專利名稱：一種新型抗老年癡呆癥先導(dǎo)化合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種新型抗老年癡呆癥先導(dǎo)化合物，特別是一種抗老年癡呆癥毒性體 A β先導(dǎo)化合物。
背景技術(shù)：
目前，全球至少有3500萬人患有老年癡呆癥，且每年的致死率正在上升。每年全球的總花費估計達到2000億美元，研究表明，A β (Amyloid β -peptide)寡聚體是老年癡呆癥病人體內(nèi)的顯著毒性體，因此抑制A β寡聚體的生成是阻止老年癡呆癥發(fā)生最有效的策略。然而，目前無有效方法用于Αβ抑制劑設(shè)計，主要面對三方面的嚴重挑戰(zhàn)1、缺少有效的高通量篩選方法實驗篩選方法需要合成和純化Αβ，這對于大量化合物的篩選無疑是費時、昂貴且不現(xiàn)實。2、缺少Αβ寡聚體的高分辨率結(jié)構(gòu)Αβ寡聚體呈亞穩(wěn)態(tài)，因此利用X-射線衍射和NMR技術(shù)很難得到其結(jié)構(gòu)，使基于結(jié)構(gòu)的合理藥物設(shè)計難以實現(xiàn)。3、缺少對A β自組裝機制的理解包括肽的哪一部分構(gòu)成在淀粉樣纖維生成過程中起著關(guān)鍵作用；種子和纖維生成相關(guān)的路徑與中間體是什么；Αβ是否親和到特定的受體;Αβ如何生成毒性體以及毒性的機制是什么。因此，設(shè)計新型Aβ抑制劑對老年癡呆癥診斷和治療具有重要的實踐意義。發(fā)明內(nèi)容
有鑒于此，為了解決上述問題，本發(fā)明提供了一種新型抗老年癡呆癥先導(dǎo)化合物， 可進一步開發(fā)為抗老年癡呆癥治療藥物。
本發(fā)明的目的是這樣實現(xiàn)的它的氨基酸序列為氨基端-VTLffffG-羧基端。
本發(fā)明的一種新型抗老年癡呆癥先導(dǎo)化合物，選取一組具有聚集行為的6肽樣本，經(jīng)過肽定量構(gòu)效關(guān)系建模技術(shù)設(shè)計具有聚集行為的肽分子，經(jīng)原子力顯微鏡檢測其對 Αβ的抑制特征，借助細胞毒性實驗評價其對細胞毒性的抑制作用，依此方法找到了本發(fā)明所述的氨基酸序列，即氨基端-VTLffffG-羧基端。
合成本發(fā)明所述的氨基酸序列方法均是現(xiàn)有的成熟技術(shù)，它是按照如下方法制成的
采用標準Fmoc方案，起始選用0. 0125mmol, PSC樹脂(ABI公司生產(chǎn)，批號 A5F013)，按照權(quán)利要求1所述的序列特征，使肽鏈從C端逐個向N端延伸，各氨基酸的用量為0. lmmol，各種氨基酸保護基團是各氨基酸的alpha氨基Pmoc保護，其余側(cè)鏈保護基團，Arg(Mtr)，Tyr (tBu), Thr (tBu), Asp (OtBu)，對于生物素基和十八?；鶊F的修飾， Fmoc-Lys (biotin) -OH和十八酸分別連接到肽的C末端和N末端。每步縮合都加入HoBT/ Dcc活化保護氨基酸的羧基。每步縮合用含有20%六氫吡啶的NMP溶液去除Fmoc保護基， 肽側(cè)鏈合成后，按照ABI公司推薦的步驟，將含樹脂的肽鏈加入處于冰浴條件下的混合反應(yīng)液中，反應(yīng)液的成分結(jié)晶苯酸0. 75g，酒石酸乙二胺(EDT)O. 25ml，苯硫基甲烷0. 5ml, 去離子水0. 5ml，三氟乙酸10ml。在室溫條件下持續(xù)攪拌，反應(yīng)時間為4. 5小時，把肽鏈從樹枝上裂解下來，同時去除多種保護基團。將混合液經(jīng)4G的玻璃濾器過濾，以濾掉切下的樹脂和保護集團，并用三氟乙酸沖洗反應(yīng)瓶和濾器，將濾液在常溫下低壓蒸發(fā)至ι-aiii，加乙醚50ml，使多肽沉淀后，經(jīng)6G濾器過濾后，冷凍干燥，所得便是肽產(chǎn)品。以上過程都是在ABI-431A固相自動肽合成儀中完成。所合成肽經(jīng)過RP-HPLC純化，純度達到95%，并經(jīng) TOF-MS鑒定結(jié)構(gòu)。
用原子力顯微鏡掃描技術(shù)測定上述所合成肽對A β的抑制作用。
用細胞毒性實驗評價上述所合成肽對A β毒性的抑制作用。
本發(fā)明的其它優(yōu)點、目標和特征在某種程度上將在隨后的說明書中進行闡述，并且在某種程度上，基于對下文的考察研究對本領(lǐng)域技術(shù)人員而言將是顯而易見的，或者可以從本發(fā)明的實踐中得到教導(dǎo)。本發(fā)明的目標和其他優(yōu)點可以通過下面的說明書，權(quán)利要求書，以及附圖中所特別指出的結(jié)構(gòu)來實現(xiàn)和獲得。
為了使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案和優(yōu)點更加清楚，下面將結(jié)合附圖對本發(fā)明作進一步的詳細描述，其中
圖1是新設(shè)計肽VTLffffG對Αβ抑制作用的原子力顯微鏡掃描結(jié)果；
圖2是新設(shè)計肽對Αβ的細胞毒性測定結(jié)果。
具體實施方式
以下對采用本發(fā)明的方法用于老年癡呆癥病人種主要毒性體_Αβ抑制劑的設(shè)計和鑒定為例進行詳細的描述，包括以下步驟
a)肽的定量構(gòu)效關(guān)系建模；
al)肽結(jié)構(gòu)表征從文獻(Matsubara et al.，Nat Methods, 2010, 7 (3) :237; Thompson et al.，PNAS，2006，103 (11) :4074)選擇278個肽樣本，其中可聚集肽樣本為 117,非聚集肽樣本為162個，每個肽含有6個氨基酸殘基。精選20種天然氨基酸的516種性質(zhì)參數(shù)，借助多元統(tǒng)計分析中的因子分析法，經(jīng)斜交旋轉(zhuǎn)，并用主成分法提取6個因子， 這6個因子解釋了原始變量83. 47%的信息。
對6個因子進行載荷分析發(fā)現(xiàn)，每個因子分別涉及疏水性、α -螺旋與轉(zhuǎn)角傾向、 體積性質(zhì)、構(gòu)成特征、局部柔性及靜電性質(zhì)。進一步計算各因子得分，見表1，此6個因子得分矢量綜合了 516個原始氨基酸性質(zhì)參數(shù)大部分信息，可將其用于肽或蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)表征。 肽序列中的每個氨基酸殘基用次6個因子得分表征，對于每個6肽序列，則可用6X6個= 36個變量表征。
表1 20種天然氨基酸的516個性質(zhì)參數(shù)的6個因子得分
權(quán)利要求
1. 一種新型抗老年癡呆癥先導(dǎo)化合物，其特征在于它的氨基酸序列為氨基端-VTLffffG-羧基端。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種新型抗老年癡呆癥先導(dǎo)化合物，其特征在于它的氨基酸序列為氨基端-VTLWWG-羧基端。本肽序列是基于肽的定量結(jié)構(gòu)功能關(guān)系模型設(shè)計，經(jīng)原子力顯微鏡掃描技術(shù)檢測，進一步用細胞毒性實驗評價得到。它對導(dǎo)致老年癡呆癥的毒性體-Aβ的聚集具有良好的抑制作用，可進一步開發(fā)為抗老年癡呆癥藥物。
文檔編號C07K7/06GK102492022SQ20111040530
公開日2012年6月13日 申請日期2011年12月8日 優(yōu)先權(quán)日2011年12月8日
發(fā)明者呂鳳林, 張進, 梁桂兆, 溫文軼, 苗霞, 鄭潔 申請人:重慶大學(xué)