專利名稱：IgG－IgM聚合物及其聚合方法
技術領域：
本發明涉及一種IgG - IgM聚合物及其聚合方法，特別涉及一種增強體外免疫反應體系的抗干擾能力的IgG - IgM聚合物及其聚合方法，屬于分子生物學領域。
背景技術：
抗原(antigen)是指能在機體中產生特異性免疫應答的物質，它進入機體后，能刺激機體產生抗體(antibody)，激發細胞免疫。抗原的分子量一般大于5000，而小分子的半抗原(hapten)必須與大分子蛋白質結合后才能引起機體產生特異性抗體。抗原的反應性取決于抗原決定簇(antigenic determinant)，或表位(印itope)。根據抗原分子量大小和其蛋白質結構，一個抗原分子可帶有不同的決定簇。抗體是指能與抗原特異結合的免疫球蛋白(immunoglobulin，Ig)，分為五類，即 IgG.IgMagA,IgD和IgE，與免疫測定有關的是IgG和IgM。每個Y型狀的IgG單體有二個抗原結合部位或價，分子量為150000。而IgM是由五個單體組成的五聚體，具有10個抗原結合價，可是由于空間位置的影響，只表現為五個抗原結合價，IgM的分子量為900000。針對同一個抗原不同決定簇的同一個機體產生的系列抗體稱為多克隆抗體。而針對同一個抗原、同一個決定簇的同一個機體產生的抗體稱為單克隆抗體。抗體的動物源性是指抗體產生的動物種類。利用抗體抗原結合反應的原理從而檢測待測物的含量已被廣泛應用于體外診斷技術數十年。而顯色化合物加入產生的酶聯免疫技術，使得靈敏度得到了很大提高。同位素示蹤物的加入而產生的放射免疫法，使靈敏度更上了一個臺階，可是由此產生的放射性廢物的處理以及放射線對人體造成的可能傷害，妨礙了這個技術的進一步發展。上個世紀九十年代發展起來的化學發光免疫法，利用酶或其他標記物在抗體抗原結合反應而引發的鏈式化學反應，測定化學能轉換過程中釋放的光子，從而得到待測物的含量。由于這種鏈式化學反應能夠幾何數量級地放大光子信號，使得測量靈敏度獲得了極大提高，同時擴大了線性范圍從而改善了高低端的準確性，這奠定了化學發光在免疫檢測中的理論基礎。但是， 由于各個檢測樣本的多樣性，其內含物各有所不同，許多小分子或相似物會干擾正常的抗體抗原特異反應，從而引起抗體的非特異結合反應。由于化學發光的高敏感性，如果不能有效的抑制這種非特異反應，那么不可避免的會產生假陽、假陰結果，特別是在線性低 端的假陽不準確性。
發明內容
本發明提供一種IgG - IgM聚合物及其聚合方法，目的是降低免疫測定時小分子或相似物的干擾。為達到上述目的，本發明采用的第一種技術方案是一種IgG - IgM聚合物，其特征在于所述IgG - IgM聚合物符合通式(1)所示，
權利要求
1.一種IgG - IgM聚合物，其特征在于所述IgG - IgM聚合物符合通式(1)所示，
2.—種IgG - IgM聚合物的聚合方法，其特征在于主要由下列步驟組成第一步、將IgM免疫球蛋白溶于ρΗ值為7. 2的磷酸鹽緩沖液中得到濃度為2mg/ml的 IgM免疫球蛋白緩沖液，然后裝入透析袋中，在2 8°C條件下，ρΗ值為7. 2的磷酸鹽緩沖液中透析8 15小時；同時將IgG免疫球蛋白溶于ρΗ值為7. 2的磷酸鹽緩沖液中得到濃度為2mg/ml的IgG免疫球蛋白緩沖液，然后裝入透析袋中，在2 8°C條件下，ρΗ值為7. 2 的磷酸鹽緩沖液中透析8 15小時；第二步、分別移出第一步中透析后的IgM免疫球蛋白緩沖液和透析后的IgG免疫球蛋白緩沖液，然后分別向所述透析后的IgM免疫球蛋白緩沖液和透析后的IgG免疫球蛋白緩沖液中加入N-琥珀酰胺-3- (2-吡啶二硫)丙酸酯的無水乙醇溶液；其中，所述透析后的 IgM免疫球蛋白緩沖液中的IgM免疫球蛋白與所述N-琥珀酰胺-3- (2-吡啶二硫)丙酸酯的無水乙醇溶液中的N-琥珀酰胺-3- (2-吡啶二硫)丙酸酯兩者之間的摩爾比為20:1 ；所述透析后的IgG免疫球蛋白緩沖液中的IgG免疫球蛋白與所述N-琥珀酰胺-3- (2-吡啶二硫)丙酸酯的無水乙醇溶液中的N-琥珀酰胺-3- (2-吡啶二硫)丙酸酯兩者之間的摩爾比為20:1 ；所述透析后的IgM免疫球蛋白緩沖液中的IgM免疫球蛋白與所述N-琥珀酰胺-3- (2-吡啶二硫)丙酸酯的無水乙醇溶液中的N-琥珀酰胺-3- (2-吡啶二硫)丙酸酯反應生成的產物為IgM-SPDP，其結構如式(2)所示，得到IgM免疫球蛋白初聚液
3.根據權利要求2所述的IgG- IgM聚合物的聚合方法，其特征在于將所述第七步中得到的IgG - IgM聚合物與其體積相等的甘油混合均勻，然后與零下20°C條件下保存。
4.一種IgG - IgM聚合物的聚合方法，其特征在于主要由下列步驟組成第一步、將IgM免疫球蛋白溶于pH值為7. 2的磷酸鹽緩沖液中得到濃度為2mg/ml的 IgM免疫球蛋白緩沖液，然后裝入透析袋中，在2 8°C條件下，pH值為7. 2的磷酸鹽緩沖液中透析8 15小時；同時將IgG免疫球蛋白溶于pH值為7. 2的磷酸鹽緩沖液中得到濃度為2mg/ml的IgG免疫球蛋白緩沖液，然后裝入透析袋中，在2 8°C條件下，pH值為7. 2 的磷酸鹽緩沖液中透析8 15小時；第二步、分別移出第一步中透析后的IgM免疫球蛋白緩沖液和透析后的IgG免疫球蛋白緩沖液，然后分別向所述透析后的IgM免疫球蛋白緩沖液和透析后的IgG免疫球蛋白緩沖液中加入N-琥珀酰胺-3- (2-吡啶二硫)丙酸酯的無水乙醇溶液；其中，所述透析后的 IgM免疫球蛋白緩沖液中的IgM免疫球蛋白與所述N-琥珀酰胺-3- (2-吡啶二硫)丙酸酯的無水乙醇溶液中的N-琥珀酰胺-3- (2-吡啶二硫)丙酸酯兩者之間的摩爾比為20:1 ；所述透析后的IgG免疫球蛋白緩沖液中的IgG免疫球蛋白與所述N-琥珀酰胺-3- (2-吡啶二硫)丙酸酯的無水乙醇溶液中的N-琥珀酰胺-3- (2-吡啶二硫)丙酸酯兩者之間的摩爾比為20:1 ；所述透析后的IgM免疫球蛋白緩沖液中的IgM免疫球蛋白與所述N-琥珀酰胺-3- (2-吡啶二硫)丙酸酯的無水乙醇溶液中的N-琥珀酰胺-3- (2-吡啶二硫)丙酸酯反應生成的產物為IgM-SPDP，其結構如式(5)所示，得到IgM免疫球蛋白初聚液
5.根據權利要求4所述的IgG - IgM聚合物的聚合方法，其特征在于將所述第七步中得到的IgG - IgM聚合物與其體積相等的甘油混合均勻，然后與零下20°C條件下保存。
全文摘要
一種IgG－IgM聚合物，其特所述IgG－IgM聚合物符合通式(1)所示， (1)；式中，當A是IgG免疫球蛋白時，B是IgM免疫球蛋白；當A是IgM免疫球蛋白時，B是IgG免疫球蛋白；n＝10～1000。所述IgG－IgM聚合物的聚合方法是SPDP法。本發明得到的IgM-IgG聚合體能有效地抑制非特異反應，從而提高反應系統的抗干擾能力。
文檔編號C07K16/46GK102219857SQ20111010356
公開日2011年10月19日 申請日期2011年4月25日 優先權日2011年4月25日
發明者徐德鳴, 王智聯, 范寶臣 申請人:江蘇昶迅生物科技有限公司