專利名稱：一種紫丁香苷的提取工藝的制作方法
技術領域：
本發明所屬醫藥產品研究開發技術領域。本發明涉及一種紫丁香苷的提取工藝。 本發明產品具有抗炎鎮痛、抗癌活性及保肝作用，本發明產品適合工業化生產。
背景技術：
暴馬丁香(Syringa Reticulata)又名暴馬子、白丁香，為木犀科丁香屬植物。味 苦，性微寒。主要分布在小興安嶺以南各山區，大興安嶺只有零星分布；此外，我國吉林、 遼寧、華北、西北、華中以及朝鮮，俄羅斯的遠東地區，日本也有分布。樹姿美觀，花香濃郁， 可做蜜源植物和提取芳香油0. 05%，，種子含脂肪油觀.6%，可榨取供工業用，葉含單寧 19. 50%，樹皮含單寧5. 72%，可作烤膠原料，木材材質堅實致密，結構均一，具有特殊清香 氣味，可供建筑、器具、家具及細木工用材，尤宜做鋤把、碗櫥、茶杯、茶葉筒、煙盒、食具等， 有特異清香氣味且不變形。暴馬丁香花序大，花期長，香味濃，又是公園、庭院及行道較好的 綠化觀賞樹種。全株可入藥，其嫩葉、嫩枝、花可調制保健茶葉，具有清熱解毒，鎮咳祛痰的 作用。可治療支氣管癌、肉瘤、白血病、高血壓、心臟病、浮腫、動脈硬化等疾病。經現代藥理 實驗證明暴馬丁香具有清肺祛痰、止咳、消炎、平喘、利尿等功效[1_8]。目前國內外關于暴馬 丁香中化學成分的研究報道并不多見，徐東銘等[9]從樹皮中分離得到羥乙基_3，4-二 羥基苯；梁文藻等_從暴馬子中分離出暴馬醛酸甲酯；Masao Kikuchi等研究小組[11_14] 對暴馬丁香葉進行了系統的研究，一共分離出40余種成分，大部分為苷類成分。徐國興[15] 從暴馬丁香枝中分離得到6個單體化合物，其中有紫丁香苷，且紫丁香苷為暴馬丁香枝的 主要活性成分之一。據文獻報道紫丁香苷具有抗炎鎮痛、抗高血糖、抗抑郁、抗癌活性及保 肝作用[15_19]。近幾年來，利用暴馬丁香樹皮中提取的紫丁香苷生產的芩暴紅止咳片在市場 上非常暢銷，可見暴馬丁香是個綜合利用價值非常高的樹種，具有廣闊的市場前景。但是生 產紫丁香苷的原料主要靠野生資源的暴馬丁香樹皮，原本暴馬丁香的數量就不多，又每年 有大量暴馬丁香被剝皮而死亡，野生資源陸續減少，可利用資源已近枯竭，因此已被政府列 為保護樹種，從而導致市場原料更加短缺，收購價格一漲再漲，偷砍盜伐野生暴馬丁香資源 更加嚴重。唯一的解決方法人工栽培營造大面積暴馬丁香藥用原料林，這樣一來既保護天 然暴馬丁香林，又能維持，擴大生產暴馬丁香產品的產業化發展，滿足市場，還能為種植戶 農民帶來非常好的經濟回報。但在其種植過程中，每年有大量的暴馬丁香枝條被修剪下來， 造成了資源的嚴重浪費，如能對暴馬丁香枝條加以充分研究和利用，對緩解暴馬丁香資源 緊張的局面及其可持續發展具有重大的意義。以暴馬丁香枝條中紫丁香苷的含量為指標， 優選出合理的暴馬丁香枝條中紫丁香苷的超聲提取條件，使暴馬丁香枝條資源得到充分利 用，并為進一步開發其相關產品提供理論依據。
發明內容
1、一種紫丁香苷的提取工藝，其特征在于該提取工藝包括以下過程步驟(一)取暴馬丁香枝條粉碎為40目，加入暴馬丁香枝條17 21倍的 60%乙醇浸泡1- 后，超聲提取1次，超聲提取時間為80-90min，超聲功率為80w，溫度為 30°C，過濾，得到乙醇提取液和殘渣；步驟(二)將(一)中殘渣再重復超聲提取2次，得到乙醇提取液；步驟(三)將(一)和(二)中乙醇提取液合并，回收乙醇溶劑，得到濃縮液；步驟(四)向(三)中濃縮液加水稀釋，過濾得上清液；步驟(五)將(四)中的上清液上D皿大孔吸附樹脂柱吸附，分別用蒸餾水、10% 濃度乙醇洗脫，得到10%濃度乙醇洗脫液；步驟(六)將(五)中的10%濃度乙醇洗脫液，上JTY-I反向樹脂柱層析，收集 洗脫液，回收溶劑得粗結晶，以甲醇溶劑重結晶得到紫丁香苷。根據本發明，本發明中的“ ％，，是重量百分比。
具體實施例方式本發明所述的涉及一種紫丁香苷的提取工藝包括以下實施例，下面的實施例可進 一步說明本發明，但不以任何方式限制本發明。實施例1 步驟(一)取暴馬丁香枝條粉碎為40目，加入暴馬丁香枝條17倍的乙醇浸 泡1- 后，超聲提取1次，超聲提取時間為80min，超聲功率為80w，溫度為30°C，過濾，得到 乙醇提取液和殘渣；步驟(二)將(一)中殘渣再重復超聲提取2次，得到乙醇提取液；步驟(三)將(一)和(二)中乙醇提取液合并，回收乙醇溶劑，得到濃縮液；步驟(四)向(三)中濃縮液加水稀釋，過濾得上清液；步驟(五)將(四)中的上清液上D皿大孔吸附樹脂柱吸附，分別用蒸餾水、10% 濃度乙醇洗脫，得到10%濃度乙醇洗脫液；步驟(六)將(五)中的10%濃度乙醇洗脫液，上JTY-I反向樹脂柱層析，收集 洗脫液，回收溶劑得粗結晶，以甲醇溶劑重結晶得到紫丁香苷。實施例2:步驟(一)取暴馬丁香枝條粉碎為40目，加入暴馬丁香枝條21倍的60%乙醇浸 泡后，超聲提取1次，超聲提取時間為80-90min，超聲功率為80w，溫度為30°C，過濾，得 到乙醇提取液和殘渣；步驟(二)將(一)中殘渣再重復超聲提取2次，得到乙醇提取液；步驟(三)將(一)和(二)中乙醇提取液合并，回收乙醇溶劑，得到濃縮液；步驟(四)向(三)中濃縮液加水稀釋，過濾得上清液；步驟(五)將(四)中的上清液上D皿大孔吸附樹脂柱吸附，分別用蒸餾水、10% 濃度乙醇洗脫，得到10%濃度乙醇洗脫液；步驟(六)將(五)中的10%濃度乙醇洗脫液，上JTY-I反向樹脂柱層析，收集 洗脫液，回收溶劑得粗結晶，以甲醇溶劑重結晶得到紫丁香苷。藥理實驗暴馬丁香枝條中紫丁香苷提取工藝的實驗1材料與方法
1. 1主要試驗材料、試藥與儀器暴馬丁香樹枝條采集于吉林省臨江市老嶺基地，由吉林農業大學園藝學院胡全德 教授鑒定為暴馬丁香 Syringa Amurensis (Rupr. et Maxim.)枝條。乙腈(色譜純，美國Fisher公司)；甲醇(色譜純，美國進口)；雙蒸水(經微孔濾 膜濾過)；乙醇(分析純，北京化工廠)。紫丁香苷(本實驗室自制)白色針晶，mp 190 192°C (甲醇)，三氯化鐵-鐵氰化鉀顯色反應呈陽性，示存在酚羥基；Molish反應陽性，示 存在糖基。主要質譜峰m/z 395. 2，由于糖苷類化合物在正離子譜中主要以和Na+形成加和 離子峰[M+Na]+的形式出現，由此我們可以斷定化合物的分子量372，與文獻報道紫丁香苷 的分子量相吻合。m/z 364為[395-CH30], m/z 232. 2為[395-glc]，這與紫丁香苷(紫丁 香β-葡萄糖苷)的結構完全符合。與對照品紫丁香苷同板3種不同展開劑(A、B、C)共薄 層，二者的Rf值、顏色均一致。且與對照品混合熔點不下降。因此，化合物鑒定為紫丁香苷 (syringin)，純度為 98. 9%。ALLTECH高效液相色譜儀；KQ-250DB型數控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限 公司)；電子大平(500g/0.001g金羊天平儀器廠)；百靈LA114型電子天平(110g/0. OOOlg 常熟市百靈天平儀器有限公司)；101-2型數顯電熱鼓風干燥箱(上海錦屏儀器儀表有限公 司)。1. 2試驗方法1. 2. 1紫丁香苷含量測定方法的建立1.2. 1.1色譜條件色譜柱0DS-C18G. 6謹Χ250_，5μπι)；流動相乙腈水 (12 88)；體積流量1. OmL · mirT1 ；柱溫:25°C ；檢測波長265nm ；進樣量10 μ L。1. 2. 1. 2供試品溶液的制備取干燥至恒重的暴馬丁香枝條粗粉約0. 5g，精密稱 定，置于錐形瓶中，精密加入體積分數90%的乙醇30mL，密封稱重，記錄重量，浸泡過夜，超 聲提取，靜置至室溫，補足重量，提取液過濾，用孔徑為0. 45 μ m濾膜濾過，即得。1. 2. 1. 3對照品溶液的制備精確稱取紫丁香苷對照品10. OOOOmg,置于IOmL容量 瓶中，用甲醇溶解定容，制成濃度為1. Omg · mL—1的紫丁香苷對照品溶液。1. 2. 1. 4標準曲線的繪制吸取上述對照品溶液，分別進樣2、4、8、10、12 μ L，按上 述色譜條件進行HPLC分析，以峰面積和進樣質量進行線性回歸，紫丁香苷線性方程為Y = 603105Χ+74303. 3(R2 = 0. 9993，η = 5)，結果表明紫丁香苷在0. 8 4. 8 μ g與峰面積具有 良好的線性關系。1. 2. 1. 5精密度試驗精密吸取紫丁香苷對照品溶液(1. Omg · mL—1) 10 μ L，重復進 樣5次，測定紫丁香苷峰面積，得其RSD為1. 06%。1. 2. 1. 6穩定性試驗取暴馬丁香枝條樣品，制備供試品溶液，進樣10 μ L，每隔池 測定1次，結果表明樣品在他內穩定，樣品中紫丁香苷峰面積的RSD為1. 48% (n = 5)。1. 2. 1. 7重現性試驗取暴馬丁香枝條樣品，重復制備5份供試品溶液，分別測定， 結果紫丁香苷質量分數的RSD為1. 85%。1. 2. 1. 8回收率試驗采取加樣回收法。精密稱取暴馬丁香枝條樣品0. 5000g，平 行5份，加入一定量的紫丁香苷對照品，制備供試品溶液，進行測定，計算得紫丁香苷平均 回收率分別為100. 08%和98. 65%,RSD分別為1. 53%和1. 36% (n = 5)，表明結果準確可
Mho
1. 2. 1. 9樣品測定將樣品供試液在選定的色譜條件下進行分析，將其峰面積代入 相應的回歸方程，并按以下公式計算紫丁香苷的提取率。紫丁香苷提取率(Y)=提取液中紫丁香苷質量/藥材質量X 100%。1. 2. 2試驗選擇提取因素及相關水平1. 2. 2. 1乙醇體積分數范圍的選擇通過文獻查閱[13]，當每次提取90min，加10倍 量的溶劑，比較0 %、30 %、50 %、70 %、90 %乙醇對指標值的影響，結果顯示以水為溶劑對紫 丁香苷的提取率偏低，以體積分數大于30%的乙醇為溶劑對指標值能達到較好的提取效 果，所以選擇乙醇體積分數的下限為30%，上限為90%。1. 2. 2. 2提取時間范圍的選擇本試驗采用超聲提取的方法，一般提取時間為 30min左右。本試驗將提取時間范圍確定為10 90min以確定佳提取時間。1. 2. 2. 3提取次數和溶媒比范圍的選擇提取次數根據經驗選擇為3次。在中藥提 取中，溶媒比一般為15倍左右，如果溶劑量太少，浸泡過夜后被藥材吸收，導致無法過濾， 而溶劑量太大，試劑消耗過大，則需要更大的經濟投入，所以溶媒比選擇為12 30倍。2結果與分析2. 1星點設計與結果各因素水平設計見表1，按星點設計方法安排試驗，共17組(表幻，分別標號 為S1-S17。取干燥至恒重的暴馬丁香枝條粗粉約0. 5g，精密稱定，平行17份，于錐形瓶中 按表2處理，提取3次，合并備用，溶液用孔徑為0. 45 μ m濾膜濾過。為了精確考察最佳因素水平值，選取乙醇體積分數(X1)、提取時間(X2)和溶媒比 (X3)為自變量，以紫丁香苷提取率(Y)為因變量，采用星點設計-效應面方法設計試驗，并 用SAS9. 2軟件包對實驗數據進行RSREG分析，RSREG過程(二次響應面回歸過程)用于擬 合完全二次響應曲面的回歸模型te]。通過分析研究，擬合出曲面形狀的最佳響應的因子水 平或范圍。這里，Y為響應變量，W X3為因子變量，二次響應曲面回歸模型為Y = b0+b1X1+b2X2+b3X3+b4X1X2+b5X1X3+b6X2X3+b7X12+b8X22+b9X32+ εRSREG過程具有一下功能，(1)模型擬合及對參數估計做方差分析。( 為了調查 預測響應曲面的形狀而進行典型性相關分析。( 為了尋找最佳響應的范圍而進行嶺嵴分 析，由此可以精確得出最佳響應值時各因子的取值，同時，還可以以指標值為縱坐標，固定3 個自變量之一為所估計的最佳值上，其它兩個自變量為橫坐標，用Origins. 0繪制三維效 應面(response surface)圖。由圖中的指標值選取最佳自變量值，最后用效應面法得出的 最佳工藝條件提取藥材，并依據模型進行預測分析，進行驗證試驗，最終得到優化的提取工 藝條件。實驗設計與結果見表1、2。表1星點設計因素與水平Table 1 Factors and levels of central composite design
因素水平X1 (乙醇體積分數)/%X2 (提取時問)/minX,(溶媒比)/倍--1,68230.0010,0012.00--142.2026,2215.65060.0050—0021.00177.8073.7826.351.68290.0090.0030.00 2星點試驗設計與結果
權利要求
1. 一種紫丁香苷的提取工藝，其特征在于該提取工藝包括以下過程 步驟(一)取暴馬丁香枝條粉碎為40目，加入暴馬丁香枝條17 21倍的 60 % 乙醇浸泡1- 后，超聲提取1次，超聲提取時間為80-90min，超聲功率為80w，溫度為30°C， 過濾，得到乙醇提取液和殘渣；步驟(二)將(一)中殘渣再重復超聲提取2次，得到乙醇提取液； 步驟(三)將(一)和(二)中乙醇提取液合并，回收乙醇溶劑，得到濃縮液； 步驟(四)將(三)中濃縮液加水稀釋，過濾得上清液；步驟(五)將(四)中的上清液上Dltll大孔吸附樹脂柱吸附，分別用蒸餾水、10%濃度 乙醇洗脫，得到10%濃度乙醇洗脫液；步驟(六)將(五)中的10%濃度乙醇洗脫液，上JTY-I反向樹脂柱層析，收集洗脫 液，回收溶劑得粗結晶，以甲醇溶劑重結晶得到紫丁香苷純品。
全文摘要
本發明屬醫藥產品研究開發技術領域。本發明涉及一種紫丁香苷的提取工藝，取暴馬丁香枝條粉碎為40目，加入暴馬丁香枝條17～21倍的54％～60％乙醇浸泡1-2h后，超聲提取，提取時間為80-90min，超聲功率為80w，溫度為30℃，過濾，得到乙醇提取液，回收乙醇溶劑，得到濃縮液，將濃縮液加水稀釋，過濾得上清液，將上清液上D101大孔吸附樹脂柱吸附，分別用蒸餾水、10％濃度乙醇洗脫，得到10％濃度乙醇洗脫液，將10％濃度乙醇洗脫液，上JTY-1反向樹脂柱層析，收集洗脫液，回收溶劑得粗結晶，以甲醇溶劑重結晶得到紫丁香苷。本發明產品具有抗炎鎮痛、抗癌活性及保肝作用，本發明產品適合工業化生產。
文檔編號C07H1/08GK102093443SQ20111006007
公開日2011年6月15日 申請日期2011年3月8日 優先權日2011年3月8日
發明者張崇禧, 鄭友蘭 申請人:山東大學威海分校