專利名稱：一種商陸皂苷甲的制備方法
技術領域：
本發明屬于天然藥物提取制備領域，具體涉及一種商陸皂苷甲的制備方法。
背景技術：
商陸(Radix Phytolaccae)為商陸科植物商陸/^Fiohcca acinosa Roxb.或垂序商陸amercana L.的干燥根，具有逐水消腫、通利二便、解毒散結之功效。商陸始載于《本經》，列為下品。商陸的化學成分主要包括三萜及其苷類、多糖類、蛋白多肽類、 微量元素及其它成分等，其中商陸皂苷活性成分具有抗炎、免疫增強、抗腫瘤等多種藥理作用，以商陸皂苷甲含量最高。藥理研究表明，商陸皂苷甲(esculentoside A, 具有廣泛的藥理作用，EsA對摘除腎上腺的大鼠足跖注射交叉菜膠引起的腫脹作用與同劑量的氫化可的松相當，明顯強于非留體抗炎藥吲哚美辛；EsA有很強的抑制肉芽增生作用；EsA能夠抑制卡那霉素誘導的大鼠腹腔巨噬細胞釋放血小板(PAF)，減少LPS刺激的巨噬細胞分泌及釋放TNF、IL-U IL-6、PGE2等炎癥介質，抑制LPS有道的巨噬細胞Ca2+內流，NO的釋放，EsA還能顯著抑制兔滑膜細胞釋放TNF、IL-I、IL-6、PGE2等炎癥介質及抑制兔滑膜細胞內IL_6mRNA的表達。EsA對小鼠的自身免疫性疾病有一定治療作用。EsA對體液免疫和過度激活的巨噬細胞有顯著的抑制作用，能使巨噬細胞吞噬能力下降，能抑制淋巴細胞多種細胞因子和介質， 如IL-1、IL-2、IL-6、TNF、PGE2、PAF和NO等。基因芯片結果提示EsA可能通過對糖原合酶激酶-3、一氧化氮合酶蛋白抑制因子、金屬蛋白酶、TGF-β、免疫親和素等相關的基因靶群的調節而起抗炎及免疫調節作用。現有文獻報道采用大孔樹脂及硅膠柱層析的方法分離，經硅膠柱色譜、C18反相柱色譜、葡聚糖凝膠柱色譜等手段獲得商陸皂苷甲，或大孔樹脂、常壓柱層析、反復硅膠柱層析分離獲得商陸皂苷甲，工藝繁瑣，成本高，回收率低。采用高速逆流色譜法可達到高純度、 成本低、回收率高，優于傳統的柱層析方法，一方面沒有固態支撐體，無不可逆吸附，制備量大。
發明內容
本發明要解決的技術問題是提供一種商陸皂苷甲的制備方法，尤其是采用超臨界萃取、大孔樹脂及高速逆流色譜技術相結合的方法，制備得到高純度的商陸皂苷甲。本發明的技術方案如下
一種商陸皂苷甲的制備方法，其特征在于所述步驟為
(1)將商陸藥材粉碎，投入超臨界萃取釜中，收集商陸皂苷萃取物；
(2)將上述萃取物加水溶解分散，過濾，通過大孔吸附樹脂柱飽和吸附，上柱流速 l-3BV/h,去離子水及醇水溶液洗脫，洗脫流速2-4BV/h，收集洗脫液，減壓濃縮；
(3)將濃縮液采用高速逆流色譜進行分離純化，乙酸乙酯-正丁醇-乙醇-水為溶劑系統，上相為固定相，下相為流動相，收集目標成分，冷凍干燥，得到高純度的商陸皂苷甲。
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步驟(1)所述超臨界萃取條件為萃取壓力20_40MPa，萃取溫度40_60°C，解析壓力6-10MPa，解析溫度40-60°C，萃取時間2_6小時。步驟(2)所述大孔樹脂選用HP20、D201、XADl、AB-8、LSA-7型大孔樹脂中的一種， 洗脫劑醇水溶液為體積分數為30-95%的乙醇溶液。步驟(3)所述溶劑系統乙酸乙酯-正丁醇-乙醇-水體積比為(1-2) :(2-5) (1-2):(4-8)。本發明的有益效果是本發明采用超臨界萃取、大孔樹脂富集和高速逆流色譜分離純化，制備量大，產品純度高。
具體實施例方式實施例1:
將商陸藥材粉碎，取Ikg投入超臨界萃取釜內，在萃取壓力21.8MPa、萃取溫度42°C、 CO2流量20L/h的條件下萃取4小時，控制解析罐的壓力為6MPa，溫度47°C，分離得萃取物； 將萃取物加水溶解分散，過濾，通過D201大孔吸附樹脂柱，吸附流速為2BV/h，先用去離子水洗脫除雜，洗脫流速4BV/h，再以70%的乙醇溶液洗脫，洗脫流速4BV/h，收集乙醇洗脫液， 減壓濃縮回收乙醇，得浸膏；
取乙酸乙酯、正丁醇、乙醇、水，按比例2:4:1:5混合，倒入分液漏斗分層后，取上相為固定相注入高速螺旋管，開啟高速逆流色譜儀，調節轉速至820r/min，取下相為流動相泵入，流速2ml/min，當流動相流出時，用下相溶解浸膏，通過進樣閥進樣，定時收集流分，減壓濃縮，冷凍干燥得商陸皂苷甲5. 3g，經高效液相檢測含量98. 4%。實施例2:
將商陸藥材粉碎，取2. 5kg投入超臨界萃取釜內，在萃取壓力24. 3MPa、萃取溫度45°C、 CO2流量15L/h的條件下萃取2小時，控制解析罐的壓力為8MPa，溫度50°C，分離得萃取物； 將萃取物加水溶解分散，過濾，通過LSA-7大孔吸附樹脂柱，吸附流速為lBV/h，先用去離子水洗脫除雜，洗脫流速2BV/h，再以90%的乙醇溶液洗脫，洗脫流速2BV/h，收集乙醇洗脫液， 減壓濃縮回收乙醇，得浸膏；
取乙酸乙酯、正丁醇、乙醇、水，按比例2:5:1:4混合，倒入分液漏斗分層后，取上相為固定相注入高速螺旋管，開啟高速逆流色譜儀，調節轉速至850r/min，取下相為流動相泵入，流速2ml/min，當流動相流出時，用下相溶解浸膏，通過進樣閥進樣，定時收集流分，減壓濃縮，冷凍干燥得商陸皂苷甲13. Og,經高效液相檢測含量98. 7%。實施例3:
將商陸藥材粉碎，取5kg投入超臨界萃取釜內，在萃取壓力35. 5MPa、萃取溫度59°C、 CO2流量18L/h的條件下萃取6小時，控制解析罐的壓力為7MPa，溫度60°C，分離得萃取物； 將萃取物加水溶解分散，過濾，通過XADl大孔吸附樹脂柱，吸附流速為lBV/h，先用去離子水洗脫除雜，洗脫流速3BV/h，再以50%的乙醇溶液洗脫，洗脫流速4BV/h，收集乙醇洗脫液， 減壓濃縮回收乙醇，得浸膏；
取乙酸乙酯、正丁醇、乙醇、水，按比例1:3:2:6混合，倒入分液漏斗分層后，取上相為固定相注入高速螺旋管，開啟高速逆流色譜儀，調節轉速至900r/min，取下相為流動相泵入，流速2ml/min，當流動相流出時，用下相溶解浸膏，通過進樣閥進樣，定時收集流分，減壓濃縮，冷凍干燥得商陸皂苷甲25. 7g，經高效液相檢測含量98. 3%。實施例4:
將商陸藥材粉碎，取5kg投入超臨界萃取釜內，在萃取壓力27. 6MPa、萃取溫度43°C、 CO2流量15L/h的條件下萃取3小時，控制解析罐的壓力為lOMPa，溫度48°C，分離得萃取物；將萃取物加水溶解分散，過濾，通過AB-8大孔吸附樹脂柱，吸附流速為lBV/h，先用去離子水洗脫除雜，洗脫流速3BV/h，再以80%的乙醇溶液洗脫，洗脫流速!3BV/h，收集乙醇洗脫液，減壓濃縮回收乙醇，得浸膏；
取乙酸乙酯、正丁醇、乙醇、水，按比例1:2:2:4混合，倒入分液漏斗分層后，取上相為固定相注入高速螺旋管，開啟高速逆流色譜儀，調節轉速至800r/min，取下相為流動相泵入，流速2ml/min，當流動相流出時，用下相溶解浸膏，通過進樣閥進樣，定時收集流分，減壓濃縮，冷凍干燥得商陸皂苷甲23. Sg,經高效液相檢測含量98. 6%。實施例5:
將商陸藥材粉碎，取IOkg投入超臨界萃取釜內，在萃取壓力38. 9MPa、萃取溫度52°C、 CO2流量20L/h的條件下萃取5小時，控制解析罐的壓力為9MPa，溫度56°C，分離得萃取物； 將萃取物加水溶解分散，過濾，通過HP20大孔吸附樹脂柱，吸附流速為:3BV/h，先用去離子水洗脫除雜，洗脫流速4BV/h，再以60%的乙醇溶液洗脫，洗脫流速4BV/h，收集乙醇洗脫液， 減壓濃縮回收乙醇，得浸膏；
取乙酸乙酯、正丁醇、乙醇、水，按比例2:3:1:8混合，倒入分液漏斗分層后，取上相為固定相注入高速螺旋管，開啟高速逆流色譜儀，調節轉速至850r/min，取下相為流動相泵入，流速2ml/min，當流動相流出時，用下相溶解浸膏，通過進樣閥進樣，定時收集流分，減壓濃縮，冷凍干燥得商陸皂苷甲47. 6g，經高效液相檢測含量98. 1%。
權利要求
1.一種商陸皂苷甲的制備方法，其特征在于所述步驟為(1)將商陸藥材粉碎，投入超臨界萃取釜中，收集商陸皂苷萃取物；(2)將上述萃取物加水溶解分散，過濾，通過大孔吸附樹脂柱飽和吸附，上柱流速 l-3BV/h,去離子水及醇水溶液洗脫，洗脫流速2-4BV/h，收集洗脫液，減壓濃縮；(3)將濃縮液采用高速逆流色譜進行分離純化，乙酸乙酯-正丁醇-乙醇-水為溶劑系統，上相為固定相，下相為流動相，收集目標成分，冷凍干燥，得到高純度的商陸皂苷甲。
2.根據權利要求1所述的商陸皂苷甲的制備方法，其特征在于，步驟(1)所述超臨界萃取條件為萃取壓力20-40MPa，萃取溫度40_60°C，解析壓力6_10MPa，解析溫度40_60°C，萃取時間2-6小時。
3.根據權利要求1所述的商陸皂苷甲的制備方法，其特征在于，步驟(2)所述大孔樹脂選用HP20、D201、XADU AB_8、LSA-7型大孔樹脂中的一種，洗脫劑醇水溶液為體積分數 30-95%的乙醇溶液。
4.根據權利要求1所述的商陸皂苷甲的制備方法，其特征在于，步驟(3)所述溶劑系統乙酸乙酯-正丁醇-乙醇-水體積比為(1-2) :(2-5) :(1-2) (4-8)。
全文摘要
本發明涉及一種商陸皂苷甲的制備方法，其通過下述步驟得到將商陸藥材粉碎，采用超臨界流體萃取、大孔樹脂富集及高速逆流色譜分離純化等步驟制備得到高純度的商陸皂苷甲。本發明工藝穩定，產品純度高，經HPLC法測定商陸皂苷甲的含量在98%以上。
文檔編號C07H15/256GK102250196SQ201110225559
公開日2011年11月23日 申請日期2011年8月8日 優先權日2011年8月8日
發明者劉東鋒, 郭琴 申請人:南京澤朗醫藥科技有限公司