專利名稱：一種提取雞傳染性法氏囊卵黃抗體的方法
技術領域：
本發明涉及一種提取雞傳染性法氏囊卵黃抗體的方法。
背景技術：
雞傳染性法氏囊病(IBD)是由病毒引起的一種主要危害雛雞的免疫抑制性傳染病，在養雞業中危害巨大。卵黃抗體(egg yolk antibodies, IgY)是指產蛋雞受特定抗原免疫后產生的特異性抗體，并轉移和貯存在卵黃中的免疫球蛋白。從含高效價抗體的雞蛋黃中提取、制備的IgY在人類和動物疾病的防治中具有特效作用。雞蛋提供了廉價易得的 IgY來源，從一枚雞蛋中可獲得10 250mg IgY。如何將大量的IgY提取、純化出來，是決定IgY能否被廣泛應用的一個重要前提。卵黃主要成分是水、蛋白質和脂肪，其中蛋白質與脂肪的比例約為1 2，其中幾乎所有脂肪均與蛋白質結合形成脂蛋白。其中α、β、Υ三種活性蛋白為水溶性蛋白，IgY是水溶性的Y活性蛋白。近年來，國內外學者對卵黃抗體的制備和應用做了大量研究。但由于高免卵黃提取過程中步驟繁瑣，不僅會使抗體效價降低，影響抗體的使用效果，而且造成成本提高；同時，由于大量雜蛋白及脂肪等物質未被除去，抗體純度低，造成注射困難、難以吸收、局部腫脹、過敏反應、保存和運輸不便等，導致治療效果不佳，限制了其在疾病防治上的應用。
發明內容
本發明是要解決現有卵黃抗體提取方法的步驟繁瑣，成本高，抗體效價低，抗體純度不高，治療效果不佳的問題，提供一種提取雞傳染性法氏囊卵黃抗體的方法。本發明提取雞傳染性法氏囊卵黃抗體的方法，按以下步驟進行一、用雞傳染性法氏囊油乳劑滅活苗免疫健康母雞，當雞蛋抗體效價達到1 1 時收集雞蛋，即為免疫雞蛋；二、從免疫雞蛋中分離卵黃，向卵黃中加入生理鹽水，使生理鹽水與卵黃的質量比為 1 2 1，攪拌均勻，得卵黃液；三、然后一邊攪拌一邊向卵黃液中加入碘酸鉀，使卵黃液中碘酸鉀的質量濃度達到15% 25%;四、攪拌均勻后于室溫靜置6 8小時，然后放入固液分離離心機中，于12000r/min離心至無液體流出，獲得的淺黃色固體即為卵黃抗體；五、將卵黃抗體用滅菌的含質量濃度0. 001% 0. 005%蒲公英黃酮的生理鹽水稀釋至抗體效價達到1 64，將稀釋后的卵黃抗體用0.85 μ m的濾膜過濾，然后用0.45 μ m的濾膜過濾，再用0. 22 μ m的濾膜過濾，即完成雞傳染性法氏囊卵黃抗體的提取。本發明具有以下優點1、本發明方法簡化了操作程序，縮短了提取時間；2、本方法由于使用價格低廉的提取原料，使得卵黃抗體提取成本較現有方法降低 30%以上；3、按照一定比例稀釋后，經瓊脂擴散法檢測抗體效價均可達到1 64，較現有方法獲得的卵黃抗體效價顯著提高；4、本發明獲得的抗體純度好，經聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測后雜帶很少，抗體純度可達94%以上，幾乎完全去除了脂肪和雜蛋白，較現有方法獲得的卵黃抗體純度顯著提尚；5、注射時對雞體造成的損傷小，抗體吸收效果好。試驗雞經法氏囊攻毒2天后，用本發明提取的卵黃抗體進行治療，治療后4天的治愈率達95%以上，表明本發明提取的卵黃抗體對法氏囊病有很好的治療效果。
具體實施例方式本發明技術方案不局限于以下所列舉具體實施方式
，還包括各具體實施方式
間的任意組合。
具體實施方式
一本實施方式提取雞傳染性法氏囊卵黃抗體的方法，按以下步驟進行一、用雞傳染性法氏囊油乳劑滅活苗免疫健康母雞，當雞蛋抗體效價達到1 1 時收集雞蛋，即為免疫雞蛋；二、從免疫雞蛋中分離卵黃，向卵黃中加入生理鹽水，使生理鹽水與卵黃的質量比為1 2 1，攪拌均勻，得卵黃液；三、然后一邊攪拌一邊向卵黃液中加入碘酸鉀，使卵黃液中碘酸鉀的質量濃度達到15% 25% ；四、攪拌均勻后于室溫靜置6 8小時，然后放入固液分離離心機中，于12000r/min離心至無液體流出，獲得的淺黃色固體即為卵黃抗體；五、將卵黃抗體用滅菌的含質量濃度0. 001% 0. 005%蒲公英黃酮的生理鹽水稀釋至抗體效價達到1 64，將稀釋后的卵黃抗體用0.85 μ m的濾膜過濾，然后用 0. 45 μ m的濾膜過濾，再用0. 22 μ m的濾膜過濾，即完成雞傳染性法氏囊卵黃抗體的提取。本實施方式步驟一中雞傳染性法氏囊油乳劑滅活苗為購買得到。
具體實施方式
二 本實施方式與具體實施方式
一不同的是步驟一中用雞傳染性法氏囊油乳劑滅活苗免疫健康母雞的方法為每次每只皮下注射ImL雞傳染性法氏囊疫苗，免疫3次，每次間隔14天。其它與具體實施方式
一同。
具體實施方式
三本實施方式與具體實施方式
一或二不同的是步驟三中使卵黃液中碘酸鉀的質量濃度達到15%。其它與具體實施方式
一或二相同。
具體實施方式
四本實施方式與具體實施方式
一或二不同的是步驟三中使卵黃液中碘酸鉀的質量濃度達到25%。其它與具體實施方式
一或二相同。
具體實施方式
五本實施方式與具體實施方式
一或二不同的是步驟三中使卵黃液中碘酸鉀的質量濃度達到20%。其它與具體實施方式
一或二相同。
具體實施方式
六本實施方式與具體實施方式
一至五之一不同的是步驟五中將卵黃抗體用滅菌的含質量濃度0. 001%蒲公英黃酮的生理鹽水稀釋至抗體效價達到 1 64。其它與具體實施方式
一至五之一相同。
具體實施方式
七本實施方式與具體實施方式
一至五之一不同的是步驟五中將卵黃抗體用滅菌的含質量濃度0. 005%蒲公英黃酮的生理鹽水稀釋至抗體效價達到 1 64。其它與具體實施方式
一至五之一相同。
具體實施方式
八本實施方式與具體實施方式
一至五之一不同的是步驟五中將卵黃抗體用滅菌的含質量濃度0. 002% 0. 004%蒲公英黃酮的生理鹽水稀釋至抗體效價達到1 64。其它與具體實施方式
一至五之一相同。
具體實施方式
九本實施方式提取雞傳染性法氏囊卵黃抗體的方法，按以下步驟進行一、用雞傳染性法氏囊油乳劑滅活苗免疫健康母雞，當雞蛋抗體效價達到1 1 時收集雞蛋，即為免疫雞蛋；二、從免疫雞蛋中分離卵黃，向卵黃中加入生理鹽水，使生理鹽水與卵黃的質量比為1 1，攪拌均勻，得卵黃液；三、然后一邊攪拌一邊向卵黃液中加入碘酸鉀，使卵黃液中碘酸鉀的質量濃度達到20% ；四、攪拌均勻后于室溫靜置7小時，然后放入固液分離離心機中，于12000r/min離心至無液體流出，獲得的淺黃色固體即為卵黃抗體； 五、將卵黃抗體用滅菌的含質量濃度0. 003%蒲公英黃酮的生理鹽水稀釋至抗體效價達到 1 64，將稀釋后的卵黃抗體用0.85 μ m的濾膜過濾，然后用0.45 μ m的濾膜過濾，再用 0. 22 μ m的濾膜過濾，即完成雞傳染性法氏囊卵黃抗體的提取。步驟一中用雞傳染性法氏囊油乳劑滅活苗免疫健康母雞的方法為每次每只皮下注射ImL雞傳染性法氏囊疫苗，免疫3次，每次間隔14天。本實施方式獲得的抗體純度好，經聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測后雜帶很少，抗體純度可達95. 3%試驗雞經法氏囊攻毒2天后，用本實施方式提取的卵黃抗體進行治療，治療后4天治愈率達97. 5%。
權利要求
1.一種提取雞傳染性法氏囊卵黃抗體的方法，其特征在于提取雞傳染性法氏囊卵黃抗體的方法，按以下步驟進行一、用雞傳染性法氏囊油乳劑滅活苗免疫健康母雞，當雞蛋抗體效價達到1 128時收集雞蛋，即為免疫雞蛋；二、從免疫雞蛋中分離卵黃，向卵黃中加入生理鹽水，使生理鹽水與卵黃的質量比為1 2 1，攪拌均勻，得卵黃液；三、然后一邊攪拌一邊向卵黃液中加入碘酸鉀，使卵黃液中碘酸鉀的質量濃度達到15% 25% ；四、攪拌均勻后于室溫靜置6 8小時，然后放入固液分離離心機中，于12000r/min離心至無液體流出，獲得的淺黃色固體即為卵黃抗體；五、將卵黃抗體用滅菌的含質量濃度0. 001% 0.005%蒲公英黃酮的生理鹽水稀釋至抗體效價達到1 64，將稀釋后的卵黃抗體用 0. 85 μ m的濾膜過濾，然后用0. 45 μ m的濾膜過濾，再用0. 22 μ m的濾膜過濾，即完成雞傳染性法氏囊卵黃抗體的提取。
2.根據權利要求1所述的一種提取雞傳染性法氏囊卵黃抗體的方法，其特征在于步驟一中用雞傳染性法氏囊油乳劑滅活苗免疫健康母雞的方法為每次每只皮下注射ImL雞傳染性法氏囊疫苗，免疫3次，每次間隔14天。
3.根據權利要求1或2所述的一種提取雞傳染性法氏囊卵黃抗體的方法，其特征在于步驟三中使卵黃液中碘酸鉀的質量濃度達到15%。
4.根據權利要求1或2所述的一種提取雞傳染性法氏囊卵黃抗體的方法，其特征在于步驟三中使卵黃液中碘酸鉀的質量濃度達到25%。
5.根據權利要求1或2所述的一種提取雞傳染性法氏囊卵黃抗體的方法，其特征在于步驟三中使卵黃液中碘酸鉀的質量濃度達到20%。
6.根據權利要求5所述的一種提取雞傳染性法氏囊卵黃抗體的方法，其特征在于步驟五中將卵黃抗體用滅菌的含質量濃度0.001%蒲公英黃酮的生理鹽水稀釋至抗體效價達到 1 64。
7.根據權利要求5所述的一種提取雞傳染性法氏囊卵黃抗體的方法，其特征在于步驟五中將卵黃抗體用滅菌的含質量濃度0. 005%蒲公英黃酮的生理鹽水稀釋至抗體效價達到 1 64。
8.根據權利要求5所述的一種提取雞傳染性法氏囊卵黃抗體的方法，其特征在于步驟五中將卵黃抗體用滅菌的含質量濃度0. 002% 0. 004%蒲公英黃酮的生理鹽水稀釋至抗體效價達到1 64。
全文摘要
一種提取雞傳染性法氏囊卵黃抗體的方法，涉及一種提取雞傳染性法氏囊卵黃抗體的方法。是要解決現有卵黃抗體提取方法的步驟繁瑣，成本高，抗體效價低，抗體純度不高，治療效果不佳的問題。方法用雞傳染性法氏囊油乳劑滅活苗免疫健康母雞，收集雞蛋，即為免疫雞蛋；從免疫雞蛋中分離卵黃，向卵黃中加入生理鹽水，攪拌均勻，得卵黃液；一邊攪拌一邊加入碘酸鉀；攪拌均勻后靜止，離心至無液體流出，獲得卵黃抗體；將卵黃抗體用含蒲公英黃酮的生理鹽水稀釋，過濾，即完成雞傳染性法氏囊卵黃抗體的提取。本發明方法操作簡單，成本低，抗體效價及純度高，對雞法氏囊病有很好的治療效果。
文檔編號C07K16/02GK102492036SQ20111044758
公開日2012年6月13日 申請日期2011年12月28日 優先權日2011年12月28日
發明者付博, 馮艷忠, 孫金燕, 彭福剛, 李忠秋, 汪亮, 陳赫書, 馬紅 申請人:黑龍江省農業科學院畜牧研究所