專利名稱：一種去氫二異丁香酚單體的分離純化方法
技術領域：
本發明涉及一種植物化合物單體的制備方法，具體涉及從肉豆蔻中提取分離去氫二異丁香酚單體的方法，屬于中藥活性成分的分離純化技術領域。
背景技術：
肉豆蔻，肉豆蔻科肉豆蔻屬植物肉豆蔻IjTi^iica fragrans Houtt.的干燥種仁。 主產于馬來西亞、印度尼西亞；我國廣東、廣西、云南亦有栽培。該種為熱帶著名的香料和藥用植物。冬、春兩季果實成熟時采收。其種仁入藥，可治虛瀉冷痢、脘腹冷痛、嘔吐等；外用可作寄生蟲驅除劑，治療風濕痛等。去氫二異丁香酚為肉豆蔻中特征性化學成分，其英文名 Dehydrodiisoeugenol，分子式為C2tlH22 04+，分子量為326. 39，屬于木脂素類化合物，其結構式如下去氫二異丁香酚是肉豆蔻中特征性化學成分，2010年版中國藥典以去氫二異丁香酚為鑒別肉豆蔻藥材標準的唯一依據。
但是，發明人通過查閱大量文獻發現，目前只有對去氫二異丁香酚常規結晶的文獻介紹，但都不能很好的將高純度去氫二異丁香酚的分離出來。因此，迄今為止，尚沒有從肉豆蔻中制備有效成分去氫二異丁香酚的成熟工藝報道。發明內容
本發明旨在克服現有技術的缺陷，提供一種從肉豆蔻中提取分離去氫二異丁香酚單體的方法。該方法操作簡便，分離效率高，工藝穩定，成本低廉，可實現去氫二異丁香酚單體的工業化分離制備，得到的去氫二異丁香酚單體純度高，可達到99. 5%以上。
為了實現上述發明目的，本發明采用的技術方案如下一種去氫二異丁香酚單體的分離純化方法，它是以肉豆蔻為原料進行提取、萃取、硅膠柱分離和制備回收而得，其具體工藝步驟如下A、提取將干燥的肉豆蔻粉碎成粗粉，按藥材重量與乙醇體積比為1 8 10加入質量百分比濃度為95%的乙醇溶液，加熱回流提取，共提取3次，每次2 3小時，提取液過濾，合并過濾液，濃縮回收乙醇，得濃浸膏待下一步進行萃取處理；B、萃取于步驟A所得濃浸膏的體積加入1倍體積的水(80°C)稀釋，再加入與稀釋后的浸膏水溶液1倍體積的乙酸乙酯萃取，共萃取3次，合并乙酸乙酯層，用旋蒸蒸發器55°C濃縮至成流浸膏，加入所得浸膏重量5倍的60 80目硅膠拌樣干燥備硅膠柱分離； C、硅膠柱分離根據步驟B所得拌樣樣品重量，稱取10倍重量的200 300目硅膠，用洗脫劑拌勻裝入玻璃層析柱中，用洗脫劑沉降，流速恒定為止；將步驟B中干燥好的硅膠樣品，裝入玻璃層析柱中，用洗脫劑洗脫，根據TLC檢測收集去氫二異丁香酚產品段，回收洗脫劑，得白色絮狀固體；所述洗脫劑由石油醚(60-90°C)與乙酸乙酯按6:1體積比組成。
D、高效液相制備分離取步驟C所得的固體，用二甲基甲酰胺(DMF)按lg:10ml溶液溶解、過濾，進行去氫二異丁香酚單體的制備分離，紫外檢測器在線監測，針對性收集去氫二異丁香酚單體的制備餾分溶液，得去氫二異丁香酚單體溶液；所述高效液相分離采用填料為C18的色譜柱；流動相組成為按體積比，甲醇水 =75:25，檢測波長為274nm。
Ε、產品回收將步驟D高效制備液相色譜分離得到的去氫二異丁香酚單體溶液加熱回收甲醇，去氫二異丁香酚在剩余液體中會析出成絮狀晶體，用漏斗過濾，所得絮狀晶體放置進烘箱55°C 干燥即得到去氫二異丁香酚單體產品。
本發明的優點在于1、步驟少，耗時短，能大大縮短生產周期，節約生產成本。
2、溶劑消耗少，制備液相色譜分離步驟中的溶劑都可回收再利用。
3、制得的去氫二異丁香酚單體純度高，達99. 5%以上，可作為含量測定的對照品使用。
4、經濟效益好，能進行大規模生產，且工序簡便，易于控制，分離效率高。
圖1為本發明實施例1產品的HPLC圖譜圖2為本發明實施例1步驟D制備液相圖譜。
具體實施方式
下面結合具體實施方式
對本發明作進一步的詳細描述。但不應將此理解為本發明上述主題的范圍僅限于下述實施例。
下述各實施例中，終產品去氫二異丁香酚單體的純度復檢均采用反相分析型液相色譜(RP-HPLC)法，色譜條件如下以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇水(75:25)為流動相；柱溫30°C ；流速 1. Oml/min ；檢測波長為 274 nm。
實施例1一種去氫二異丁香酚單體的分離純化方法，它是以肉豆蔻為原料進行提取、萃取、硅膠柱分離和制備回收而得，其具體工藝步驟如下A、提取將干燥的肉豆蔻Ikg粉碎成粗粉，裝入體積IOL的提取罐中，加入質量百分比濃度為 95%的乙醇溶液8L，加熱回流提取，共提取3次，每次3小時，提取液過濾，合并過濾液，濃縮回收乙醇，得濃浸膏待下一步進行萃取處理；B、萃取于步驟A所得的浸膏加入1倍體積量的水(80°C)進行稀釋，共得溶液1. 6L，加入等量體積的乙酸乙酯萃取，共萃取3次，合并收集乙酸乙酯層，在55°C旋轉蒸發器中回收至浸膏狀，加入所得浸膏5倍重量的60 80目硅膠(50克)，拌樣干燥后得硅膠樣品60克；C、硅膠柱分離稱取600g 200 300目硅膠，用石油醚(60-90°C)乙酸乙酯(6:1)組成的洗脫劑拌勻，裝入備好的直徑IOcm高70cm的玻璃層析柱中，用石油醚(60_90°C ):乙酸乙酯(6 1)組成的洗脫劑沉降，流速恒定為止；將步驟B中干燥好的硅膠樣品62克，裝入層析柱中，用石油醚(60-90°C):乙酸乙酯(6:1)組成的洗脫劑洗脫，根據TLC檢測收集去氫二異丁香酚產品段，回收洗脫劑，得白色狀固體1. 8克；所述洗脫劑由石油醚(60-90°C)與乙酸乙酯按6:1體積比組成。
D、高效液相制備取步驟C所得的1. Sg白色固體加入ISmL的DMF充分溶解，過濾除去不溶性雜質，濾液進樣，紫外檢測器在線監測，針對性收集去氫二異丁香酚單體的制備餾分溶液，得去氫二異丁香酚單體溶液；所述高效液相分離采用填料為十八烷基硅烷鍵合硅膠(C18)的色譜柱，柱規格為 50cmX8cm ；流動相組成為甲醇水(體積比)=75:25 ；檢測波長為274nm ；室溫下操作。
E、產品回收將步驟D高效制備液相色譜分離得到的去氫二異丁香酚單體溶液用減壓旋蒸55°C 濃縮至無甲醇，去氫二異丁香酚單體在剩余水相中析出的白色絮狀晶體，用漏斗過濾收集沉淀，去氫二異丁香酚產品放置進烘箱中干燥，烘干后得到去氫二異丁香酚單體產品 1. 1 克。
整個生產流程用時約5天。
計算得產品收率為(1.1/1000) X 100%=0. 11%。
通過更換流動相組分，利用反相分析型液相色譜(RP-HPLC)復檢產品純度，測得結果為 99. 56%ο
實施例2一種去氫二異丁香酚單體的分離純化方法，它是以肉豆蔻為原料進行提取、萃取、硅膠柱分離和制備回收而得，其具體工藝步驟如下A、提取將干燥的肉豆蔻IOkg粉碎成粗粉，裝入體積100L的提取罐中，加入質量百分比濃度為 95%的乙醇溶液80L，加熱回流提取3次，每次3小時，提取液過濾，合并過濾液，濃縮回收乙醇，得IOL濃浸膏待進行下一步萃取處理；B、萃取于步驟A所得的浸膏加入IOL的水(80°C)進行稀釋，共得溶液20L，加入等量體積(20L)的乙酸乙酯萃取，共萃取3次，合并收集乙酸乙酯層，在55°C旋轉蒸發器中濃縮回收至浸膏狀，加入浸膏5倍重量的60-80目硅膠(775克)拌樣干燥得硅膠樣品930克； C、硅膠柱分離稱取9. 3kg 200-300目硅膠用石油醚(60-90°C)乙酸乙酯(6:1)拌勻，裝入3根備好的直徑15cm高120cm的玻璃層析柱中，用石油醚(60-90°C)乙酸乙酯(6:1)沉降，流速恒定為止；將步驟B中干燥好的硅膠樣品930克，分3批均勻裝入層析柱中，用石油醚 (60-90°C):乙酸乙酯(6:1)洗脫，根據TLC檢測收集去氫二異丁香酚產品段，回收石油醚 (60-90°C)乙酸乙酯(6:1)，得白色狀固體M克，待下一步制備。
D、高效液相制備采用填料為十八烷基硅烷鍵合硅膠(C18)的色譜柱，柱規格為50CmX10Cm; 流動相組成為甲醇水(75:25)。
檢測波長為274nm ；室溫下操作。
取步驟C所得的Mg白色固體加入MOml的DMF充分溶解，過濾除去不溶性雜質， 濾液進樣，紫外檢測器在線監測，針對性收集去氫二異丁香酚單體的制備餾分溶液，得去氫二異丁香酚單體溶液。
E、產品回收；將步驟D高效制備液相色譜分離得到的去氫二異丁香酚單體溶液用減壓旋轉蒸發器 55°C濃縮至無甲醇，樣品在剩余水相中析出白色絮狀晶體，用漏斗過濾收集沉淀，放置進烘箱中55°C干燥，即得到去氫二異丁香酚單體產品，烘干后得到產品13. 8克. 整個生產流程用時約15天。
計算得產品收率為(13.8/10000) X 100%=0. 138%。
通過更換流動相組分，利用反相分析型液相色譜(RP-HPLC)復檢產品純度，測得結果為 99. 68%ο
權利要求
1.一種去氫二異丁香酚單體的分離純化方法，它是以肉豆蔻為原料進行提取、萃取、硅膠柱分離和制備回收而得，其特征在于具體工藝步驟如下A、提取將干燥的肉豆蔻粉碎成粗粉，按藥材重量與乙醇體積比為1 8 10加入質量百分比濃度為95%的乙醇溶液，加熱回流提取，提取3次，每次2 3小時，提取液過濾，合并過濾液， 濃縮回收乙醇，得濃浸膏待下一步進行萃取處理；B、萃取于步驟A所得的濃浸膏的體積加入一倍體積的80°C水稀釋，再加入與稀釋后的浸膏水溶液一倍體積的乙酸乙酯萃取，共萃取3次，合并收集乙酸乙酯層，用旋蒸蒸發器55°C濃縮至流浸膏，加入所得流浸膏重量5倍重量的60 80目硅膠拌樣干燥備硅膠柱分離；C、硅膠柱分離根據步驟B所得拌樣樣品重量，稱取10倍重量的200 300目硅膠，用洗脫劑拌勻裝入玻璃層析柱中，用洗脫劑沉降，流速恒定為止；將步驟B中干燥好的硅膠樣品，裝入玻璃層析柱中，用洗脫劑洗脫，根據TLC檢測收集去氫二異丁香酚產品段，回收洗脫劑，得白色絮狀固體；D、高效液相制備分離取步驟C所得的固體，用二甲基甲酰胺按lg:10ml溶液溶解、過濾，進行去氫二異丁香酚單體的制備分離，紫外檢測器在線監測，針對性收集去氫二異丁香酚單體的制備餾分溶液，得去氫二異丁香酚單體溶液；E、產品回收將步驟D高效制備液相色譜分離得到的去氫二異丁香酚單體溶液，利用旋轉蒸發器回收掉甲醇，去氫二異丁香酚產品在剩余水相中會析出的絮狀晶體，用漏斗過濾，過濾產品放置進烘箱干燥即得到去氫二異丁香酚單體產品。
2.如權利要求1所述的去氫二異丁香酚單體的分離純化方法，其特征在于步驟C所述洗脫劑由石油醚(60-90°C)與乙酸乙酯按6:1體積比組成。
3.如權利要求1所述的去氫二異丁香酚單體的分離純化方法，其特征在于步驟D所述高效液相分離采用填料為C18的色譜柱；流動相組成為按體積比，甲醇水=75:25，檢測波長為274nm。
全文摘要
本發明涉及一種從肉豆蔻中提取分離去氫二異丁香酚單體的方法，屬于中藥活性成分的分離純化技術領域。它是以肉豆蔻為原料進行乙醇提取、乙酸乙酯萃取、以石油醚(60-90℃)-乙酸乙酯作為洗脫劑的硅膠柱分離、流動相為甲醇-水，檢測波長為274nm的高效液相色譜柱分離、產品回收等步驟。該方法操作簡便，生產周期短，分離效率高，工藝穩定，成本低廉，可實現大量去氫二異丁香酚單體的高純度分離制備，得到的去氫二異丁香酚單體純度高，可作為含量測定的對照品使用。
文檔編號C07D307/80GK102503918SQ20111042016
公開日2012年6月20日 申請日期2011年12月15日 優先權日2011年12月15日
發明者劉丁, 夏柯, 文煥松, 白蘭輝, 郭建華 申請人:成都普思生物科技有限公司