專利名稱：一種高純度棘白霉素類化合物的制備方法
技術領域：
本發明屬于工業微生物技術領域，具體涉及一種高純度棘白霉素類化合物FR179642的制備方法。
背景技術：
近年來，隨著廣譜抗菌藥物和免疫抑制劑的大量應用、腫瘤化療、器官移植以及艾滋病的蔓延等，導致免疫系統受到抑制的人群不斷增多，深部真菌感染的發病率開始呈現明顯的上升趨勢，且隨著抗真菌藥物的運用，真菌的耐藥性也越來越強，使得抗真菌藥物的應用有迅猛增加的趨勢。因此，抗深部真菌感染的藥物已成為抗感染藥的研究熱點之一，日益引起人們的關注。棘白菌素是一類新型的抗真菌藥，與目前臨床常用抗真菌藥物的作用機制明顯不同，是β-1，3-葡聚糖合成酶的抑制劑，作用于真菌的細胞壁。細胞壁是真菌與哺乳動物細胞之間最大的差別，所以干擾細胞壁的合成，影響細胞壁的完整性將導致真菌細胞死亡而對人無傷害，因此副作用較小，安全性較高。目前棘白菌素類藥物已經有3個品種上市，即卡泊芬凈、米卡芬凈和阿尼芬凈。其中米卡芬凈日本藤澤公司研制開發，2005年通過美國FDA認證，是繼卡泊芬凈之后FDA批準的第2種棘白菌素類抗真菌藥物。對念珠菌屬、曲霉菌屬引起的深部真菌感染有廣泛抗菌作用；對耐唑類藥物的白色念珠菌、光滑念珠菌、克柔念珠菌和其他念珠菌均有良好的抗菌活性。同時，米卡芬凈無腎毒性，并且與其他藥物幾乎無相互作用，因此有很好的臨床應用前景。米卡芬凈是一種水溶性半合成棘白菌素類抗真菌藥物，是經天然產物棘白霉素類化合物FR179642修飾而得。棘白霉素類化合物FR179642是鞘莖點霉屬(Coleophoma sp.) 的發酵代謝產物，是合成米卡芬凈的主要原料。其結構式如下
權利要求
1.一種高純度棘白霉素類化合物FR179642的制備方法，包括下述步驟 1)在棘白霉素類化合物FR179642的發酵液中加入助濾劑，攪拌均勻； 2)對發酵液進行固液分離，得到棘白霉素類化合物FR179642的濾液； 3)將棘白霉素類化合物FR179642的濾液導入大孔吸附樹脂進行吸附； 4)吸附完畢，進行樹脂凈化，然后用極性溶劑與水混合而成的解吸液進行解吸，得到棘白霉素類化合物FRl79642的解吸液； 5)解吸液中加入酸性物質調節PH值為4-5后濃縮，然后用極性溶劑結晶，得棘白霉素類化合物FRl79642粗提物； 6)將棘白霉素類化合物FR179642粗提物進行反相填料層析分離，用極性溶劑與水的混合液梯度濃度解吸； 7)層析分離得到的解吸液中加入酸性物質調節PH值為4-5后濃縮，然后用極性溶劑結晶，得到高純度的棘白霉素類化合物FR179642產品。
2.根據權利要求I所述的方法，其中步驟I)中的助濾劑為珍珠巖或硅藻土，其用量為每升發酵液50-100克。
3.根據權利要求I所述的方法，其中步驟2)中的固液分離過程為離心、板框壓濾方式。
4.根據權利要求I所述的方法，其中步驟3)中的大孔吸附樹脂為弱極性吸附樹脂，優選為AB-8或LX-18弱極性吸附樹脂，其用量為棘白霉素類化合物FR179642濾液體積的1/20-1/5。
5.根據權利要求I所述的方法，其中步驟4)、5)、6)、7)中的極性溶劑為甲醇、乙醇或丙酮中的一種。
6.根據權利要求I所述的方法，其中步驟4)中所述的樹脂凈化為用去離子水洗滌3倍柱體積，解吸液中極性溶劑的濃度為10-40%。
7.根據權利要求I所述的方法，其中步驟5)、7)所述的酸性物質為有機酸或無機酸中的一種，優選為鹽酸、草酸或冰乙酸。
8.根據權利要求I所述的方法，其中步驟5)、7)中解吸液濃縮至濃度為50-100mg/mL，結晶溶劑加入量為濃縮液體積的6-10倍。
9.根據權利要求I所述的方法，其中步驟6)中所述的反相填料為采用聚苯乙烯或聚丙烯酸酯及其衍生物制備的聚合物微球、ODS C18或Fraclite800。
10.根據權利要求I所述的方法，其中步驟6)中所述的極性溶劑與水的混合液梯度濃度解吸，解吸過程為極性溶劑濃度為5%的混合液洗滌1-3倍柱體積后，用15%濃度的混合液解吸至棘白霉素類化合物FRl79642全部解吸完畢。
全文摘要
本發明公開了一種利用鞘莖點霉屬(Coleophoma sp.)發酵培養物制備棘白霉素類化合物的方法。該方法包括經過對鞘莖點霉屬發酵培養物過濾、大孔樹脂吸附、解吸、濃縮、結晶等步驟，得到棘白霉素類化合物FR179642的粗提物，再借助反相填料對棘白霉素類化合物FR179642的粗提物進行層析分離，得到高純度的棘白霉素類化合物FR179642產品。本發明的優點在于采用大孔吸附樹脂提取分離棘白霉素類化合物FR179642，工藝簡單易行，適宜于工業化生產；將反相填料用于棘白霉素類化合物FR179642的層析分離，可以制備高純度的FR179642的產品。
文檔編號C07K7/56GK102952178SQ20111024430
公開日2013年3月6日 申請日期2011年8月24日 優先權日2011年8月24日
發明者王海燕, 張雪霞, 李寧, 李曉露, 任風芝, 林毅, 張麗, 林旸, 張金娟, 陳書紅, 成曉迅, 李麗紅, 高月麒, 張艷立, 蔣沁, 段寶玲 申請人:華北制藥集團新藥研究開發有限責任公司