專利名稱：一種景洪哥納香甲素的制備方法
技術領域：
本發明屬于生物技術領域，特別是涉及一種景洪哥納香甲素的制備方法。
背景技術：
景洪哥納香甲素(Cheliensisin A)，化學名稱6 (7、8—環氧一苯乙烯基)一5—乙酰氧基一5、6—二氫一2—吡喃酮，分子式C15H14O5,分子量274，白色結晶，熔點152_153°C。景洪哥納香甲素是從番荔枝科植物景洪哥納香葉中提取的一種藥用成分，在抗腫瘤活性篩選有顯示活性強，對人體白血病、胃腺癌和小白鼠肝腹水有作用。文獻“景洪哥納香甲素誘導人早幼粒白血病細胞凋亡及其信號轉導通路的研究”和專利“景洪哥納香甲素及其制備方法和應用”都報道了景洪哥納香甲素的顯著抗腫瘤作用。現有純化景洪哥納香甲素的方法為景洪哥納香葉或莖稈，用乙醇冷浸提取，減壓回收乙醇，濃縮液加水調均，用萃取，回收氯仿，得氯仿提取物，該提取物經硅膠進行柱層析，依次用石油醚，乙酸乙酯-石油醚梯洗脫，得景洪哥納香甲素(cheliensisin A)。文獻 “景洪哥納香中一個新的抗癌活性成分”和專利“景洪哥納香甲素及其制備方法和應用”公開的方法均是此種方法。該種操作復雜，工業化程度低。
發明內容
本發明的目的是為克服現有技術的不足，提供一種景洪哥納香甲素的制備方法。本發明的目的是通過以下技術解決方案來實現的
一種景洪哥納香甲素的制備方法，其特征在于以景洪哥納香葉為原料，粉碎，加5-10 倍量80-90%甲醇溶液回流提取2-3次，提取液減壓回收甲醇，濃縮液加水分散，加入大孔樹脂柱吸附，甲醇水梯度洗脫，收集有效成分，減壓濃縮至小體積，加氯仿溶液充分攪拌，靜置，收集氯仿層加入適量石油醚，冷藏結晶，結晶物濾出再用甲醇重結晶，干燥得景洪哥納香甲素產品。所述的大孔樹脂型號可選AB-8、DlOl、HPD100或HZ-816中的一種。所述的梯度洗脫為10-15倍量水一4-6倍量40-50%甲醇水一4-5倍量70-80%甲醇水。本方法的優勢是工藝采用大孔樹脂純化富集純化，和現有的萃取硅膠柱分離技術比較，具有操作簡單、生產成本低、易于批量生產等特點；后續的萃取結晶，工藝操作也較為簡單，極易重現和放大，為新的抗腫瘤藥物生產提供了工業化保障。下面將結合具體實施方式
進一步說明本發明，但本發明要求保護的范圍并不局限于下列實施方式。
具體實施例方式實施例1:
取景洪哥納香葉干燥，粉碎，取^g，加50L80%甲醇溶液回流1小時，過濾液體再加25L80%甲醇提取2次，合并提取液過濾，減壓回收甲醇，濃縮液加水分散，加入AB-8大孔樹脂柱吸附，依次用10倍量水一6倍量40%甲醇水一4倍量80%甲醇洗脫，收集80%甲醇洗脫液，減壓濃縮至1/20體積，加等體積氯仿溶液充分攪拌，靜置，收集氯仿層加石油醚至有沉淀物析出止，冷藏結晶，結晶物濾出再用甲醇重結晶，干燥得景洪哥納香甲素白色結晶 6. 6g。實施例2:
取景洪哥納香葉干燥，粉碎，取^g，加40L90%甲醇溶液回流1小時，提取2次，合并提取液過濾，減壓回收甲醇，濃縮液加水分散，加入DlOl大孔樹脂柱吸附，依次用15倍量水 —4倍量50%甲醇水一5倍量70%甲醇洗脫，收集70%甲醇洗脫液，減壓濃縮至1/30體積， 加1. 5倍體積的氯仿溶液充分攪拌，靜置，收集氯仿層加石油醚至有沉淀物析出止，冷藏結晶，結晶物濾出再用甲醇重結晶，干燥得景洪哥納香甲素白色結晶5. Sg。實施例3:
取景洪哥納香葉干燥，粉碎，取^g，加40L85%甲醇溶液回流1小時，提取2次，合并提取液過濾，減壓回收甲醇，濃縮液加水分散，加入HPD100大孔樹脂柱吸附，依次用10倍量水一4倍量45%甲醇水一5倍量75%甲醇洗脫，收集75%甲醇洗脫液，減壓濃縮至1/20體積，加等體積的氯仿溶液充分攪拌，靜置，收集氯仿層加入石油醚至有沉淀物析出止，冷藏結晶，結晶物濾出再用甲醇重結晶，干燥得景洪哥納香甲素白色結晶6. 3g。實施例4:
取景洪哥納香葉干燥，粉碎，取^g，加40L80%甲醇溶液回流1小時，提取2次，合并提取液過濾，減壓回收甲醇，濃縮液加水分散，加入HZ-816大孔樹脂柱吸附，依次用10倍量水 —4倍量50%甲醇水一5倍量70%甲醇洗脫，收集70%甲醇洗脫液，減壓濃縮至1/30體積， 加等體積的氯仿溶液充分攪拌，靜置，收集氯仿層加石油醚至有沉淀物析出止，冷藏結晶， 結晶物濾出再用甲醇重結晶，干燥得景洪哥納香甲素白色結晶7. 4g。實施例5:
取景洪哥納香葉干燥，粉碎，取10kg，加80L80%甲醇溶液回流1小時，提取2次，合并提取液過濾，減壓回收甲醇，濃縮液加水分散，加入HPD100大孔樹脂柱吸附，依次用10倍量水 —4倍量50%甲醇水一4倍量75%甲醇洗脫，收集75%甲醇洗脫液，減壓濃縮至1/30體積， 加等體積的氯仿溶液充分攪拌，靜置，收集氯仿層加石油醚至有沉淀物析出止，冷藏結晶， 結晶物濾出再用甲醇重結晶，干燥得景洪哥納香甲素白色結晶13. 6g。實施例6:
取景洪哥納香葉干燥，粉碎，取20kg，加150L80%甲醇溶液回流1小時，提取2次，合并提取液過濾，減壓回收甲醇，濃縮液加水分散，加入HZ-816大孔樹脂柱吸附，依次用10倍量水一4倍量50%甲醇水一4倍量75%甲醇洗脫，收集75%甲醇洗脫液，減壓濃縮至1/30體積，加等體積的氯仿溶液充分攪拌，靜置，收集氯仿層加石油醚至有沉淀物析出止，冷藏結晶，結晶物濾出再用甲醇重結晶，干燥得景洪哥納香甲素白色結晶26. lg。
權利要求
1.一種景洪哥納香甲素的制備方法，其特征在于以景洪哥納香葉為原料，粉碎，加 5-10倍量80-90%甲醇溶液回流提取2-3次，提取液減壓回收甲醇，濃縮液加水分散，加入大孔樹脂柱吸附，甲醇水梯度洗脫，收集有效成分，減壓濃縮至小體積，加氯仿溶液充分攪拌， 靜置，收集氯仿層加入適量石油醚，冷藏結晶，結晶物濾出再用甲醇重結晶，干燥得景洪哥納香甲素產品。
2.根據權利要求1所述景洪哥納香甲素的制備方法，其特征在于所述的大孔樹脂型號可選 AB-8、DlOl、HPD100 或 HZ-816 中的一種。
3.根據權利要求1所述景洪哥納香甲素的制備方法，其特征在于所述的梯度洗脫為 10-15倍量水一4-6倍量40-50%甲醇溶液一4-5倍量70-80%甲醇溶液。
全文摘要
本發明提供一種景洪哥納香甲素的制備方法，方法是以景洪哥納香葉為原料，粉碎，加5-10倍量80-90%甲醇溶液回流提取2-3次，提取液減壓回收甲醇，濃縮液加水分散，加入大孔樹脂柱吸附，甲醇水梯度洗脫，收集有效成分，減壓濃縮至小體積，加氯仿溶液充分攪拌，靜置，收集氯仿層加入適量石油醚，冷藏結晶，結晶物濾出再用甲醇重結晶，干燥得景洪哥納香甲素產品。本發明采用大孔樹脂富集純化，工藝簡單易操作，生產成本低，易于工業化生產。
文檔編號C07D407/04GK102329310SQ20111021062
公開日2012年1月25日 申請日期2011年7月26日 優先權日2011年7月26日
發明者劉東鋒, 李法慶 申請人:蘇州寶澤堂醫藥科技有限公司