專利名稱：一種從長春花鮮草中提取脫水長春堿、環氧長春堿的方法
技術領域：
本發明涉及一種從長春花提取中藥藥效成分的技術，特別是涉及一種從長春花鮮中提取生物堿的方法，從長春花中提取的藥用有效成分包括脫水長春堿，環氧長春堿，長春堿等，屬天然藥物技術領域。
背景技術：
長春花為夾竹桃科長春花屬中一種重要的藥用植物，迄今已經分離出70余種生物堿，其中含有長春新堿(Vincristine)長春堿(Vinblastine)長春酰胺(Vindestine)文多靈(Vindoline)等多種具有要藥用價值的成分。長春堿用于治療各種實體瘤，長春新堿主要應用于對兒童急性白血病的治療。上世紀70年代Eli Lilly公司通過修飾長春堿的文多靈部分，研究開發了用于治療黑色素瘤、原淋巴細胞白血和晚期的飛小細胞肺癌的長春地辛藥物(Vindestine)。法國的皮爾法伯特公司在1989年通過改造長春堿的維爾朋胺部分，在法國上市了治療非小細胞肺癌和晚期乳腺癌的長春瑞濱(Vinrelbine)。效果更好的長春氟寧(Vinf limine)正在臨床研究中。生物堿類在中草藥中含量較低，有的只有千分，萬分之一，甚至百萬分之一，要獲得有效成分，提取技術是關鍵。傳統提取存在許多問題，純化時間較長，有毒溶劑用量大，得率較低，能耗較大等缺點。現階段，對生物堿的提取根據其理化特性，可用酸，水，堿醇等，浸泡、煎煮、回流、超聲技術對生物堿累分離提取，工藝較完善，得率可達90%以上。但常會帶入大量雜質成分，如淀粉，果膠，樹膠，色素，粘液質等，給生物堿提純造成較大麻煩。目前還常采用大空樹脂提取《中草藥中生物的提取分離》，蔡艷化，四川化工，2005. (1) 39)。目前廣泛運用的還有有機溶劑提取法，長春花生物堿常用有機溶劑提取，將生物堿酸堿化后，用到大量氯仿，苯、四氯化碳等溶劑萃取，常帶入大量的雜質，并常在萃取中形成嚴重的乳化，大大的影響了提取充分性，且毒性較大，安全性低，不適合大量生產。
發明內容
本發明的目的解決現有技術的缺陷，公開一種從長春花鮮草中提取脫水長春堿、 環氧長春堿堿的方法，制得率高，污染小，安全高，成本低。本發明是這樣實現的一種從長春花鮮草中提取脫水長春堿、環氧長春堿的方法， 其特征在于包括以下步驟
1、將新鮮長春花，切割打漿，用硫酸液浸泡2次，時間為每次4 8小時，調pH值至1 6，用篩子過濾，以4倍床體積/小時通過大孔型強酸型陽離子交換樹脂柱，柱徑比為7:1 8:1，清水去雜質，洗脫至無色后用4%氯化鈉3%的乙醇液浸泡4小時。2、用鹽液浸泡，再用含醇2% 35%的1% 4%濃度氫氧化鈉溶液洗脫，TLC檢測洗脫液，收集，濃縮，蒸干后通過硅膠柱層析分離得到生物堿，所獲得生物堿的重量百分比為長春堿2. 8^4. 1%、文多靈8. 5^9. 5%、長春新堿0. 2^0. 3%、環氧長春堿1. 3^2. 0%、長春質堿8. Γ 9.1%和脫水長春堿1.3 2.0%，其余為阿瑪堿、異長春堿等一些不具藥用價值的生物堿。所述樹脂柱為D61型或HD-8型樹脂。所述步驟(2)中的鹽液為4% 6%鈉鹽液或銨鹽液；洗脫液為含醇20% 30%的1% 4%濃度氫氧化鈉溶液。所述的TLC檢測方法采用薄層色譜紫外檢測，30:1氯仿甲醇為展開劑。傳統工藝通常需要將鮮草將鮮草陰干，然后粉碎時間較長并影響了一些藥用生物堿的含量。本發明通過將新鮮長春花草切割后，用0.59Tl%的硫酸浸泡。經超濾浸泡液，溶液直接上強酸型離子交換樹脂。用清水去雜，用堿醇洗脫，TLC檢測至無生物堿為止。濃縮收集，萃取蒸干既得長春總堿。本發明優點在于，使用新鮮的長春花鮮草，直接浸泡提取后， 通過過濾，經離子交換樹脂的分離得到長春花種的藥用有效成分，脫水長春堿，長春新堿， 環氧長春堿等。本發明方法優選方案為
1、選用新鮮的長春花草，直接切割，選取0.5%的硫酸水液浸泡；
2、離子交換樹脂優選大孔型的陽離子交換樹脂，可根據使用情況選擇氫型，鈉型，銨型，弱酸陽離子最好選擇鈉型；
3、上柱溶液ρΗ范圍2至5皆可；
4、柱徑高優選范圍在6:1…10:1；
5、樹脂可上樣量約1公斤樹脂可吸附50公斤鮮草浸泡液；
6、D61型樹脂；
7、用3%氫氧化銨30%的乙醇洗脫。本發明的有益效果是本發明生產工藝簡單，易大規模工業生產，污染小，成本低。
具體實施例方式本發明一種從長春花鮮草中提取脫水長春堿、環氧長春堿的方法，包括以下步驟
1、將新鮮長春花，切割打漿，用硫酸液浸泡2次，時間為每次4 8小時，調PH值至1 6，用篩子過濾，以4倍床體積/小時通過大孔型強酸型陽離子交換樹脂柱，柱徑比為7:1 8:1，清水去雜質，洗脫至無色后用4%氯化鈉3%的乙醇液浸泡4小時。2、用鹽液浸泡，再用含醇2% 35%的1% 4%濃度氫氧化鈉溶液洗脫，TLC檢測洗脫液，收集，濃縮，蒸干后通過硅膠柱層析分離得到生物堿，獲得的生物堿的重量百分比為長春堿2. 8^4. 1%、文多靈8. 5^9. 5%、長春新堿0. 2^0. 3%、環氧長春堿1. 3^2. 0%、長春質堿 8. Γ 9.1%和脫水長春堿1.3 2.0%，其余為阿瑪堿、異長春堿等一些不具藥用價值的生物堿。樹脂柱為D61型或HD-8型樹脂；鹽液為4% 6%鈉鹽液或銨鹽液；洗脫液為含醇20% 30%的1% 4%濃度氫氧化鈉溶液。實施例1
取新鮮長春花草100公斤，打漿粉碎后，用0. 5%硫酸液浸泡提取兩次，每次浸泡4小時。合并用浸泡液，將浸泡液調PH值到2，以4倍床體積/小時通過陽離子交換樹脂HD-8， 弱酸大孔型，柱徑比8:1，清水洗脫至無色。再用4%氯化銨3%的乙醇液浸泡4小時。用2% 氫氧化鈉5%的乙醇洗脫，用TLC檢測至生物堿出現，開始收集。合并濃縮處處理，萃取堿化液蒸干經硅膠層析分離，得生物堿40克，其中含長春堿1. 14克、長春新堿0. 08克、脫水長春堿0. 65克、環氧長春堿0. 63克、長春質堿3. 24克、文多靈3. 20克。實施例2:
取新鮮長春花草100公斤，打漿粉碎后，用0. 5%硫酸液浸泡提取兩次。每次浸泡4小時。合并用浸泡液，將浸泡液調PH值到3。以4倍床體積/小時通過陽離子交換樹脂D61， 鈉型，柱徑比8:1，清水洗脫至無色。再用4%氯化鈉2%的乙醇液浸泡4小時。用3%氫氧化鈉10%的乙醇洗脫，用TLC檢測至生物堿出現，開始收集。合并濃縮處處理，萃取堿化液蒸干經硅膠層析分離，得生物堿40克，其中長春堿1. 15克、長春新堿0. 08克、脫水長春堿 0. 68克、環氧長春堿0. 68克、長春質堿3. 47克、文多靈3. 71克。實施例3:
取新鮮長春花草100公斤，打漿粉碎后，用0. 5%硫酸液浸泡提取兩次。每次浸泡6小時。合并用浸泡液，將浸泡液調PH值到4。以4倍床體積/小時通過陽離子交換樹脂D61 ，氫型，柱徑比7:1，清水洗脫至無色。再用6%氯化胺2%的乙醇浸泡4小時。用3%氫氧化銨22%乙醇洗脫，用TLC檢測至生物堿出現，開始收集。合并濃縮處處理，萃取堿化液蒸干經硅膠層析分離，得生物堿40克，其中含長春堿1. 53克、長春新堿0. 09克、脫水長春堿0. 78 克、環氧長春堿0. 75克、長春質堿3. 48克、文多靈3. 72克。實施例4:
取新鮮長春花草100公斤，打漿粉碎后，用0. 9%硫酸液浸泡提取兩次。每次浸泡8小時。合并用浸泡液，將浸泡液調PH值到6，以4倍床體積/小時通過陽離子交換樹脂D61， 柱徑比7:1，清水洗脫至無色。再用6%氯化鈉浸泡2%的乙醇浸泡4小時。用3%氫氧化鈉 25%的乙醇洗脫，用TLC檢測至生物堿出現，開始收集。合并濃縮處處理，萃取堿化液蒸干經硅膠層析分離，得生物堿40克，其中含長春堿1. 55克、長春新堿0. 12克、脫水長春堿0. 76 克、環氧長春堿0. 78克、長春質堿3. 48克、文多靈3. 87克。實施例5:
取新鮮長春花草100公斤，打漿粉碎后，用0. 7%硫酸液浸泡提取兩次。每次浸泡8小時。合并用浸泡液，將浸泡液調PH值到5，以4倍床體積/小時通過陽離子交換樹脂D61，柱徑比8:1，清水洗脫至無色。再用4%氯化胺2%的乙醇浸泡4小時。用3%氫氧化鈉30%的乙醇洗脫，用TLC檢測至生物堿出現，開始收集。合并濃縮處處理，萃取堿化液蒸干經硅膠層析分離，得生物堿40克，其中含長春堿1. 58克、長春新堿0. 12克、脫水長春堿0. 52克、 環氧長春堿0. 08克、長春質堿3. 64克、文多靈3. 76克。
權利要求
1.一種從長春花鮮草中提取脫水長春堿、環氧長春堿的方法，其特征在于包括以下步驟(1)將新鮮長春花，切割打漿，用硫酸液浸泡2次，時間為每次4 8小時，調PH值至 1 6，用篩子過濾，以4倍床體積/小時通過大孔型強酸型陽離子交換樹脂柱，柱徑比為 7:1 8:1，清水去雜質；(2)用鹽液浸泡，再用含醇2% 35%的1% 4%濃度氫氧化鈉溶液洗脫，TLC檢測洗脫液，收集，濃縮，蒸干后通過硅膠柱層析分離得到生物堿，所獲得生物堿的重量百分比為長春堿2. 8 4. 1%、文多靈8. 5 9. 5%、長春新堿0. 2 0. 3%、環氧長春堿1. 3 2. 0%、長春質堿8. Γ 9. 1%和脫水長春堿1. 3 2. 0%，其余為其他生物堿。
2.根據權利要求1所述的一種從長春花鮮草中提取脫水長春堿、環氧長春堿的方法， 其特征在于所述步驟(1)中的酸液為0. 5% 1%的硫酸溶液，所述樹脂柱為D61型或HD-8 型樹脂。
3.根據權利要求1所述的一種從長春花鮮草中提取脫水長春堿、環氧長春堿的方法， 其特征在于所述步驟(2)中的鹽液為4% 6%鈉鹽液或銨鹽液。
4.根據權利要求1所述的一種從長春花鮮草中提取脫水長春堿、環氧長春堿的方法， 其特征在于所述步驟(2)中的洗脫液為含醇20% 30%的1% 4%濃度氫氧化鈉溶液。
全文摘要
本發明為一種從長春花鮮草中提取脫水長春堿、環氧長春堿的方法，其特征在于包括以下步驟1、將新鮮長春花，切割打漿，用硫酸液浸泡2次，每次4～8小時，調pH值至1～6，過濾，以4倍床體積/小時通過大孔型強酸型陽離子交換樹脂柱，柱徑比為7:1～8:1，清水去雜質，洗脫至無色；2、用鹽液浸泡，再用含醇2%～35%的1%～4%濃度氫氧化鈉溶液洗脫，TLC檢測洗脫液，收集，濃縮，蒸干后通過硅膠柱層析分離得到生物堿，其重量百分比為長春堿2.8~4.1%、文多靈8.5~9.5%、長春新堿0.2~0.3%、環氧長春堿1.3~2.0%、長春質堿8.1~9.1%和脫水長春堿1.3~2.0%，其余為其他生物堿。
文檔編號C07D519/04GK102432630SQ20111036777
公開日2012年5月2日 申請日期2011年11月18日 優先權日2011年11月18日
發明者倪新忠, 韓彬 申請人:上海安體康生植物化學有限公司