專利名稱：一種純化紫穗槐螺酮的方法
技術領域：
本發明屬于天然藥物化學領域，特別是涉及一種采用高速逆流色譜技術純化紫穗槐螺酮方法。
背景技術：
紫穗槐螺酮來源于豆科紫穗槐Ufflor/^a fruticosa Z.)的干燥葉。紫穗槐原產美國。廣布于中國東北、華北、河南、華東、湖北、四川等省(區)，是黃河和長江流域很好的水土保持植物。紫穗槐葉主要有效成分為黃酮類化合物，以紫穗槐螺酮單體為主要活性成分。紫穗槐螺酮具有細胞毒活性，有顯著的選擇性細胞毒活性，對KB和RPMI-7951細胞的ED5tl分別為(μ g/ml)0. 58和0. 61。對TPA誘導的EB病毒早期抗原(EBV-EA)有顯著抑制作用，其活性于VA酸和甘草次酸相當。目前，尚未發現制備高含量紫穗槐螺酮的方法報道。
發明內容
本發明的目的在于提供一種純化紫穗槐螺酮方法。為了實現上述目的，本發明的技術方案如下
一種純化紫穗槐螺酮的方法，其特征在于取紫穗槐葉粉碎，加7-10倍量70-80%乙醇回流提取2-3次，提取液靜置沉淀，濾出沉淀用乙酸乙酯溶解，過濾，濾液濃縮，注入高速逆流色譜儀，根據紫外檢測器圖譜收集目標成分，濃縮，放置過夜，析出結晶，濾出結晶，干燥即得紫穗槐螺酮。所述的回流溫度為70-100°C。所述的正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水溶劑系統體積比為3-5 2-4 4-7 2-5,上相為固定相，下相為流動相。本發明優勢在于采用高速逆流色譜分離，分離過程無產品損失，制備周期短，制備量大，易操作，克服了傳統填充柱分離過程中樣品死吸附、工藝繁瑣、重現性差的技術缺陷。下面將結合具體實施方式
進一步說明本發明，但本發明要求保護的范圍并不局限于下列實施方式。
具體實施例方式實施例1:
取紫穗槐葉粉碎，取^g，加7倍量80%乙醇溶液，在70°C溫度下回流提取3次，合并兩次提取液，靜置沉淀，濾出沉淀用乙酸乙酯溶解，過濾，濾液濃縮作為樣品溶液，取正己烷、 乙酸乙酯、甲醇、水按體積比為3:2:4:2混合，靜置分層，以上相為固定相，下相為流動相， 取上相注入高速逆流色譜柱，開啟高速逆流色譜儀，調整轉速為700rpm，同時以lOml/min的流速泵入下相，待整個系統動態平衡后，流動相流速調節為2ml/min，注入樣品溶液，紫外檢測器監測，收集目標流分，減壓濃縮后，放置過夜，析出結晶，濾出結晶，干燥得到紫穗槐螺酮6. 6g，經HPLC檢測，含量為95. 4%。實施例2:
取紫穗槐葉粉碎，取^g，加8倍量75%乙醇溶液，在80°C溫度下回流提取3次，合并兩次提取液，靜置沉淀，濾出沉淀用乙酸乙酯溶解，過濾，濾液濃縮作為樣品溶液，取正己烷、 乙酸乙酯、甲醇、水按體積比為5:4:7:5混合，靜置分層，以上相為固定相，下相為流動相， 取上相注入高速逆流色譜柱，開啟高速逆流色譜儀，調整轉速為800 rpm,同時以lOml/min 的流速泵入下相，待整個系統動態平衡后，流動相流速調節為3ml/min，注入樣品溶液，紫外檢測器監測，收集目標流分，減壓濃縮后，放置過夜，析出結晶，濾出結晶，干燥得到紫穗槐螺酮6. 8g，經HPLC檢測，含量95. 1%。實施例3:
取紫穗槐葉粉碎，取^g，加8倍量75%乙醇溶液，在100°C溫度下回流提取2次，合并兩次提取液，靜置沉淀，濾出沉淀用乙酸乙酯溶解，過濾，濾液濃縮作為樣品溶液，取正己烷、 乙酸乙酯、甲醇、水按體積比為3:4:7:2混合，靜置分層，以上相為固定相，下相為流動相， 取上相注入高速逆流色譜柱，開啟高速逆流色譜儀，調整轉速為750rpm，同時以lOml/min 的流速泵入下相，待整個系統動態平衡后，流動相流速調節為1. 5ml/min，注入樣品溶液，紫外檢測器監測，收集目標流分，減壓濃縮后，放置過夜，析出結晶，濾出結晶，干燥得到紫穗槐螺酮7. 2g，經HPLC檢測，含量93. 8%。實施例4:
取紫穗槐葉粉碎，取10kg，加10倍量75%乙醇溶液，在70°C溫度下回流提取3次，合并兩次提取液，靜置沉淀，濾出沉淀用乙酸乙酯溶解，過濾，濾液濃縮作為樣品溶液，取正己烷、乙酸乙酯、甲醇、水按體積比為3:4:6:3混合，靜置分層，以上相為固定相，下相為流動相，取上相注入高速逆流色譜柱，開啟高速逆流色譜儀，調整轉速為800rpm，同時以IOml/ min的流速泵入下相，待整個系統動態平衡后，流動相流速調節為2. 5ml/min，注入樣品溶液，紫外檢測器監測，收集目標流分，減壓濃縮后，放置過夜，析出結晶，濾出結晶，干燥得到紫穗槐螺酮13. Ig,經HPLC檢測，含量97. 8%。實施例5:
取紫穗槐葉粉碎，取15kg，加10倍量70%乙醇溶液，在100°C溫度下回流提取2次，合并兩次提取液，靜置沉淀，濾出沉淀用乙酸乙酯溶解，過濾，濾液濃縮作為樣品溶液，取正己烷、乙酸乙酯、甲醇、水按體積比為4:3:5:2混合，靜置分層，以上相為固定相，下相為流動相，取上相注入高速逆流色譜柱，開啟高速逆流色譜儀，調整轉速為700rpm，同時以IOml/ min的流速泵入下相，待整個系統動態平衡后，流動相流速調節為2ml/min，注入樣品溶液， 紫外檢測器監測，收集目標流分，減壓濃縮后，放置過夜，析出結晶，濾出結晶，干燥得到紫穗槐螺酮20. 3g，經HPLC檢測，含量為94. 4%。
權利要求
1.一種純化紫穗槐螺酮的方法，其特征在于取紫穗槐葉粉碎，加7-10倍量70-80%乙醇回流提取2-3次，提取液靜置沉淀，濾出沉淀用乙酸乙酯溶解，過濾，濾液濃縮，注入高速逆流色譜儀，根據紫外檢測器圖譜收集目標成分，濃縮，放置過夜，析出結晶，濾出結晶，干燥即得紫穗槐螺酮。
2.根據權利要求1所述純化紫穗槐螺酮的方法，其特征在于所述的回流溫度為 70-100°C。
3.根據權利要求1所述純化紫穗槐螺酮的方法，其特征在于所述的正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水溶劑系統體積比為3-5:2-4:4-7:2-5，上相為固定相，下相為流動相。
全文摘要
本發明屬于天然藥物化學領域，特別是涉及一種純化紫穗槐螺酮的方法，其特征在于取紫穗槐葉粉碎，加7-10倍量70-80%乙醇回流提取2-3次，提取液靜置沉淀，濾出沉淀用乙酸乙酯溶解，過濾，濾液濃縮，注入高速逆流色譜儀，根據紫外檢測器圖譜收集目標成分，濃縮，放置過夜，析出結晶，濾出結晶，干燥即得紫穗槐螺酮。采用本發明制備紫穗槐螺酮，工藝簡單易操作，收率高，產品含量高，適合規模化制備。
文檔編號C07D493/20GK102391282SQ20111030371
公開日2012年3月28日 申請日期2011年10月10日 優先權日2011年10月10日
發明者萬冬梅, 劉東鋒 申請人:南京澤朗醫藥科技有限公司