專利名稱：一種百子蓮皂苷a的提取分離方法
技術領域：
本發明屬于天然產物分離領域，尤其涉及一種百子蓮皂苷A的提取分離方法。
背景技術：
百子蓮皂苷A (Agapanthussaponin A)屬甾體皂苷類，分子式為C45H74O19,分子量 919. 07，溶于正丁醇、甲醇、乙醇，不溶于丙酮。百子蓮皂苷A對cAMP磷酸二酯酶呈抑制作用，IC5tl為7 μ M。百子蓮皂苷A主要來源于百合科閉口百子蓮J^aA^iAM inapertus的地下部分。目前，國內尚未見百子蓮皂苷A的工業提取純化方法的相關文獻和專利的報道。高速逆流色譜法(High-speed Countercurrent Chromatography，簡稱HSCCC)，是一種新型的、連續高效的液液分配色譜技術，與其它色譜技術不同的是它不需任何固態載體，因此能避免固相載體表面與樣品發生反應而導致樣品的污染、失活、變性和不可逆吸附等不良影響。同時它也具有適用范圍廣、快速、進樣量大、費用低、回收率高等優點。因此， 在生物、醫藥、食品、材料、化妝品和環保等領域獲得了廣泛的應用，尤其是在天然產物活性成分的分離純化領域。
發明內容
本發明要解決的技術問題是提供一種百子蓮皂苷A的提取分離方法，該方法操作
簡單，產品含量高。本發明是采用以下技術方案來實現的
(1)取閉口百子蓮原料粉碎，加生物酶酶解1-3天，得酶解原料；
(2)酶解原料中加8-15倍量50-70%甲醇常溫浸泡提取1-3次，過濾得到提取液；
(3)提取液濃縮至浸膏，加適量水分散后，加入1-3倍量的水飽和正丁醇萃取1-4次，合并萃取液加0. 5-1倍量丙酮沉淀，過濾，濾液濃縮干燥得到粗品；
(4)以石油醚-乙酸乙酯-乙醇-水(5-8 2-4 3-5 3_5)作為兩相溶劑系統，混勻后置分液漏斗中靜置分層，取上相為固定相，下相為流動相，將粗品粉末用下相溶解，注入高速逆流色譜儀，收集高含量百子蓮皂苷A流分，濃縮干燥即得百子蓮皂苷A產品。所述步驟(1)中生物酶可選果膠酶、纖維素酶和淀粉酶中的任一種，用量為原料重量的 0. 3-1%。所述步驟(4)中高速逆流色譜儀轉速750-950r/min，流動相流速1. 8-3. Oml/min。本發明的積極效果是
1)采用生物酶解分解物質組織結構，提高了提取率，縮短了提取時間，而且采用常溫提取提取雜質少，能耗低；
2)高速逆流色譜法分離無需使用載體，減少了操作過程中樣品的損失，分離效果好， 制備量大。下面將結合具體實施方式
進一步說明本發明，但本發明要求保護的范圍并不局限于下列實施例。
具體實施例方式實施例1:
閉口百子蓮原料粉碎，過40目篩，稱取3kg，加30g的果膠酶混合均勻，酶解3天，酶解原料加ML50%甲醇常溫浸泡提取2次，每次4小時，過濾得到提取液，濃縮至浸膏，加800ml 水分散，再加800ml水飽和正丁醇萃取2次，合并萃取液，加800ml丙酮沉淀，過濾，濾液濃縮干燥得到粗品；以石油醚-乙酸乙酯-乙醇-水(5 2 3 3)作為兩相溶劑系統，混勻后置分液漏斗中靜置分層，取上相為固定相，下相為流動相，將粗品粉末用下相溶解，再用上相泵滿色譜柱，然后以2. Oml/min的流速泵入流動相，平衡后設定色譜儀轉速為850r/min，通過進樣閥進樣，每次進樣量為150mg，收集高含量百子蓮皂苷A流分，濃縮干燥即得百子蓮皂苷A產品0. 7g，含量99. 3%。實施例2:
閉口百子蓮原料粉碎，過60目篩，稱取3kg，加30g的淀粉酶混合均勻，酶解2天，酶解原料加45L70%甲醇常溫浸泡提取8小時，過濾得到提取液，濃縮至浸膏，加900ml水分散， 再加IOOOml水飽和正丁醇萃取1次，合并萃取液，加IOOOml丙酮沉淀，過濾，濾液濃縮干燥得到粗品；以石油醚-乙酸乙酯-乙醇-水(6 4 5 5)作為兩相溶劑系統，混勻后置分液漏斗中靜置分層，取上相為固定相，下相為流動相，將粗品粉末用下相溶解，再用上相泵滿色譜柱，然后以2. Oml/min的流速泵入流動相，平衡后設定色譜儀轉速為750r/min，通過進樣閥進樣，每次進樣量為150mg，收集高含量百子蓮皂苷A流分，濃縮干燥即得百子蓮皂苷A產品 l.Og，含量 98. 6%。實施例3:
閉口百子蓮原料粉碎，過20目篩，稱取3kg，加9g的纖維素酶混合均勻，酶解2天，酶解原料加30L70%甲醇常溫浸泡提取2次，每次5小時，過濾得到提取液，濃縮至浸膏，加800ml 水分散，再加500ml水飽和正丁醇萃取4次，合并萃取液，加IOOOml丙酮沉淀，過濾，濾液濃縮干燥得到粗品；以石油醚-乙酸乙酯-乙醇-水(8 4 5 5)作為兩相溶劑系統，混勻后置分液漏斗中靜置分層，取上相為固定相，下相為流動相，將粗品粉末用下相溶解，再用上相泵滿色譜柱，然后以2. Oml/min的流速泵入流動相，平衡后設定色譜儀轉速為800r/min，通過進樣閥進樣，每次進樣量為150mg，收集高含量百子蓮皂苷A流分，濃縮干燥即得百子蓮皂苷A產品1.3g，含量98. 1%。實施例4:
閉口百子蓮原料粉碎，過40目篩，稱取10kg，加30g的淀粉酶混合均勻，酶解2天，酶解原料加80L60%甲醇常溫浸泡提取2次，每次6小時，過濾得到提取液，濃縮至浸膏，加IL 水分散，再加400ml水飽和正丁醇萃取3次，合并萃取液，加900ml丙酮沉淀，過濾，濾液濃縮干燥得到粗品；以石油醚-乙酸乙酯-乙醇-水(6 3 5 5)作為兩相溶劑系統，混勻后置分液漏斗中靜置分層，取上相為固定相，下相為流動相，將粗品粉末用下相溶解，再用上相泵滿色譜柱，然后以1. 8ml/min的流速泵入流動相，平衡后設定色譜儀轉速為850r/min，通過進樣閥進樣，每次進樣量為250mg，收集高含量百子蓮皂苷A流分，濃縮干燥即得百子蓮皂苷A產品2. 6g，含量99. 5%。
實施例5:
閉口百子蓮原料粉碎，過40目篩，稱取20kg，加60g的果膠酶混合均勻，酶解1天，酶解原料加160L65%甲醇常溫浸泡提取2次，每次8小時，過濾得到提取液，濃縮至浸膏，加4L 水分散，再加2L水飽和正丁醇萃取2次，合并萃取液，加2L丙酮沉淀，過濾，濾液濃縮干燥得到粗品；以石油醚-乙酸乙酯-乙醇-水(7:4:5:5)作為兩相溶劑系統，混勻后置分液漏斗中靜置分層，取上相為固定相，下相為流動相，將粗品粉末用下相溶解，再用上相泵滿色譜柱，然后以3. Oml/min的流速泵入流動相，平衡后設定色譜儀轉速為950r/min，通過進樣閥進樣，每次進樣量為200mg，收集高含量百子蓮皂苷A流分，濃縮干燥即得百子蓮皂苷A產品 6. 9g，含量 98. 9%。
權利要求
1.一種百子蓮皂苷A的提取分離方法，其特征在于包含以下步驟(1)取閉口百子蓮原料粉碎，加生物酶酶解1-3天，得酶解原料；(2)酶解原料中加8-15倍量50-70%甲醇常溫浸泡提取1-3次，過濾得到提取液；(3)提取液濃縮至浸膏，加適量水分散后，加入1-3倍量的水飽和正丁醇萃取1-4次，合并萃取液加0. 5-1倍量丙酮沉淀，過濾，濾液濃縮干燥得到粗品；(4)以石油醚-乙酸乙酯-乙醇-水(5-8 2-4 3-5 3_5)作為兩相溶劑系統，混勻后置分液漏斗中靜置分層，取上相為固定相，下相為流動相，將粗品粉末用下相溶解，注入高速逆流色譜儀，收集高含量百子蓮皂苷A流分，濃縮干燥即得百子蓮皂苷A產品。
2.如權利要求1所述的百子蓮皂苷A的提取分離方法，其特征在于所述步驟(1)中生物酶可選果膠酶、纖維素酶和淀粉酶中的任一種，用量為原料重量的0. 3-1%。
3.如權利要求2所述的百子蓮皂苷A的提取分離方法，其特征在于所述步驟(4)中高速逆流色譜儀轉速750-950r/min，流動相流速1. 8-3. Oml/min。
全文摘要
本發明涉及一種百子蓮皂苷A的提取分離方法，方法是將百子蓮藥材粉碎，加生物酶酶解1-3天，酶解原料加8-15倍量50-70%甲醇常溫浸泡提取1-3次，提取液濃縮至浸膏，加適量水分散后，加入水飽和正丁醇萃取2-4次，合并萃取液加丙酮沉淀，過濾，濾液濃縮干燥得到粗品，再采用高速逆流色譜法對粗品進行分離純化，得到百子蓮皂苷A。本方法制備量大，樣品損失少，產品含量高。
文檔編號C07J71/00GK102391354SQ20111030370
公開日2012年3月28日 申請日期2011年10月10日 優先權日2011年10月10日
發明者萬冬梅, 劉東鋒 申請人:南京澤朗醫藥科技有限公司