專利名稱：一種制備高純度刺楸皂苷a的方法
技術領域：
本發明涉及一種制備高純度刺楸皂苷A的方法，特別是涉及一種應用高速逆流色譜方法制備高純度刺楸皂苷A的方法。
背景技術：
刺楸皂苷A (kalopanaxsaponin Α)為二糖三萜皂苷，CAS號27013-91-8，分子式 C41H66O12,分子量750，無色針狀結晶，熔點^5468°C。具有抗炎、鎮痛和抗腫瘤作用。高速逆流色譜技術是一種不用任何同態載體的液、液色譜技術，其原理是基于組分在旋轉螺旋管內的相對移動而互不混溶的兩相溶劑間分布不同而分離，其分離效率和速度可以與HPLC相媲美。HSCCC分離效率高，產品純度高，不存在載體對樣品的吸附和污染， 制備量大和溶劑消耗少，操作簡單，能從極復雜的混合物中分離出特定的組分。被廣泛應用天然產物分離制備中。現有高純度刺楸皂苷A，多是采用填充柱色譜制備，如硅膠柱，凝膠柱和制備液相分離。采用硅膠柱和凝膠柱分離，樣品損失嚴重，試劑用量大，重現性差，而制備液相分離， 制備量小。如孫振學在論文“刺楸的化學成分及總皂苷的含量測定研究”公開的方法為采用乙醇提取，氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取，并兩次硅膠柱層析分離，從8kg原料中得到66mg 刺楸皂苷A。
發明內容
本發明要解決的技術問題是提供一種制備高純度刺楸皂苷A的方法，方法簡便而且收率高。為了解決上述技術問題，本發明采用以下技術方案來實現的
一種制備高純度刺楸皂苷A的方法，其特征在于以刺楸葉為原料，用80-90%甲醇浸泡提取，提取液濃縮，上NK-II大孔樹脂分離，甲醇溶液梯度洗脫，洗脫濃縮干燥得浸膏，再采用高速逆流色譜儀兩次分離制備，即得到高純度刺楸皂苷A。所述甲醇溶液梯度洗脫為3-5BV20-30%甲醇溶液洗脫雜質，再用3_5BV50_70%甲醇溶液洗脫目標成分。所述高速逆流色譜溶劑系統可選正丁醇一乙酸乙酯一水溶液系統，比例1-2 5-7 6-8,以上相為流動相，下相為固定相。本發明的積極效果是方法采用高速逆流色譜分離，不僅解決了固體填充柱色譜收率低的技術缺陷，還節約試劑，操作簡單，制備量大，是一種高效、快速的制備方法。下面將結合具體實施方式
進一步說明本發明，但本發明要求保護的范圍并不局限于下列實施方式。
具體實施例方式實施例1取干燥的刺楸葉粉碎，稱量^g，加入8倍量80%甲醇浸泡12小時，浸泡兩次，提取液減壓回收甲醇，加適量去離子水稀釋，上NK-II大孔樹脂柱吸附，取5BV20%甲醇溶液洗脫雜質，再用3BV70%甲醇溶液洗脫目標成分，洗脫濃縮干燥得浸膏90g。取正丁醇、乙酸乙酯、 水，按比例1 :5 :6在分液漏斗中充分混合，完全分層后，取下相為注入高速逆流色譜管中， 開轉主機，調節轉速800rpm，泵入上相做流動相，建立動態平衡后，流速調節為3ml/min，同時取流動相溶解浸膏，濾過，由進樣閥進樣，根據紫外檢測器圖譜，收集流分，再次分離，流分干燥，得到白色粉末刺楸皂苷A，經HPLC檢測，含量98. 3%，收率83% (相當于原料中刺楸皂苷A的量)。實施例2
取干燥的刺楸葉粉碎，稱量^g，加入5倍量90%甲醇浸泡6小時，浸泡3次，提取液減壓回收甲醇，加適量去離子水稀釋，上NK-II大孔樹脂柱吸附，取;3BV30%甲醇溶液洗脫雜質， 再用5BV50%甲醇溶液洗脫目標成分，洗脫濃縮干燥得浸膏76g。取正丁醇、乙酸乙酯、水，按比例2 :7:8在分液漏斗中充分混合，完全分層后，取下相為注入高速逆流色譜管中，開轉主機，調節轉速700rpm，泵入上相做流動相，建立動態平衡后，流速調節為2ml/min，同時取流動相溶解浸膏，濾過，由進樣閥進樣，根據紫外檢測器圖譜，收集流分，再次分離，流分干燥， 得到白色粉末刺楸皂苷A，經HPLC檢測，含量96. 8%，收率75%(相當于原料中刺楸皂苷A的量)。實施例3
取干燥的刺楸葉粉碎，稱量^g，加入7倍量85%甲醇浸泡10小時，浸泡2次，提取液減壓回收甲醇，加適量去離子水稀釋，上NK-II大孔樹脂柱吸附，取4BV25%甲醇溶液洗脫雜質，再用4BV65%甲醇溶液洗脫目標成分，洗脫濃縮干燥得浸膏81g。取正丁醇、乙酸乙酯、 水，按比例2:6 :7在分液漏斗中充分混合，完全分層后，取下相為注入高速逆流色譜管中， 開轉主機，調節轉速900rpm，泵入上相做流動相，建立動態平衡后，流速調節為lml/min，同時取流動相溶解浸膏，濾過，由進樣閥進樣，根據紫外檢測器圖譜，收集流分，再次分離，流分干燥，得到白色粉末刺楸皂苷A，經HPLC檢測，含量97. 1%，收率78% (相當于原料中刺楸皂苷A的量)。
權利要求
1.一種制備高純度刺楸皂苷A的方法，其特征在于以刺楸葉為原料，用80-90%甲醇浸泡提取，提取液濃縮，上NK-II大孔樹脂分離，甲醇溶液梯度洗脫，洗脫濃縮干燥得浸膏， 再采用高速逆流色譜兩次分離制備，即得到高純度刺楸皂苷A。
2.根據權利要求1所述制備高純度刺楸皂苷A的方法，其特征在于所述甲醇溶液梯度洗脫為3-5BV20-30%甲醇溶液洗脫雜質，再用3-5BV50-70%甲醇溶液洗脫目標成分。
3.根據權利要求1所述制備高純度刺楸皂苷A的方法，其特征在于所述高速逆流色譜溶劑系統可選正丁醇一乙酸乙酯一水溶液系統，比例1-2 5-7 6-8,以上相為流動相，下相為固定相。
全文摘要
本發明涉及了一種制備高純度刺楸皂苷A的方法，其特征在于以刺楸葉為原料，用80-90%甲醇浸泡提取，提取液濃縮，上NK-II大孔樹脂分離，甲醇溶液梯度洗脫，洗脫濃縮干燥得浸膏，再采用高速逆流色譜兩次分離制備，即得到高純度刺楸皂苷A。本方法具有操作簡單，樣品損失小，制備量大等優點，所得產品純度在95%以上。
文檔編號C07H15/256GK102276680SQ20111022555
公開日2011年12月14日 申請日期2011年8月8日 優先權日2011年8月8日
發明者劉東鋒, 楊成東 申請人:南京澤朗醫藥科技有限公司