPMS，⑶R2為氨基酸序列TVSPGGITTSYADSVKG ；以及 CDR3 為氨基酸序列 DLNN。在該段落B)中描述的所有04C07-樣序列中，構架序列可以如本文中進一步描述的。優選地，構架序列是這樣的序列構架序列與04C07的構架序列具有至少80%，例如至少85%，例如至少90%，例如至少95%的序列同一性(這例如可通過在不考慮⑶R的情況下，測定給定的序列與04C07的序列的序列同一性的總體程度來測定)。再次地，存在于給定的序列中的CDR與構架的組合優選地使得所得的04C07-樣ISV具有阻斷活性，例如如上所述，部分或完全地阻斷HRG對HER3的結合，和/或在HER3磷酸化測定和/或pAKT磷酸化測定和/或ERK1/2磷酸化測定(全都如上文中所描述的)中具有阻斷活性或抑制磷酸化的能力。在一個具體方面，04C07-樣序列為與氨基酸序列04C07(SEQ ID NO :15)具有至少70%、例如至少80%、例如至少85%，例如至少90%或超過95%的序列同一性的ISV。例如，在根據該方面的04C07-樣序列中，CDR可根據上述特別優選方面，并且可以具體地(但非限制性地)為 SYPMS (CDRl) ;TVSPGGITTSYADSVKG(CDR2)和 DLNN(CDR3)。再次地，優選地，存在于這樣的04C07-樣ISV中的⑶R和構架的組合優選使得所得的04C07-樣ISV具有阻斷活性，例如如上文中所述，部分或完全地阻斷HRG對HER3的結合，和/或在HER3磷酸化測定和/或pAKT磷酸化測定和/或ERK1/2磷酸化測定(全都如上文中所描述的)中具有阻斷活性或抑制磷酸化的能力。在一個具體方面，任何04C07-樣序列可以是人源化和/或序列優化的序列，如本文中進一步描述的。
C) 17B05-樣序列“ 17B05-樣序列”、“ 17B05-樣 ISV，，或 “ 17B05-樣構建塊”被定義為ISV(如本文中所描述的)，其包含a)⑶R1，其包含如下氨基酸序列或基本上由所述序列組成(i)氨基酸序列LNAMA(SEQ ID NO 58)或(ii)與氨基酸序列LNAMA僅具有3、2或I個氨基酸差異(如本文中定義的)的氨基酸序列；和/或b)CDR2，包含如下氨基酸序列或基本上由所述序列組成(i)氨基酸序列GIFGVGSTRYADSVKG(SEQ ID NO 88)或(ii)與氨基酸序列GIFGVGSTRYADSVKG具有至少80%，例如至少85%，例如至少90%或超過95%的序列同一性的氨基酸序列；或(iii)與氨基酸序列GIFGVGSTRYADSVKG僅具有7、6、5、4、3、2或I個氨基酸差異(如本文中定義的)的氨基酸序列；和/或c)CDR3,包含如下氨基酸序列或基本上由所述序列組成(i)氨基酸序列SSVTRGSSDY(SEQ ID NO :118)或(ii)與氨基酸序列SSVTRGSSDY具有至少80%，例如至少85%，例如至少90%或超過95%的序列同一性的氨基酸序列；或(iii)與氨基酸序列SSVTRGSSDY僅具有7、6、5、4、3、2或I個氨基酸差異(如本文中定義的)的氨基酸序列；其中存在于這樣的ISV中的構架序列是如本文中進一步描述的，并且其中⑶R1、⑶R2和⑶R3優選使得17B05-樣ISV具有阻斷活性，例如如上所述，部分或完全地阻斷HRG對HER3的結合，和/或在HER3磷酸化測定和/或pAKT磷酸化測定和/或ERK1/2磷酸化測定中具有阻斷活性或抑制(轉)磷酸化的能力和/或具有阻斷或抑制(異)二聚化的活性(如通過EGFR配體(EGF)誘導的HER3磷酸化測定所測定的)，全都如上文中所描述的。如本文中提及的，(一些)17B05-樣序列可以是(和優選地是)這樣的序列它們能夠例抑制或阻斷(完全或部分地，如本文中進一步描述的)配體結合，具體地能夠抑制或阻斷(完全或部分地，如本文中進一步描述的)HGR對HER3的結合。優選地，在這樣的17B05-樣序列中，⑶Rl和⑶R2分別如在a)和b)下所定義的；或CDRl和CDR3分別如在a)和c)下所定義的；或CDR2和CDR3分別如在b)和c)所定義的。更優選地，在這樣的17B05-樣序列中，CDRl、CDR2和CDR3全都分別如在a)、b)和c)下所定義的。再次地，在這樣的17B05-樣序列中，⑶R1、⑶R2和⑶R3優選使得17B05-樣ISV具有阻斷活性，例如如上所述，部分或完全地阻斷HRG對HER3的結合，和/或在HER3磷酸化測定和/或PAKT磷酸化測定和/或ERK1/2磷酸化測定中具有阻斷活性或抑制(轉)磷酸化的能力和/或具有阻斷或抑制(異)二聚化的活性(如通過EGFR配體(EGF)誘導的HER3磷酸化測定所測定的)，全都如上文中所描述的。例如，在這樣的17B05-樣序列中ADRl可包含氨基酸序列LNAMA或基本上由所述序列組成(CDR2和CDR3分別如在b)和c)下所定義的)；和/或CDR2可包含氨基酸序列GIFGVGSTRYADSVKG或基本上由所述序列組成(⑶Rl和⑶R3分別如在a)和c)下所定義的)；和/或⑶R3可包含氨基酸序列SSVTRGSSDY或基本上由所述序列組成(⑶Rl和⑶R2分別如在a)和b)下所定義的)。具體地，當17B05-樣序列是根據該方面時CDR1可包含氨基酸序列LNAMA或基本上由所述序列組成并且CDR2可包含氨基酸序列GIFGVGSTRYADSVKG或基本上由所述序列組成(CDR3如上文中在c)下所定義的)；和/或CDRl可包含氨基酸序列LNAMA或基本上由所述序列組成并且⑶R3可包含氨基酸序列SSVTRGSSDY或基本上由所述序列組成(CDR2如上文中在b)下所定義的)；和/或CDR2可包含氨基酸序列GIFGVGSTRYADSVKG或基本上由所述序列組成，并且⑶R3可包含氨基酸序列SSVTRGSSDY或基本上由所述序列組成(⑶Rl如上文中在a)下所定義的)。再次地，在這樣的17B05-樣序列中，⑶R1、⑶R2和⑶R3優選使得17B05-樣ISV具有阻斷活性，例如如上所述，部分或完全地阻斷HRG對HER3的結合，和/或在HER3磷酸化測定和/或pAKT磷酸化測定和/或ERK1/2磷酸化測定中具有阻斷活性或抑制(轉)磷酸化的能力和/或具有阻斷或抑制(異)二聚化的活性(如通過EGFR配體(EGF)誘導的HER3磷酸化測定所測定的)，全都如上文中所描述的。在特別優選的方面，“17B05-樣序列”、“17B05-樣ISV”或“17B05-樣構建塊”為 ISV，其包含d)⑶R1，其為(i)氨基酸序列LNAMA或(ii)與氨基酸序列LNAMA僅具有3、2或I個氨基酸差異(如本文中定義的)的氨基酸序列；和/或e)CDR2,其為⑴氨基酸序列GIFGVGSTRYADSVKG或(ii)與氨基酸序列GIFGVGSTRYADSVKG具有至少80%，例如至少85%，例如至少90%或超過95%的序列同一性的氨基酸序列；或(iii)與氨基酸序列GIFGVGSTRYADSVKG僅具有7、6、5、4、3、2或I個氨基酸差異(如本文中定義的)的氨基酸序列；和/或f)CDR3，其為(i)氨基酸序列SSVTRGSSDY或(ii)與氨基酸序列SSVTRGSSDY具有至少80%，例如至少85%，例如至少90%或超過95%的序列同一性的氨基酸序列；或(iii)與氨基酸序列SSVTRGSSDY僅具有7、6、5、4、3、2或I個氨基酸差異(如本文中定義的)的氨基酸序列；其中存在于這樣的ISV中的構架序列是如本文中進一步描述的，并且其中⑶R1、⑶R2和⑶R3優選地使得17B05-樣ISV具有阻斷活性，例如如上所述，部分或完全地阻斷HRG對HER3的結合，和/或在HER3磷酸化測定和/或pAKT磷酸化測定和/或ERKI/2磷酸化測定中具有阻斷活性或抑制(轉)磷酸化的能力和/或具有阻斷或抑制(異)二聚化的活性(如通過EGFR配體(EGF)誘導的HER3磷酸化測定所測定的)，全都如上文中所描述的。優選地，在根據該特別優選方面的17B05-樣序列中，⑶Rl和⑶R2分別如d)和e)下所定義的；或CDRl和CDR3分別如在d)和f)下所定義的；或CDR2和CDR3分別如在e)和f)下所定義的。更優選地，在這樣的17B05-樣序列中，⑶R1、⑶R2和⑶R3全都分別如在d)、e)和f)下所定義的。再次地，在這樣的17B05-樣序列中，⑶R1、⑶R2和⑶R3優選使得17B05-樣ISV具有阻斷活性，例如如上所述，部分或完全地阻斷HRG對HER3的結合，和/或在HER3磷酸化測定和/或pAKT磷酸化測定和/或ERK1/2磷酸化測定中具有阻斷活性或抑制(轉)磷酸化的能力和/或具有阻斷或抑制(異)二聚化的活性(如通過EGFR配體(EGF)誘導的HER3磷酸化測定所測定的)，全都如上文中所描述的。例如，在根據該特別優選方面的17B05-樣序列中ADRl為氨基酸序列LNAMA (⑶R2和⑶R3分別如在e)和f)下所定義的)；和/或⑶R2為氨基酸序列GIFGVGSTRYADSVKG(⑶Rl和⑶R3分別如在d)和f)下所定義的);和/或⑶R3為氨基酸序列SSVTRGSSDY(⑶Rl和CDR2分別如在d)和e)下所定義的)。具體地，當17B05-樣序列根據該方面時CDR1為氨基酸序列LNAMA并且CDR2為氨基酸序列GIFGVGSTRYADSVKG(CDR3如上文中在f)下所定義的)；和/或⑶Rl為氨基酸序列LNAMA并且⑶R3為氨基酸序列SSVTRGSSDY (⑶R2如上文中在e)下所定義的)；和/或⑶R2為氨基酸序列GIFGVGSTRYADSVKG并且⑶R3為SSVTRGSSDY (CDR1如上文中在d)下所定義的)。再次地，在這樣的17B05-樣序列中，CDR1、⑶R2和⑶R3優選地使得17B05-樣ISV具有阻斷活性，例如如上所述，部分或完全地阻斷HRG對HER3的結合，和/或在HER3磷酸化測定和/或pAKT磷酸化測定和/或ERK1/2磷酸化測定中具有阻斷活性或抑制(轉)磷酸化的能力和/或具有阻斷或抑制(異)二聚化的活性(如通過EGFR配體(EGF)誘導的HER3磷酸化測定所測定的)，全都如上文中所描述的。在特別優選的17B05-樣序列中ADRl為氨基酸序列LNAMA，⑶R2為氨基酸序列GIFGVGSTRYADSVKG ;以及 CDR3 為氨基酸序列 SSVTRGSSDY。在該段落C)中描述的所有17B05-樣序列中，構架序列可以如本文中進一步描述的。優選地，構架序列是這樣的序列構架序列與17B05的構架序列具有至少80%，例如至少85%，例如至少90%，例如至少95%的序列同一性(這例如可通過在不考慮⑶R的情況下,測 定給定的序列與17B05的序列的序列同一性的總體程度來測定)。再次地，存在于給定的序列中的⑶R與構架的組合優選地使得所得的17B05-樣ISV具有阻斷活性，例如如上所述，部分或完全地阻斷HRG對HER3的結合，和/或在HER3磷酸化測定和/或pAKT磷酸化測定和/或ERK1/2磷酸化測定中具有阻斷活性或抑制(轉)磷酸化的能力和/或具有阻斷或抑制(異)二聚化的活性(如通過EGFR配體(EGF)誘導的HER3磷酸化測定所測定的)，全都如上文中所描述的。在一個具體方面，17B05-樣序列為與17B05的氨基酸序列(SEQ ID NO 13)具有至少70%、例如至少80%，例如至少85%，例如至少90%或超過95%的序列同一性的ISV。例如，在根據該方面的17B05-樣序列中，CDR可根據上述特別優選的方面，并且可以具體地(但非限制性地)為 LNAMA (CDRl) !GIFGVGSTRYADSVKG (CDR2);和 SSVTRGSSDY (CDR3)。再次地，優選地，存在于這樣的17B05-樣ISV中的⑶R與構架的組合使得所得的17B05-樣ISV具有阻斷活性，例如如上所述，部分或完全地阻斷HRG對HER3的結合，和/或在HER3磷酸化測定和/或pAKT磷酸化測定和/或ERK1/2磷酸化測定中具有阻斷活性或抑制(轉)磷酸化的能力和/或具有阻斷或抑制(異)二聚化的活性(如通過EGFR配體(EGF)誘導的HER3磷酸化測定所測定的)，全都如上文中所描述的。在一個具體方面，任何17B05-樣序列可以是人源化和/或經序列優化的序列，如本文中進一步描述的。D) 18G11-樣序列“ 18G11-樣序列”、“ 18G11-樣 ISV” 或 “ 18G11-樣構建塊”被定義為ISV(如本文中所描述的)，其包含a)⑶R1，其包含如下氨基酸序列或基本上由所述序列組成(i)氨基酸序列氨基酸序列INAMG(SEQ ID NO :61)或(ii)與氨基酸序列INAMG僅具有3、2或I個氨基酸差異(如本文中定義的)的氨基酸序列；和/或b)⑶R2，其包含如下氨基酸序列或基本上由所述序列組成(i)氨基酸序列LITSSDTTDYAESVEG(SEQ ID NO :91)或(ii)與氨基酸序列 LITSSDTTDYAESVEG具有至少 80%，例如至少85%，例如至少90%或超過95%的序列同一性的氨基酸序列；或(iii)與氨基酸序列LITSSDTTDYAESVEG僅具有7、6、5、4、3、2或I個氨基酸差異(如本文中定義的)的氨基酸序列；和/或
c)⑶R3，其包含如下氨基酸序列或基本上由所述序列組成(i)氨基酸序列DHYSMGVPEKRVIM(SEQ ID NO :121)或(ii)與氨基酸序列 DHYSMGVPEKRV頂具有至少 80%，例如至少85%，例如至少90%或超過95%的序列同一性的氨基酸序列；或(iii)與氨基酸序列DHYSMGVPEKRVM僅具有7、6、5、4、3、2或I個氨基酸差異(如本文中定義的)的氨基酸序列；其中存在于這樣的ISV中的構架序列是如本文中進一步描述的，并且其中⑶R1、⑶R2和⑶R3優選使得18G11-樣ISV具有結構域II結合活性、阻斷活性或在HER3磷酸化測定和/或PAKT磷酸化測定(全都如上文中所描述的)中具有抑制磷酸化的能力。如本文中提及的，(一些)18G11-樣序列可對配體/HRG結合(具體地，它們可在有限/部分的程度上能夠抑制或阻斷配體/HRG對HER3的結合)和/或對HER3的(異)二聚化具有作用(所述作用可以是有限的/部分的或更顯著的)。優選地，在這樣的18G11-樣序列中，⑶Rl和⑶R2分別如在a)和b)下所定義的；或CDRl和CDR3分別如在a)和c)下所定義的；或CDR2和CDR3分別如在b)和c)下所定 義的。更優選地，在這樣的18G11-樣序列中，⑶R1XDR2和⑶R3全都分別如在a)、b)和c)下所定義的。再次地，在這樣的18G11-樣序列中，⑶R1、⑶R2和⑶R3優選使得18G11-樣ISV具有結構域II結合活性、阻斷活性或在HER3磷酸化測定和/或pAKT磷酸化測定(全都如上文中所描述的)中具有抑制磷酸化的能力。例如，在這樣的18G11-樣序列中ADRl可包含氨基酸序列INAMG或基本上由所述序列組成(CDR2和CDR3分別如在b)和c)下所定義的)；和/或CDR2可包含氨基酸序列LITSSDTTDYAESVEG或基本上由所述序列組成(⑶Rl和⑶R3分別如在a)和c)下所定義的)；和/或⑶R3可包含氨基酸序列DHYSMGVPEKRVIM或基本上由所述序列組成(CDR1和CDR2分別如在a)和b)下所定義的)。具體地，當18G11-樣序列根據該方面時CDR1可包含氨基酸序列INAMG或基本上由所述序列組成并且CDR2可包含氨基酸序列LITSSDTTDYAESVEG或基本上由所述序列組成(⑶R3如上文中在c)下所定義的)；和/或CDRl可包含氨基酸序列INAMG或基本上由所述序列組成并且CDR3可包含氨基酸序列DHYSMGVPEKRV頂或基本上由所述序列組成(⑶R2如上文中在b)下所定義的)；和/或⑶R2可包含氨基酸序列LITSSDTTDYAESVEG或基本上由所述序列組成，并且⑶R3可包含氨基酸序列DHYSMGVPEKRVM或基本上由所述序列組成(⑶Rl如上文中在a)下所定義的)。再次地，在這樣的18G11-樣序列中，CDR1、CDR2和CDR3優選使得18G11-樣ISV具有結構域II結合活性、阻斷活性或在HER3磷酸化測定和/或pAKT磷酸化測定(全都如上文中所描述的)中具有抑制磷酸化的能力。在特別優選的方面，“18G11-樣序列”、“18G11-樣ISV”或“18G11-樣構建塊”為ISV，其包含d)⑶R1，其為(i)氨基酸序列INAMG或(ii)與氨基酸序列INAMG僅具有3、2或I個氨基酸差異(如本文中定義的)的氨基酸序列；和/或e)CDR2，其為⑴氨基酸序列LITSSDTTDYAESVEG或(ii)與氨基酸序列LITSSDTTDYAESVEG具有至少80%，例如至少85%，例如至少90%或超過95%的序列同一性的氨基酸序列；或(iii)與氨基酸序列LITSSDTTDYAESVEG僅具有7、6、5、4、3、2或I個氨基酸差異(如本文中定義的)的氨基酸序列；和/或
f)CDR3，其為⑴氨基酸序列DHYSMGVPEKRVM或(ii)與氨基酸序列DHYSMGVPEKRVIM具有至少80%，例如至少85%、例如至少90%或超過95%的序列同一性的氨基酸序列；或(iii)與氨基酸序列DHYSMGVPEKRVM僅具有7、6、5、4、3、2或I個氨基酸差異(如本文中定義的)的氨基酸序列；其中存在于這樣的ISV中的構架序列是如本文中進一步描述的，并且其中⑶R1、⑶R2和⑶R3優選地使得18G11-樣I SV具有結構域II結合活性、阻斷活性或在HER3磷酸化測定和/或PAKT磷酸化測定(全都如上文中所描述的)中具有抑制磷酸化的能力。優選地，在根據該特別優選方面的18G11-樣序列中，⑶Rl和⑶R2分別如在d)和e)下所定義的；或CDRl和CDR3分別如在d)和f)下所定義的；或CDR2和CDR3分別如在e)和f)下所定義的。更優選地，在這樣的18G11-樣序列中，⑶R1、⑶R2和⑶R3全都分別如在d)、e)和f)下所定義的。再次地，在這樣的18G11-樣序列中，CDRl、CDR2和CDR3優選使得18G11-樣ISV具有結構域II結合活性、阻斷活性或在HER3磷酸化測定和/或pAKT磷酸化測定(全都如上文中所描述的)中具有抑制磷酸化的能力。例如，在根據該特別優選方面的18G11-樣序列中ADRl為氨基酸序列INAMG (⑶R2和⑶R3分別如在e)和f)下所定義的);和/或CDR2為氨基酸序列LITSSDTTDYAESVEG (CDR1和CDR3分別如在d)和f)下所定義的)；和/或⑶R3為氨基酸序列DHYSMGVPEKRVM(⑶Rl和⑶R2分別如在d)和e)下所定義的)。具體地，當18G11-樣序列根據該方面時CDR1為氨基酸序列INAMG并且CDR2為氨基酸序列LITSSDTTDYAESVEG (CDR3如上文中在f)下所定義的);和/或CDRl為氨基酸序列INAMG并且⑶R3為氨基酸序列DHYSMGVPEKRVM(⑶R2如上文中在e)下所定義的);和 / 或 CDR2 為氨基酸序列 LITSSDTTDYAESVEG 并且 CDR3 為 DHYSMGVPEKRVM(CDR1 如上文中在d)下所定義的)。再次地，在這樣的18G11-樣序列中，⑶R1XDR2和⑶R3優選地使得18G11-樣ISV具有結構域II結合活性、阻斷活性或在HER3磷酸化測定和/或pAKT磷酸化測定(全都如上文中所描述的)中具有抑制磷酸化的能力。在特別優選的18G11-樣序列中ADRl為氨基酸序列INAMG，⑶R2為氨基酸序列LITSSDTTDYAESVEG ；以及 CDR3 為氨基酸序列 DHYSMGVPEKRVM。在該段落D)中描述的所有18G11-樣序列中，構架序列可以如本文中進一步描述的。優選地，構架序列是這樣的序列構架序列與18G11的構架序列具有至少80%，例如至少85%，例如至少90%，例如至少95%的序列同一性(這例如可通過在不考慮⑶R的情況下，測定給定的序列與18G11的序列的序列同一性的總體程度來測定)。再次地，存在于給定的序列中的CDR與構架的組合優選地使得所得的18G11-樣ISV具有結構域II結合活性、阻斷活性或在HER3磷酸化測定和/或pAKT磷酸化測定(全都如上文中所描述的)中具有抑制磷酸化的能力。在一個具體方面，18G11-樣序列為與氨基酸序列18G11(SEQ ID NO :16)具有至少70%、例如至少80%、例如至少85%，例如至少90%或超過95%的序列同一性的ISV。例如，在根據該方面的18G11-樣序列中，CDR可根據上述特別優選方面，并且可以具體地(但非限制性地)為 INAMG(CDRl) !LITSSDTTDYAESVEG(CDR2)和 DHYSMGVPEKRVM(CDR3)。再次地，優選地，存在于這樣的18G11-樣ISV中的⑶R和構架的組合優選使得所得的18G11-樣ISV具有結構域II結合活性、阻斷活性或在HER3磷酸化測定和/或pAKT磷酸化測定(全都如上文中所描述的)中具有抑制磷酸化的能力。
在一個具體方面，任何18G11-樣序列可以是人源化和/或經序列優化的序列，如本文中進一步描述的。E) 34C07-樣序列“34C07_ 樣序列”、“34C07-樣 ISV” 或 “34C07-樣構律塊”被定義為ISV(如本文中所描述的)，其包含a) ⑶R1，其包含如下氨基酸序列或基本上由所述序列組成(i)氨基酸序列氨基酸序列INAMA(SEQ ID NO 63)或(ii)與氨基酸序列INAMA僅具有3、2或I個氨基酸差異(如本文中定義的)的氨基酸序列；和/或b)⑶R2，其包含如下氨基酸序列或基本上由所述序列組成(i)氨基酸序列EITAGGSTNYADSVKG(SEQ ID NO :93)或(ii)與氨基酸序列EITAGGSTNYADSVKG具有至少80%，例如至少85%，例如至少90%或超過95%的序列同一性的氨基酸序列；或(iii)與氨基酸序列EITAGGSTNYADSVKG僅具有7、6、5、4、3、2或I個氨基酸差異(如本文中定義的)的氨基酸序列；和/或c)⑶R3，其包含如下氨基酸序列或基本上由所述序列組成(i)氨基酸序列DHYTTffDRRSAY (SEQ ID NO :123)或(ii)與氨基酸序列 DHYTTWDRRSAY 具有至少 80%，例如至少85%、例如至少90%或超過95%的序列同一性的氨基酸序列；或(iii)與氨基酸序列DHYTTWDRRSAY僅具有7、6、5、4、3、2或I個氨基酸差異(如本文中定義的)的氨基酸序列；其中存在于這樣的ISV中的構架序列是如本文中進一步描述的，并且其中⑶R1、⑶R2和⑶R3優選使得34C07-樣ISV具有結構域II結合活性、阻斷活性或在HER3磷酸化測定和/或PAKT磷酸化測定和/或ERK1/2磷酸化測定(全都如上文中所描述的)中具有抑制磷酸化的能力。如本文中提及的，(一些)34C07_樣序列可具有對配體/HRG結合(具體地，它們可在有限/部分的程度上能夠抑制或阻斷配體/HRG對HER3的結合)和/或對HER3的(異)二聚化的作用(所述作用可以是有限的/部分的或更顯著的)。具體地，它們可在有限的程度上能夠抑制配體/HRG結合HER3。優選地，在這樣的34C07-樣序列中，⑶Rl和⑶R2分別如在a)和b)下所定義的；或CDRl和CDR3分別如在a)和c)下所定義的；或CDR2和CDR3分別如在b)和c)下所定義的。更優選地，在這樣的34C07-樣序列中，⑶R1XDR2和⑶R3全都分別如在a)、b)和c)下所定義的。再次地，在這樣的34C07-樣序列中，⑶R1、⑶R2和⑶R3優選使得34C07-樣ISV具有結構域II結合活性、阻斷活性或在HER3磷酸化測定和/或pAKT磷酸化測定和/或ERK1/2磷酸化測定(全都如上文中所描述的)中具有抑制磷酸化的能力。例如，在這樣的34C07-樣序列中ADRl可包含氨基酸序列INAMA或基本上由所述序列組成(CDR2和CDR3分別如在b)和c)下所定義的)；和/或CDR2可包含氨基酸序列EITAGGSTNYADSVKG或基本上由所述序列組成(⑶Rl和⑶R3分別如在a)和c)下所定義的)；和/或⑶R3可包含氨基酸序列DHYTTWDRRSAY或基本上由所述序列組成(⑶Rl和⑶R2分別如在a)和b)下所定義的)。具體地，當34C07-樣序列根據該方面時ADRl可包含氨基酸序列INAMA或基本上由所述序列組成并且CDR2可包含氨基酸序列EITAGGSTNYADSVKG或基本上由所述序列組成(CDR3如上文中在c)下所定義的)；和/或CDRl可包含氨基酸序列INAMA或基本上由所述序列組成并且⑶R3可包含氨基酸序列DHYTTWDRRSAY或基本上由所述序列組成(CDR2如上文中在b)下所定義的)；和/或CDR2可包含氨基酸序列EITAGGSTNYADSVKG或基本上由所述序列組成，并且CDR3可包含氨基酸序列DHYTTWDRRSAY或基本上由所述序列組成(CDR1如上文中在a)下所定義的)。再次地，在這樣的34C07-樣序列中，⑶R1、⑶R2和⑶R3優選使得34C07-樣ISV具有結構域II結合活性、阻斷活性或在HER3磷酸化測定和/或pAKT磷酸化測定和/或ERK1/2磷酸化測定(全都如上文中所描述的)中具有抑制磷酸化的能力。在特別優選的方面，“34C07-樣序列”、“34C07-樣ISV”或“34C07-樣構建塊”為ISV，其包含 d)⑶R1，其為(i)氨基酸序列INAMA或(ii)與氨基酸序列INAMA僅具有3、2或I個氨基酸差異(如本文中定義的)的氨基酸序列；和/或e)CDR2,其為⑴氨基酸序列EITAGGSTNYADSVKG或(ii)與氨基酸序列EITAGGSTNYADSVKG具有至少80%，例如至少85%，例如至少90%或超過95%的序列同一性的氨基酸序列；或(iii)與氨基酸序列EITAGGSTNYADSVKG僅具有7、6、5、4、3、2或I個氨基酸差異(如本文中定義的)的氨基酸序列；和/或f)CDR3，其為(i)氨基酸序列 DHYTTWDRRSAY 或(ii)與氨基酸序列 DHYTTWDRRSAY具有至少80%，例如至少85%、例如至少90%或超過95%的序列同一性的氨基酸序列；或
(iii)與氨基酸序列DHYTTWDRRSAY僅具有7、6、5、4、3、2或I個氨基酸差異(如本文中定義的)的氨基酸序列；其中存在于這樣的ISV中的構架序列是如本文中進一步描述的，并且其中⑶R1、⑶R2和⑶R3優選地使得34C07-樣ISV具有結構域II結合活性、阻斷活性或在HER3磷酸化測定和/或PAKT磷酸化測定和/或ERK1/2磷酸化測定(全都如上文中所描述的)中具有抑制磷酸化的能力。優選地，在根據該特別優選方面的34C07-樣序列中，⑶Rl和⑶R2分別如在d)和e)下所定義的；或CDRl和CDR3分別如在d)和f)下所定義的；或CDR2和CDR3分別如在e)和f)下所定義的。更優選地，在這樣的34C07-樣序列中，⑶R1、⑶R2和⑶R3全都分別如在d)、e)和f)下所定義的。再次地，在這樣的34C07-樣序列中，CDRl、CDR2和CDR3優選使得34C07-樣ISV具有結構域II結合活性、阻斷活性或在HER3磷酸化測定和/或pAKT磷酸化測定和/或ERK1/2磷酸化測定(全都如上文中所描述的)中具有抑制磷酸化的能力。例如，在根據該特別優選方面的34C07-樣序列中ADRl為氨基酸序列INAMA (⑶R2和⑶R3分別如在e)和f)下所定義的)；和/或⑶R2為氨基酸序列EITAGGSTNYADSVKG(⑶Rl和CDR3分別如在d)和f)下所定義的);和/或CDR3為氨基酸序列DHYTTWDRRSAY(CDRI和CDR2分別如在d)和e)下所定義的)。具體地，當34C07-樣序列根據該方面時CDR1為氨基酸序列INAMA并且CDR2為氨基酸序列EITAGGSTNYADSVKG(CDR3如上文中在f)下所定義的);和/或CDRl為氨基酸序列INAMA并且CDR3為氨基酸序列DHYTTWDRRSAY(CDR2如上文中在e)下所定義的);和/或⑶R2為氨基酸序列EITAGGSTNYADSVKG并且⑶R3為DHYTTWDRRSAY(⑶Rl如上文中在d)下所定義的)。再次地，在這樣的34C07-樣序列中，CDR1、CDR2和CDR3優選地使得34C07-樣ISV具有結構域II結合活性、阻斷活性或在HER3磷酸化測定和/或PAKT磷酸化測定和/或ERK1/2磷酸化測定(全都如上文中所描述的)中具有抑制磷酸化的能力。
在特別優選的34C07-樣序列中ADRl為氨基酸序列INAMA，⑶R2為氨基酸序列EITAGGSTNYADSVKG ;以及 CDR3 為氨基酸序列 DHYTTWDRRSAY。在該段落E)中描述的所有34C07-樣序列中，構架序列可以如本文中進一步描述的。優選地，構架序列是這樣的序列構架序列與34C07的構架序列具有至少80%，例如至少85%，例如至少90%，例如至少95%的序列同一性(這例如可通過在不考慮⑶R的情況下，測定給定的序列與34C07的序列的序列同一性的總體程度來測定)。再次地，存在于給定的序列中的CDR與構架的組合優選地使得所得的34C07-樣ISV具有結構域II結合活性、阻斷活性或在HER3磷酸化測定和/或pAKT磷酸化測定和/或ERK1/2磷酸化測定(全都如上文中所描述的)中具有抑制磷酸化的能力。在一個具體方面，34C07-樣序列為與氨基酸序列34C07 (SEQ ID NO 18)具有至少70%、例如至少80%、例如至少85%，例如至少90%或超過95%的序列同一性的ISV。例如，在根據該方面的34C07-樣序列中，CDR可根據上述特別優選方面，并且可以具體地(但非限制性地)為 INAMA(CDRl) !EITAGGSTNYADSVKG(CDR2)和 DHYTTWDRRSAY(CDR3)。再次地，優選地，存在于這樣的34⑶7-樣ISV中的⑶R和構架的組合優選使得所得的34C07-樣ISV具有 結構域II結合活性、阻斷活性或在HER3磷酸化測定和/或pAKT磷酸化測定和/或ERK1/2磷酸化測定(全都如上文中所描述的)中具有抑制磷酸化的能力。在一個具體方面，任何34C07-樣序列可以是人源化和/或經序列優化的序列，如本文中進一步描述的。在一個具體方面，任何34C07-樣序列可以是人源化和/或經序列優化的序列，如本文中進一步描述的。所有本文中描述的本發明的氨基酸序列(包括根據本文中提及的具體方面(例如上述段落中提及的方面)的那些氨基酸序列)，所述氨基酸序列可以以如本文中定義的親和力(適當地測量和/或表示為Kd-值(實際或表觀)、Ka-值(實際或表觀)、km-率和/或Iitjff-率或可選擇地測量和/或表示為IC5tl值,如本文中進一步描述的)結合HER3 ;以及包含至少一種這樣的氨基酸序列的化合物和構建體，具體地蛋白質和多肽。具體地，本發明的氨基酸序列和多肽優選地使得它們能夠-以10_5至10_12摩爾/升或更低，優選10_7至10_12摩爾/升或更低以及更優選10_8至I0-12摩爾/升的解離常數(Kd)(即以IO5至IO12升/摩爾或更高，優選IO7至IO12升/摩爾或更高以及更優選IO8至IO12升/摩爾的締合常數(Ka))結合HER3 ；和/或以使它們能夠-以IO2ITV1 至約 IO7MY1，優選 IO3M-1S-1 至 IO7MW 更優選地 IO4MY1 至IO7MW 例如 IO5MY1 至 IO7MY1 的 kon-率結合 HER3 ；和/或以使它們能夠-以Is—1(t1/2=0. 69s)至KTfV1 (提供具有多天的t1/2的幾乎不可逆的復合物)，優選地 IO-2S-1 至 IO-fV1,更優選地 IO-3S-1 至 IO-fV1,例如 IO-4S-1 至 IO-fV1 的 koff 率結合 HER3。優選地，本發明的單價氨基酸序列(或僅包含一個本發明的氨基酸序列的多肽)使得其將以低于500nM，優選低于200nM，更優選地低于ΙΟηΜ，例如低于500pM的親和力結合HER3。根據本文中的進一步描述和實施例，本發明的氨基酸序列或多肽對HER3的結合的一些優選IC50值將變得清楚明了。關于對HER3的結合，本發明的氨基酸序列通常在其氨基酸序列內包含一個或多個氨基酸殘基或一個或多個氨基酸殘基區段(即每一個“區段”包含兩個或更多個彼此相鄰或彼此靠近(即在氨基酸序列的一級或三級結構上)的氨基酸殘基)，通過所述氨基酸殘基或氨基酸殘基區段本發明的氨基酸序列可結合HER3，所述氨基酸殘基或氨基酸殘基區段從而可形成用于結合HER3的“位點”(在本文中也稱為“抗原結合位點”)。由本發明提供的氨基酸序列優選以基本上分離的形式(如本文中定義的)存在，或形成本發明的蛋白質或多肽的部分(如本文中定義的)，其可包含一個或多個本發明的氨基酸序列或基本上由所述序列組成并且其還可任選地包含一個或多個其它氨基酸序列(所有序列任選地通過一個或多個適當的接頭連接)。例如，但非限制性地，一個或多個本發明的氨基酸序列在這樣的蛋白質或多肽中可用作結合單元，所述蛋白質或多肽可以任選地包含一個或多個可用作結合單元的其它氨基酸序列(即針對除HER3外的一個或多個其它靶)，以分別提供本發明的單價、多價或多特異性多肽，全都如上文中所描述的。這樣的蛋 白質或多肽也可以以基本上分離的形式(如本文中定義的)存在。這樣的本發明的氨基酸序列和多肽優選地基本上由不通過二硫鍵連接于任何其它氨基酸序列或鏈的單個氨基酸鏈組成(但可以包含或可以不包含一個或多個分子內二硫橋。例如，已知免疫球蛋白單可變結構域和/或納米抗體-如本文中所描述的-有時可在⑶R3與⑶Rl或FR2之間包含二硫鍵)。然而，應當指出，一個或多個本發明的氨基酸序列可彼此連接或連接于其它氨基酸序列(例如通過二硫橋)以提供還可用于本發明中的肽構建體(例如Fab’片段、F(ab’)2片段、ScFv構建體、“雙鏈抗體”和其它多特異性構建體。參考例如 Holliger 和 Hudson 的綜述，Nat Biotechnol. 2005Sep ；23(9) :1126-36)。一般地，當本發明的氨基酸序列(或包含所述氨基酸序列的化合物、構建體或多肽)意欲用于給受試者施用(例如為了本文中描述的治療和/或診斷目的)時，優選地是非天然存在于所述受試者中的氨基酸序列；或，當其非天然存在于所述受試者時，以基本上分離的形式(如本文中定義的)存在。本領域技術人員也很清楚，對于藥物用途，本發明的氨基酸序列(以及包含氨基酸序列的化合物、構建體和多肽)優選地針對人HER3 ;然而對于獸醫目的，本發明的氨基酸序列和多肽優選針對來自待治療的物種的HER3，或至少與來自待治療的物種的HER3交叉反應。此外，本發明的氨基酸序列可任選地，除至少一個用于結合HER3的結合位點外，包含一個或多個用于結合其它抗原、蛋白質或靶的其它結合位點。本發明的氨基酸序列和多肽，以及包含所述序列或多肽的組合物的功效可使用任何適當的體外測定、基于細胞的測定、體內測定和/或本身公知的動物模型或其任意組合來測試，這取決于牽涉的具體疾病或障礙。適當的測定和動物模型對于本領域技術人員來說是很清楚明了的，例如包括[配體依賴性HER3磷酸化(Wallasch等人(1995)EMBO J14(17) =4267-4275)和異種移植物腫瘤模型(Schoeberl 等人(2009) Sci. Signal. 2(77)ra 31)]以及用于下面實驗部分和本文中引用的現有技術中的測定和動物模型。同樣地，根據本發明，針對來自溫血動物的第一物種的HER3的氨基酸序列和多肽可以顯示或可以不顯示與來自溫血動物的一個或多個其它物種的HER3的交叉反應性。例如，針對人HER3的氨基酸序列和多肽可以顯示或可以不顯示與來自靈長類動物的一個或多個其它物種(例如，但非限制性地，來自獼猴屬的猴子(例如，具體地食蟹猴(成束猴(Macaca fascicularis))和 / 或恒河猴(Macaca mulatta))和狒狒(豚尾狒狒))的 HER3和/或與來自通常用于疾病的動物模型(例如小鼠、大鼠、兔、豬或狗)，具體地與HER3相關的疾病和障礙的動物模型(例如本文中提及的物種和動物模型)中的動物的一個或多個物種的HER3的交叉反應性。在這方面，本領域技術人員清楚這樣的交叉反應性，當存在時，從藥物開發的觀察來看具有有利方面，因為其使得能夠在這樣的疾病模型中測試針對人HER3的氨基酸序列和多肽。更一般地，與來自哺乳動物的多個物種的HER3交叉反應的本發明的氨基酸序列和多肽通常有利地用于獸醫應用，因為其使得能夠跨多個物種測試相同的氨基酸序列或多肽。因此，也包括在本發明的范圍內的是針對來自動物的一個物種的HER3的氨基酸序列和多肽(例如針對人HER3的氨基酸序列和多肽)可用于治療動物的另一個物種，只要氨基酸序列和/或多肽的使用在待治療的物種中提供期望的作用。·本發明在其最廣義上也不特別地限定于本發明的氨基酸和多肽所針對的HER3的特定抗原決定簇、表位、部分、結構域、亞基或構象(適用時)或由上述所界定。例如，氨基酸序列和多肽可以針對或不針對“相互作用位點”(如本文中定義的)。然而，一般假定和希望本發明的氨基酸序列和多肽優選針對相互作用位點(如本文中定義的)，具體地針對Heregulin結合位點和/或異二聚化位點(參見Hsieh和Moasser,同上)。因此,如本文中進一步描述的，在一個優選但非限定性方面，本發明的氨基酸序列和多肽針對HER3配體結合位點和/或針對HER3的異二聚化位點，并且如本文中進一步定義的。應指出，除了Heregulin 外，還已描述了其它 HER3 配體(Sithanandam 和 Anderson(2008)Cancer GeneTherapy,同上)。因此，在另一個優選但非限定性方面，本發明的氨基酸序列和多肽針對Heregulin (在本文中也稱為“HRG”)結合位點和/或針對HER3的異二聚化位點。如上文中提及的，針對HRG結合位點的本發明的氨基酸序列在本文中也稱為“HRG-阻斷性氨基酸序列”、“HRG-阻斷性構建塊”，或，當它們為ISV時，“HRG-阻斷性ISV”。針對HRG結合位點(以及最優選地也能夠抑制或阻斷HER3異二聚化，如本文中進一步描述的)的本發明的氨基酸序列在本文中也稱為“二聚化-阻斷性氨基酸序列”、“二聚化-阻斷性構建塊”，或，當當它們為ISV時，也稱為“二聚化-阻斷性ISV”。如本文中進一步描述的，本發明的多肽可包含兩個或更多個針對HER3的本發明的氨基酸序列并且在優選方面包含兩個不同的氨基酸序列例如針對HER3的免疫球蛋白單可變結構域。通常，這樣的多肽將以與本發明的單個氨基酸序列相比較增加的親合力結合HER3。這樣的多肽可以例如包含兩個針對HER3的相同抗原決定簇、表位、部分、結構域、亞基或構象(適用時)(其可以是或可以不是相互作用位點)的本發明的氨基酸序列；或包含至少一個本發明的“第一”氨基酸序列，該序列針對HER3的第一相同抗原決定簇、表位、部分、結構域、亞基或構象(適用時)(其可以例如為Heregulin相互作用位點)；和至少一個本發明的“第二”氨基酸序列，該序列針對與所述第一抗原決定簇、表位、部分、結構域、亞基或構象不同的第二抗原決定簇、表位、部分、結構域、亞基或構象(適用時)(并且其可以例如針對異二聚化位點)。優選地，在這樣的“雙互補位”的本發明的多肽中，至少一個本發明的氨基酸序列針對相互作用位點(如本文中定義的)，雖然本發明在其最廣義上不限于此。
因此，如本文中進一步描述的，在一個特別有利但非限定性方面，本發明使得可能提供針對HRG結合位點并且還能夠阻斷或抑制HER3異二聚化的本發明的多肽，例如通過將一個或多個(例如I個或2個)HRG-阻斷性構建塊與一個或多個(例如I個或2個)二聚化-阻斷性構建塊組合在本發明的單個多肽(其可以是如本文中進一步描述的)中。同樣地，當靶(即HER3)為結合對(例如，受體-配體結合對)的部分時，氨基酸序列和多肽可以使得它們能夠與同源結合伴侶(根據情況 ，例如配體、受體或其它結合伴侶)競爭對靶的結合，和/或使得它們能夠(完全或部分地)中和結合伴侶對靶的結合。在這方面，應當再次地指出，如上文中提及的，除了 Heregulin以外，還描述了其它HER3配體(Sithanandam和 Anderson (2008) Cancer Gene Therapy,同上)，并且本發明的氨基酸序列可以(還)競爭和/或(完全或部分地)中和此類配體對HER3的結合。也在本發明的范圍內的是，當適用時，本發明的氨基酸序列可結合HER3的兩個或更多個抗原決定簇、表位、部分、結構域、亞基或構象。在這樣的情況下，本發明的氨基酸序列和/或多肽所結合的HER3的抗原決定簇、表位、部分、結構域或亞基可以是基本相同的(例如，當HER3包含重復的結構基序或以多聚體存在時)或可以是不同的(并且在后一種情況下，本發明的氨基酸序列和多肽可以以相同或不同的親和力和/或特異性結合HER3的這樣的不同的抗原決定簇、表位、部分、結構域、亞基)。同樣地，例如，當HER3以激活的構象和無活性的構象存在時，本發明的氨基酸序列和多肽還可結合這兩種構象之一，或可結合這兩種構象(即以相同或不同的親和力和/或特異性)。同樣地，例如，本發明的氨基酸序列和多肽可結合其中其結合至相關配體的HER3的構象，可結合其中其未結合相關配體的HER3的構象，或可結合這兩種構象(再次地以相同或不同的親和力和/或特異性)。還預期，本發明的氨基酸序列和多肽通常可結合HER3的所有天然在的或合成的類似物、變體、突變體、等位基因、部分和片段；或至少結合包含一個或多個抗原決定簇或表位的HER3的類似物、變體、突變體、等位基、部分和片段，所述抗原決定簇或表位基本上與本發明的氨基酸序列和多肽所結合的HER3中(例如在野生型HER3中)的抗原決定簇或表位相同。再次地，在這樣的情況下，本發明的氨基酸序列和多肽可以以與本發明的氨基酸序列結合(野生型)HER3的親和力和特異性相同或不同(即高于或低于)的親和力和/或特異性結合此類類似物、變體、突變體、等位基因、部分和片段。還應當在本發明的范圍內的是本發明的氨基酸序列和多肽結合HER3的一些類似物、變體、突變體、等位基因、部分和片段，但不結合HER3的其它類似物、變體、突變體、等位基因、部分和片段。當HER3以單體形式和以一種或多種多聚體形式存在時，本發明的氨基酸序列和多肽只結合以單體形式存在的HER3，只結合以多聚體形式存在的HER3，或結合單體和多聚體形式，這都在本發明的范圍內。再次地，在這樣的情況下，本發明的氨基酸序列和多肽可以以與本發明的氨基酸序列結合多聚體形式的親和力和特異性相同或不同(即高于或低于)的親和力和/或特異性結合單體形式。同樣地，當HER3可與其它蛋白質或多肽締合以形成蛋白質復合物(例如與MET、HER1、HER2或HER4)時，本發明的氨基酸序列和多肽結合以其非締合狀態存在的HER3，結合以其締合狀態存在的HER3，或結合兩者，優選地只結合或優先結合其非締合狀態并且在任何情況下至少部分地阻止異二聚化，這些在本發明的范圍內。在所有這些情況下，本發明的氨基酸序列和多肽可以以與本發明的氨基酸序列和多肽結合以其單體和非締合狀態存在的HER3的親和力和/或特異性相同或不同(即高于或低于)的親和力和/或特異性結合此類多聚體或締合的蛋白質復合物。同樣地，如對于本領域技術人員將是很清楚明了的，包含兩個或更多個針對HER3的氨基酸序列的蛋白質或多肽可以以比相應的單體氨基酸序列更高的親合力結合HER3。例如，并且非限制性地，包含兩個或更多個針對HER3的不同表位的氨基酸序列的蛋白質或多肽可以(和通常將)以比每一個不同單體更高的親合力結合，并且包含兩個或更多個針對HER3的氨基酸序列的蛋白質或多肽可以(和通常將)也以更高的親合力結合HER3的多聚體。一般地，本發明的氨基酸序列和多肽將至少結合從生物學和/或治療的觀點來看最相關的HER3的那些形式(包括單體、多聚體和締合形式)，這對于本領域技術人員來說是清楚明了的并且在本文中描述的優選方面中。也在本發明的范圍內的是使用本發明的氨基酸序列和多肽的部分、片段、類似 物、突變體、變體、等位基因和/或衍生物，和/或使用包含這樣的部分、片段、類似物、突變體、變體、等位基因和/或衍生物的一個或多個或基本上由其組成的蛋白質或多肽，只要這類物質適用于本文中預期的用途。這樣的部分、片段、類似物、突變體、變體、等位基因和/或衍生物通常可包含(至少部分)用于結合HER3的功能性抗原-結合位點；以及更優選能夠特異性結合HER3，更優選能夠以如本文中定義的親和力(適當地測量和/或表示為Kd-值(實際或表觀)、Ka-值(實際或表觀)、km-率和/或I^ff-率或可選擇地測量和/或表示為IC5tl值，如本文中進一步描述的)結合HER3。這樣的部分，片段，類似物，突變體，變體，等位基因，衍生物，蛋白質和/或多肽的一些非限定性實例根據本文中的進一步描述將變得清楚。還通過適當地組合(即通過連接或基因融合)本文中描述的一個或多個(更小的)部分或片段來提供本文中描述的本發明的其它片段或多肽。在本發明的一個具體但非限定性方面(該方面將在本文中進一步描述)，此類類似物、突變體、變體、等位基因、衍生物與它們所源自的氨基酸序列相比較具有增加的血清半衰期(如本文中進一步描述的)。例如，本發明的氨基酸序列可連接于(化學地或通過另外的方法)延長半衰期的一個或多個基團或部分(例如PEG)，以提供具有增加的半衰期的本發明的氨基酸序列的衍生物。在一個具體的但非限定性的方面，本發明的氨基酸序列可以是包含免疫球蛋白折疊的氨基酸序列或可以是在適當的條件(例如生理條件)下能夠形成免疫球蛋白折疊(即通過折疊)的氨基酸序列。除其他以外參考Halaby等人的綜述，J. (1999)ProteinEng. 12,563-71。優選地，當正確折疊以形成免疫球蛋白折疊時，這樣的氨基酸序列能夠特異性結合(如本文中定義的)HER3;以及更優選地能夠以如本文中定義的親和力(適當地測量和/或表示為Kd-值(實際或表觀)、Ka-值(實際或表觀)、km-率和/或Iitjff-率或可選擇地表示為IC5tl值，如本文中進一步描述的)結合HER3。同樣地，這樣的氨基酸序列的部分、片段、類似物、突變體、變體、等位基因和/或衍生物優選是這樣的序列它們包含免疫球蛋白折疊或能夠在適當的條件下形成免疫球蛋白折疊。具體地，但非限制性地，本發明的氨基酸序列可以為基本上由4個構架區(分別地FRl至FR4)和3個互補決定區(分別地⑶Rl至⑶R3)組成的氨基酸序列；或這樣的氨基酸序列的任何適當的片段(其因而通常包含至少一些形成CDR的至少一個的氨基酸殘基，如本文中進一步描述的)。本發明的氨基酸序列具體地可以為免疫球蛋白序列或其適當的片段，更具體地可以為免疫球蛋白單可變結構域序列或其適當的片段，例如輕鏈可變結構域序列(例如Vl-序列)或其適當的片段；或重鏈可變結構域序列(例如Vh-序列)或其適當的片段。當本發明的氨基酸序列為重鏈可變結構域序列時，其可以為來源于常規4鏈抗體的重鏈可變結構域(例如，非限制性地 ，來源于人抗體的Vh序列)或可以為來源于駱駝科的動物例如駱駝(如本文中定義的)的所謂的“重鏈抗體”的所謂的Vhh-序列(如本文中定義的)。然而，應當指出，本發明不限定于本發明的氨基酸序列的(或用于表達其的本發明的核苷酸序列的)來源，也不限定于產生或獲得(或已產生或獲得)本發明的氨基酸序列或核苷酸序列的方式。因此，本發明的氨基酸序列可以是天然存在的氨基酸序列(來自任何適當的物種)或合成或半合成的氨基酸序列。在本發明的具體但非限定性方面，氨基酸序列是天然存在的免疫球蛋白序列(來自任何適當的物種)或合成或半合成的免疫球蛋白序列，包括但不限于”人源化的”(如本文中定義的)免疫球蛋白序列(例如部分或完全地人源化的小鼠或兔免疫球蛋白序列，具體地部分或完全人源化的Vhh序列或納米抗體)、“駱駝源化的”(如本文中定義的)免疫球蛋白序列，以及已針對最佳表達和/或穩定性和/或溶解度進行了序列優化的免疫球蛋白序列，以及已利用技術(例如親和力成熟(例如，始于合成、隨機或天然存在的免疫球蛋白序列)、CDR移植、鑲嵌(veneering)、組合來源于不同免疫球蛋白序列的片段、使用重疊引物的PCR裝配以及本領域技術人員公知的用于工程化免疫球蛋白序列的相似技術；或任何上述序列的任何適當組合)獲得的免疫球蛋白序列。參考例如標準手冊，以及本文中的進一步描述和提及的現有技術。類似地，本發明的核苷酸序列可以是天然存在的核苷酸序列或合成或半合成的序列，以及可以例如為通過PCR從適當的天然存在的模板(例如從細胞分離的DNA或RNA)分離的序列，已從文庫(具體地，表達文庫)分離的核苷酸序列，已通過將突變引入天然存在的核苷酸序列(使用任何本身公知的適當的技術，例如錯配PCR)制備的核苷酸序列，使用重疊引物通過PCR制備的核苷酸序列，或已使用本身公知的用于DNA合成的技術制備的核苷酸序列。本發明的氨基酸序列具體地可以為免疫球蛋白單可變結構域(或適合用作免疫球蛋白單可變結構域的免疫球蛋白單可變結構域)、結構域抗體(或適合用作結構域抗體的氨基酸序列)、單結構域抗體(或適合用作單結構域抗體的氨基酸序列)、"dAb"(或適合用作dAb的氨基酸序列)或納米抗體(如本文中定義的，并且包括但不限于Vhh序列)；其它單可變結構域，或其任一個的任何適當的片段。關于(單)結構域抗體的一般描述，也參考上文引用的現有技術，以及參考EP 0368684。關于術語“dAb”，參考例如 Ward 等人(Nature, 19890ct 12 ；341(6242) :544-6)，參考 Holt 等人，TrendsBiotechnol.，2003，21 (11) :484-490 ;以及參考例如 WO 06/030220、WO 06/003388 和DomantisLtd的其它公布的專利申請。還應當指出，盡管因為它們不是哺乳動物來源而在本發明的情景中是不太優選的，但單結構域抗體或單可變結構域可來源于鯊魚的某些物種(例如，所謂的“ IgNAR結構域”，參見例如WO 05/18629)。具體地，本發明的氨基酸序列可以為免疫球蛋白單可變結構域或納米抗體(如本文中定義的)或其適當的片段。這樣的針對HER3的納米抗體在本文中也稱為“本發明的納米抗體”。關于免疫球蛋白單可變結構域或納米抗體(注釋術語“免疫球蛋白單可變結構域”與“納米抗體”在本申請中可互換使用)的一般描述，參考下面進一步描述，以及本文中引述的現有技術。具體地，術語納米抗體是如WO 08/020079或WO 09/068627中所定義的，并且如本文中所描述的，通常是指具有Vhh結構域(例如來自存在于駱駝中的“只有重鏈的”抗體的Vh結構域)的功能和/或結構特征的免疫球蛋白重鏈可變結構域，這樣可以具體地為(天然)VHH、人源化Vhh或駱駝源化的VH，例如駱駝源化的人VH。然而，在這方面，應當指出，該描述和現有技術主要描述所謂的“Vh3種類”的納米抗體(即與Vh3種類的人種系序列例如DP-47、DP-51或DP-29具有高度序列同源性的納米抗體)，所述納米抗體形成本發明的優選方面。然而應當指出，本發明在其最廣的意義上通常包括任何類型的針對HER3的納米抗體，并且例如還包括屬于所謂的“Vh4種類”的納米抗體(即與VH4種類的人種系序列例如DP-78具有高度的序列同源性的納米抗體)，如例如WO07/118670中描述的。·一般地，納米抗體(具體地Vhh序列和部分人源化的納米抗體)的具體特征在于一個或多個“標志殘基(Hallmark residues) ”(如本文中所描述的)在一個或多個構架序列(再次的如本文中進一步描述的)中的存在。因此，一般地，納米抗體可被定義為具有如下(一般)結構的氨基酸序列 FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4其中FRl至FR4分別是指構架區I至4，并且其中⑶Rl至⑶R3分別是指互補決定區I至3，并且其中一個或多個標志殘基是如本文中進一步定義的。具體地，納米抗體可以為具有如下(一般)結構的氨基酸序列FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4其中FRl至FR4分別是指構架區I至4，并且其中⑶Rl至⑶R3分別是指互補決定區I至3，并且其中構架是如本文中進一步定義的。更具體地，納米抗體可以是具有如下(一般)結構的氨基酸序列FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4其中FRl至FR4分別是指構架區I至4，并且其中⑶Rl至⑶R3分別是指互補決定區I至3，并且其中i)優選地根據 Kabat 編號的位置 11、37、44、45、47、83、84、103、104 和 108 上的一
個或多個氨基酸殘基選自下面表B-2中提及的標志殘基。在此類納米抗體中，CDR序列通常如下文中進一步定義的。表B-2 :納米抗體中的標志殘基
權利要求
1.蛋白質或多肽，其包含至少兩個(例如兩個或三個)各自針對和/或可各自特異性結合人HER3(SEQ ID NO :1)的免疫球蛋白單可變結構域或基本上由所述免疫球蛋白單可變結構域組成，其中每一個這樣的免疫球蛋白單可變結構域獨立地選自 a)能夠抑制或阻斷HRG對HER-3的結合的ISV;和/或 b)能夠抑制或阻斷HER-3的異二聚化的ISV;和/或 c)能夠結合HER-3的結構域II的ISV。
2.權利要求I的蛋白質或多肽，其包含如下或基本上由如下組成 a)至少一個(例如一個)能夠抑制或阻斷HER-3的異二聚化的ISV;和 b)至少一個(例如一個)能夠抑制或阻斷HRG對HER-3的結合的ISV。
3.權利要求I的蛋白質或多肽，其包含如下或基本上由如下組成 a)至少一個(例如一個)能夠抑制或阻斷HER-3的異二聚化的ISV;和 b)至少一個(例如一個)能夠結合HER-3的結構域II的ISV。
4.權利要求I或3的蛋白質或多肽，其中能夠結合HER-3的結構域II的ISV能夠抑制或阻斷HER-3的轉磷酸化。
5.蛋白質或多肽，其包含至少兩個(例如兩個或三個)各自針對和/或可各自特異性結合人HER3(SEQ ID NO :1)的免疫球蛋白單可變結構域或基本上由所述免疫球蛋白單可變結構域組成，其中每一個這樣的免疫球蛋白單可變結構域獨立地選自21R)6-樣序列、04C07-樣序列、17B05-樣序列、18G11-樣序列和/或34C07-樣序列。
6.權利要求1、2或5的蛋白質或多肽，其包含 a)至少一個(例如一個)為17B05-樣序列的ISV;和 b)至少一個(例如一個)為21R)6-樣序列的ISV。
7.權利要求1、3、4或5的蛋白質或多肽，其包含 a)至少一個(例如一個)為17B05-樣序列的ISV;和 b)至少一個(例如一個)為18G11-樣序列的ISV。
8.權利要求I至7的任一項的蛋白質或多肽，已例如通過功能化和/或通過在蛋白質或多肽中包含增加構建體的半衰期的部分或結合單元來為其提供了增加的半衰期。
9.權利要求I至8的任一項的蛋白質或多肽，已例如通過功能化和/或通過在蛋白質或多肽中包含可結合血清蛋白例如血清白蛋白的肽或結合單元來為其提供了增加的半衰期。
10.權利要求I至9的任一項的蛋白質或多肽，其包含針對人血清白蛋白的ISV。
11.權利要求I至10的任一項的蛋白質或多肽，其選自SEQIDNO 147 - 327，優選SEQID NO :282, SEQ ID NO :319 或 SEQ IDNO :322。
12.權利要求I至11的任一項的蛋白質或多肽，其中所述ISV的氨基酸序列獨立地選自 SEQ ID NO 12 至 26，優選 SEQ ID NO: 13、SEQ ID NO: 15、SEQ ID NO: 16、SEQ ID NO 18或 SEQ ID NO 22o
13.權利要求I至12的任一項的蛋白質或多肽，其中所述免疫球蛋白單可變結構域的⑶R1XDR2和⑶R3序列的至少一個與SEQID NO :12至26的免疫球蛋白單可變結構域的至少一個的⑶R1、⑶R2和⑶R3序列具有至少90%的氨基酸同一性。
14.權利要求I至13的任一項的蛋白質或多肽，其中所述免疫球蛋白單可變結構域 i)與SEQ ID NO : 12至26的免疫球蛋白單可變結構域的至少一個具有至少80%的氨基酸同一性，其中為了測定氨基酸同一性的程度，不考慮形成CDR序列的氨基酸殘基； 和其中 ii)優選根據Kabat編號的位置ll、37、44、45、47、83、84、103、104和108上的氨基酸殘基的一個或多個選自表B-2中提及的標志殘基。
15.針對和/或可特異性結合人HER3(SEQ ID NO 1)的免疫球蛋白單可變結構域。
16.權利要求15的免疫球蛋白單可變結構域，其能夠抑制或阻斷HRG對HER-3的結合。
17.權利要求15或16的免疫球蛋白單可變結構域，其選自21R)6-樣序列和04C07-樣序列。
18.權利要求11的免疫球蛋白單可變結構域，其能夠抑制或阻斷HER-3的異二聚化。
19.權利要求15、16或18的免疫球蛋白單可變結構域，其選自17B05-樣序列。
20.權利要求19的免疫球蛋白單可變結構域，其能夠抑制或阻斷HER-3的轉磷酸化。
21.權利要求15的免疫球蛋白單可變結構域，其能夠結合HER-3的結構域II。
22.權利要求15至21的任一項的免疫球蛋白單可變結構域，其能夠抑制或阻斷HER-3磷酸化。
23.權利要求15、21或22的免疫球蛋白單可變結構域，其選自18G11-樣序列和34C07-樣序列。
24.權利要求15至23的任一項的免疫球蛋白單可變結構域(ISV)，其中ISV的氨基酸序列獨立地選自 SEQ ID NO 12 至 26，優選 SEQ ID NO : 13、SEQ ID NO 15, SEQ ID NO :16、SEQ IDNO 18 或 SEQ ID NO :22。
25.權利要求15的免疫球蛋白單可變結構域，其中所述免疫球蛋白單可變結構域的⑶R1、⑶R2和⑶R3序列與SEQ ID NO :12至26的免疫球蛋白單可變結構域的至少一個的⑶R1、⑶R2和⑶R3序列具有至少90%的氨基酸同一性。
26.權利要求15的免疫球蛋白單可變結構域，其基本上由多肽組成，所述多肽 i)與SEQID NO : 12至26的免疫球蛋白單可變結構域的至少一個具有至少80%的氨基酸同一性，其中為了測定氨基酸同一性的程度，不考慮形成CDR序列的氨基酸殘基； 和其中 ii)優選根據Kabat編號的位置11、37、44、45、47、83、84、103、104和108上的氨基酸殘基的一個或多個選自表B-2中提及的標志殘基。
27.蛋白質或多肽，其與權利要求I至22的任一項的蛋白質、多肽或ISV競爭對HER3 (SEQ ID NO 1)的結合。
28.編碼權利要求I至27的任一項的蛋白質或多肽或ISV的核酸。
29.包含權利要求I至28的任一項的蛋白質或多肽或ISV的藥物組合物。
30.治療癌癥或與神經再生相關的疾病的方法，包括給有此需要的患者施用有效量的權利要求I至28的任一項的蛋白質或多肽或ISV。
31.權利要求I至28的任一項的蛋白質或多肽或ISV，其用于癌癥或與神經再生相關的病癥的治療。
32.權利要求31的蛋白質或多肽或ISV，其中所述癌癥為乳腺癌、肺癌、卵巢癌、前列腺癌、膀胱癌、腦癌、視網膜母細胞瘤、黑色素瘤、結腸直腸癌、胰腺癌、胃癌、頭頸癌、子宮頸癌和/或食道癌。
全文摘要
本發明涉及針對(如本文中定義的)HER3的氨基酸序列，以及涉及化合物或構建體，具體地蛋白質和多肽，其包含一個或多個此類氨基酸序列或基本上由所述序列組成(在本文中也分別稱為“本發明的氨基酸序列”、“本發明的化合物”和“本發明的多肽”)。本發明還涉及編碼此類氨基酸序列和多肽的核酸(在本文中也稱為“本發明的核酸”或“本發明的核苷酸序列”)；涉及用于制備此類氨基酸序列和多肽的方法；涉及表達或能夠表達此類氨基酸序列或多肽的宿主細胞；涉及組合物，具體地涉及藥物組合物，所述組合物包含此類氨基酸序列、多肽、核酸和/或宿主細胞；以及涉及此類氨基酸序列或多肽、核酸、宿主細胞和/或組合物的用途，具體地用于預防、治療或診斷目的例如本文中提及的預防、治療或診斷目的用途。
文檔編號C07K16/18GK102906118SQ201180021948
公開日2013年1月30日 申請日期2011年5月20日 優先權日2010年5月20日
發明者C·克尼赫, B·霍克, R·霍夫邁斯特, G·貝斯特, H·A·P·雷韋茨, F·K·D·韋爾東克, S·G·V·科內利斯 申請人:阿布利恩克斯股份有限公司, 默克專利股份有限公司