專利名稱：從宣木瓜果實中提取齊墩果酸及制備齊墩果酸標準品的方法
從宣木瓜果實中提取齊墩果酸及制備齊墩果酸標準品的方
法
背景技術：
本發明屬于天然產物分離純化領域，具體涉及一種從宣木瓜果實中提取齊墩果酸及制備齊墩果酸標準品的方法。
背景技術：
宣木瓜是安徽著名特產，以“百益之果”著稱，是衛生部2003年公布的30個藥食兼用品種之一。宣木瓜富含黃酮類、皂甙、氨基酸、超氧化物歧化酶(SOD)等多種生物活性物質，以及鉀、鈣、鎂、鋅、鐵等多種微量元素，在醫用化學、植物化學、生物制藥、醫療保健和綠色食品等領域均有廣泛的應用前景。齊墩果酸(oleanolic acid, OA)別名土當歸酸、慶四素等，為五環三萜酸，屬齊墩果苷，是宣木瓜中主要的生理活性物質。目前相關研究大多集中在宣木瓜中蘆丁、黃酮、微量元素的提取和測定上。齊墩果酸因結構較復雜，人工合成繁瑣，目前主要依賴從植物中提取。因此，研究分離宣木瓜中齊墩果酸，有重要的實際應用價值。齊墩果酸具有保肝、護胃、強心、降糖、降脂、降血壓的生物活性外，還有抗菌消炎、 抗氧化、免疫調節、抑制血小板凝集等作用，具有多種藥理功效，并有一定的抗腫瘤、抗癌活性，是一種極具開發價值的天然活性物質。與本發明接近的技術和研究，大多是木瓜(與宣木瓜成分，用途不同)。在宣木瓜齊墩果酸研究方面只有一篇關于齊墩果酸含量測定，其中有提取過程，但主要是測定過程中所需要的步驟，不是提取和制取產品，所以，存在本質差異，且提取工藝步驟繁瑣，所得產品——齊墩果酸純度不高。
發明內容
本發明公開了一種從宣木瓜果實中提取齊墩果酸及制備齊墩果酸標準品的方法。 本發明方法提取齊墩果酸，工藝簡單，齊墩果酸的收率高，穩定性好；純化后的齊墩果酸純度很高，最終產品純度達到97. 50%以上。本發明的目的可以通過以下技術措施來實現一種從宣木瓜果實中提取齊墩果酸的方法，其特征在于具體包括以下步驟(1)將經過篩選的宣木瓜果實、清洗、切片、陰干后，在40°C -60°C下真空干燥，然后再粉碎，過40-45目篩，得宣木瓜果實粉；(2)將宣木瓜果實粉加入到乙醇溶液中，在30°C -50°C下，超聲波輔助提取 30-50min,經多次提取后，將提取液真空濃縮，得粗提物，并回收溶劑，宣木瓜果實粉與乙醇溶液的重量比為1 (10-15)，乙醇溶液的濃度為60-85% ；(3)將所得粗提物加水混溶后，再加入等量正丁醇的飽和水溶液萃取多次，收集有機層并真空濃縮，得浸膏狀物質，同時回收正丁醇；(4)將步驟C3)所得得浸膏狀物質用甲醇溶解，經濾膜過濾，即得齊墩果酸樣品液。
一種利用權利要求1提取的齊墩果酸制備齊墩果酸標準品的方法，其特征在于 具體包括以下步驟(1)大孔樹脂初步純化處理將權利要求1制得的齊墩果酸樣品液濃縮，用95%乙醇溶解，以0. 9-1. lmL/min流速上樣，靜止3 4h后，先用蒸餾水洗去水溶性雜質，再分別用20 %、50 %、95 %乙醇溶液洗脫，洗脫流速為1. 5mL/min,收集95 %乙醇洗脫液，回收乙
醇，蒸干，即得皂甙粗品；(2)硅膠柱層析將經大孔樹脂層析初步純化的粗品用甲醇溶解后上柱，并用50% 和95%甲醇洗脫，分段收集洗脫液，將95%甲醇洗脫液濃縮蒸干，即得白色針狀結晶；(3)將白色針狀結晶溶于甲醇中，用HPLC制備色譜分離精制，按制備色譜圖出峰時間分管收集洗脫液，將HPLC檢測純度大于95%的流份合并，氮吹去凈溶劑，即得齊墩果酸標準品，HPLC檢測純度的流動相為乙腈水=95 5(V V)；檢測波長210nm ；柱溫 25 °C。所述的利用權利要求提取的齊墩果酸制備齊墩果酸標準品的方法，其特征在于 步驟⑶所述的HPLC制備色譜的條件為洗脫液為甲醇水，甲醇水中甲醇與水的體積比為 85 15 ；體積流量:10mL/min ；檢測波長2IOnm ；柱溫:25°C ；進樣量1. 5mL。本發明的優點在于(1)本發明方法，提取分離工藝簡單而嚴密，方法可靠；(2)本發明方法，提取齊墩果酸的收率高，穩定性好；(3)本發明方法，提取的齊墩果酸的純度高，達到97. 50%以上。(4)利用宣木瓜果實為原料提取齊墩果酸，資源豐富，可以深度開發宣木瓜綜合利用價值。本發明以宣木瓜果實為原料，為綜合利用宣木瓜資源提供理論和實際應用依據， 本發明在工業化實施后，將對促進宣木瓜產業發展、對宣木瓜資源深度開發等方面具有積極意義。
具體實施例方式現以實驗室實施為例，非限定實施例敘述如下將宣木瓜果實經篩選、清洗、切片、陰干后，50°C真空干燥，粉碎，過40目篩(孔徑 0. 425mm)；原料粉中加入相當于原料粉重量10-15倍的60-85%乙醇，30°C -50°C，300W功率條件下超聲波輔助提取30-50min，經兩次提取后，將提取液真空濃縮回收溶劑得粗提物。 將所得浸膏加水混溶后再加入等量正丁醇的飽和水溶液萃取三次，將有機層合并后真空濃縮，回收正丁醇，濃縮得的浸膏狀物質用甲醇溶解，搖勻，經0. 45 μ m微孔濾膜過濾，即得樣品液。樣品液濃縮后，用95%乙醇溶解，以1. OmL/min流速上樣，靜止3 4h后，先用蒸餾水洗去水溶性雜質，再分別用20^^50^^95%乙醇溶液洗脫，洗脫流速為1. 5mL/min。收集 95%乙醇洗脫液，回收乙醇，蒸干，即得皂甙粗品；將C18硅膠用甲醇充分浸泡脫氣后，重力沉降法裝柱。用甲醇充分洗出雜質后，再用50-70%乙腈水溶液平衡。將經大孔樹脂層析初步純化的粗品，溶于甲醇后上柱，并用50%和95%甲醇洗脫，層析過程在常溫常壓下進行； 分段收集洗脫液，將95%甲醇洗脫液濃縮蒸干，即得白色針狀結晶。將白色針狀結晶溶于甲醇，用HPLC制備色譜分離精制(HPLC制備色譜條件為甲醇水(85 15)；體積流量IOmL/min ；檢測波長210nm ；柱溫:25。C ；進樣量1. 5mL)，按制備色譜圖出峰時間分管收集洗脫液，將HPLC檢測(HPLC檢測條件為乙腈水=95 5(V V)為流動相；檢測波長:210nm ； 柱溫25°C )純度大于95%的流份合并，氮吹去凈溶劑，即得齊墩果酸標準品，測得純度為 97. 50%，產率為 1. 23mg/g。
權利要求
1.一種從宣木瓜果實中提取齊墩果酸的方法，其特征在于具體包括以下步驟(1)將經過篩選的宣木瓜果實、清洗、切片、陰干后，在40°c-60°C下真空干燥，然后再粉碎，過40-45目篩，得宣木瓜果實粉；(2)將宣木瓜果實粉加入到乙醇溶液中，在30°C-50°C下，超聲波輔助提取30-50min， 經多次提取后，將提取液真空濃縮，得粗提物，并回收溶劑，宣木瓜果實粉與乙醇溶液的重量比為1 (10-15)，乙醇溶液的濃度為60-85% ；(3)將所得粗提物加水混溶后，再加入等量正丁醇的飽和水溶液萃取多次，收集有機層并真空濃縮，得浸膏狀物質，同時回收正丁醇；(4)將步驟C3)所得得浸膏狀物質用甲醇溶解，經濾膜過濾，即得齊墩果酸樣品液。
2.一種利用權利要求1提取的齊墩果酸制備齊墩果酸標準品的方法，其特征在于具體包括以下步驟(1)大孔樹脂初步純化處理將權利要求1制得的齊墩果酸樣品液濃縮，用95%乙醇溶解，以0. 9-1. lmL/min流速上樣，靜止3 4h后，先用蒸餾水洗去水溶性雜質，再分別用 20 %、50 %、95 %乙醇溶液洗脫，洗脫流速為1. 5mL/min,收集95 %乙醇洗脫液，回收乙醇，蒸干，即得皂甙粗品；(2)硅膠柱層析將經大孔樹脂層析初步純化的粗品用甲醇溶解后上柱，并用50%和 95%甲醇洗脫，分段收集洗脫液，將95%甲醇洗脫液濃縮蒸干，即得白色針狀結晶；(3)將白色針狀結晶溶于甲醇中，用HPLC制備色譜分離精制，按制備色譜圖出峰時間分管收集洗脫液，將HPLC檢測純度大于95%的流份合并，氮吹去凈溶劑，即得齊墩果酸標準品，HPLC檢測純度的流動相為乙腈水=95 5 (V V)；檢測波長210nm ；柱溫25°C。
3.根據權利要求2所述的利用權利要求提取的齊墩果酸制備齊墩果酸標準品的方法， 其特征在于步驟C3)所述的HPLC制備色譜的條件為洗脫液為甲醇水，甲醇水中甲醇與水的體積比為85 15 ；體積流量:10mL/min ；檢測波長:210nm ；柱溫25°C;進樣量1. 5mL。
全文摘要
本發明公開了一種從宣木瓜果實中提取齊墩果酸及制備齊墩果酸標準品的方法。首先將宣木瓜果實洗凈，陰干后粉碎成粉狀，再用乙醇溶解，超聲波助提，得到粗提物，加入水中混溶，再加入正丁醇的飽和水溶液萃取多次，濃縮后得浸膏狀物質，溶解后納濾得到齊墩果酸的樣品液，所得的樣品液經大孔樹脂初步純化，再經硅膠柱層析，HPLC制備色譜分離精制得到齊墩果酸標準品。本發明方法工藝簡單，操作方便，齊墩果酸的收率高，純度高，可以做成標準品。
文檔編號C07J63/00GK102229638SQ201110104760
公開日2011年11月2日 申請日期2011年4月26日 優先權日2011年4月26日
發明者丁之恩, 屈曉清, 王曉燕, 盛俠 申請人:安徽農業大學