專利名稱：一種格列風內酯單體的分離純化方法
技術領域：
本發(fā)明屬于中藥化學技術領域，涉及ー種格列風內酯単體的分離純化方法，尤其是ー種采用微波提取、酸堿純化、氧化鋁柱層析以及重結晶結合的方法制備格列風內酷。
背景技術：
天葵Semiaquilegiaadoxoides (DC. )Makino是毛莨科天葵屬植物，為多年生草本，塊根肉質，略呈圓柱形或紡錘形，外皮棕黑色；莖纖細，被白色細柔毛，基生葉為三出復葉，具長柄，3深裂；莖生葉較小，互生，單岐或ニ岐聚傘花序，花白色，常帶淡紫色；萼片5，花瓣狀；花瓣5，匙形，雄蕊8-14 ;雌蕊具3-4心皮，瞢莢果2-4 ;生長于丘陵或低山林下、草叢、溝邊等陰濕處。廣泛分布于河南、江蘇、湖北、福建、湖南等地。天葵子味甘、苦，性寒，有小毒；具清熱解毒，消腫散結之功效；用于瘰癘、臃腫、疔瘡、跌打損傷、毒蛇咬傷等癥?，F代藥理實驗表明，天葵子對金黃色葡萄球菌等有抑制作用；臨床上用天葵子或其復方治療急性軟組織損傷及骨關節(jié)結核、急性乳腺炎、子宮肌瘤、原發(fā)性肝癌、胃癌等。天葵子主要含生物堿、內酷、香豆素、酚酸及酚苷類化合物，格列風內酯(Griffonilide)是天葵子的主要有效成分之一，其分子式為C8H8O4,分子量為168. 04，為無色針晶(甲醇)，易溶于甲醇，微溶于水、丙酮，難溶于氯仿。藥理研究表明其具有顯著的抗炎活性，對炎癥的抑制率高達64%。格列風內酯的提取技術主要包括(I)以天葵子鮮品或干品為原料，切碎，用提取溶媒(水、甲醇、こ醇、丙酮中的一種或與水任意比例混合溶剤)行提取，所得提取液除去溶劑后得到天葵提取物，純化步驟為用適量水分散，非極性溶劑除去色素，該非極性溶劑為正己烷、環(huán)己烷、石油醚、こ醚、ニ氯甲烷或三氯甲烷，用溶劑萃取，萃取液濃縮后除去該萃取用溶劑，得天葵提取物純化物；或用適量甲醇溶解，上大孔吸附樹脂，先用蒸餾水洗脫，然后用20%的甲醇或こ醇溶液洗脫，再用含甲醇或こ醇20-90%的水溶液進行洗脫，收集洗脫液，除去溶劑，得天葵提取物純化物；或用適量粗硅膠或氧化鋁拌樣，進行柱層析，用有機溶劑洗脫，除色素，該方法所得提取物為混合物，不能滿足市場對高含量有效活性成分単體的需求；(2)以天葵子藥材粗粉為原料，5倍量95%こ醇加熱回流提取3次，毎次3h，合并提取液，回收こ醇，得こ醇浸膏，取浸膏懸浮于水中，用醋酸こ酯和正丁醇萃取，蒸干溶劑，硅膠柱色譜分離，氯仿-甲醇系統(tǒng)梯度洗脫，氯仿-甲醇(100 8)洗脫流分濃縮析晶，結晶漏斗抽濾，甲醇重結晶得到格列風內酯，該方法生產時間長，填充物難以回收，成本較高。
發(fā)明內容
本發(fā)明的目的在于提供一種格列風內酯單體的分離純化方法。該方法提取率高、制備過程簡單，易于批量生產。本發(fā)明是采用以下技術方案實現的一種格列風內酯単體的分離純化方法，其特征在于包括以下步驟
(I)提取取天葵子藥材粉碎成粗粉，加60-85%こ醇微波提取10-60分鐘，提取2-5次，合并提取液，濃縮得浸膏；(2)堿溶酸沉將上述浸膏加堿水分散，攪拌均勻，過濾，濾液再加酸水調至PH4-5，用こ酸こ酯萃取，萃取液濃縮后得到天葵子總內酯浸膏；(3)氧化鋁柱層析將上述濃縮液與1-1. 5倍150-200目中性氧化鋁拌混均勻，再用新鮮的中性氧化鋁上柱，拌混氧化鋁裝于其上，以混合有機溶劑洗脫，收集洗脫液，回收試劑，得到格列風內酯濃縮液；(4)重結晶將格列風內酯濃縮液置于結晶罐中靜置8-24小時使其結晶，離心使格列風內酯晶體與母液分離，用ニ氯甲烷-甲醇重結晶，得到純度為95%以上的格列風內 酷。步驟⑴所述的こ醇用量為原料的10-20倍。步驟(2)所述的堿水為氨水、氫氧化鈉溶液或碳酸氫鈉溶液,濃度為0. 5-3%,堿水加入量為提取浸膏量的2-5倍。步驟(2)所述的酸水為鹽酸或硫酸。步驟(3)所述的混合溶劑為正己烷-甲醇溶液或石油醚-ニ氯甲烷-甲醇混合溶液，所述正己烷-甲醇溶液體積比為3 I ;所述石油醚-ニ氯甲烷-甲醇混合溶液洗脫為先以石油醚-ニ氯甲烷(10 I)洗脫雜質，再用ニ氯甲烷洗脫，最后用ニ氯甲烷-甲醇(4 I)洗脫。步驟⑷所述重結晶溶劑ニ氯甲烷-甲醇的體積比為10-6 I。本發(fā)明的有益效果是；由于采用了微波技術，利用微波的熱效應能使得基質材料內部的水分升溫和汽化，迅速升溫導致基質材料結構發(fā)生變化，材料變得疏松，減小了傳質阻力；微波的非熱效應能使得基質材料中各組分之間的作用カ減弱，解析作用增強，溶解度提高，從而達到顯著提高提取效果的目的；利用格列風內酯在堿液中可開環(huán)，在酸液中閉環(huán)的性質與其他成分分離，且本發(fā)明使用少量的稀堿和稀酸，對格列風內酯結構不會造成破壞。下面將結合具體實施方式
進ー步說明本發(fā)明，但本發(fā)明要求保護的范圍并不局限于下列實施方式。
具體實施例方式實施例I : 取天葵子藥材2kg(格列風內酷含量0. 037%),粉碎成粗粉投入微波提取罐，加入26L60%こ醇溶液提取20分鐘，提取液濾出，如此反復提取5次，合并提取液，濃縮得到浸膏192. 6g，將浸膏用3%氫氧化鈉溶液分散，過濾，取濾液加硫酸酸化至pH5，濃縮后所得浸膏再用こ酸こ酯反復萃取，濃縮，得到天葵子總內酯浸膏，與等量中性氧化鋁拌混均勻，再用新鮮的中性氧化鋁上柱，拌混氧化鋁裝于其上，以石油醚-ニ氯甲烷(10 I)洗脫雜質，再用ニ氯甲烷洗脫，最后用ニ氯甲烷-甲醇(4 I)洗脫，收集ニ氯甲烷-甲醇(4 I)洗脫液，回收試劑，得到格列風內酯濃縮液，將濃縮液置于結晶罐中靜置12小時使其結晶，離心，用ニ氯甲烷-甲醇(9 I)重結晶，得到96. 4%的格列風內酯0. 48g。實施例2
取天葵子藥材2kg(格列風內酷含量0. 037%),粉碎成粗粉投入微波提取罐，加入40L80 %こ醇溶液提取60分鐘，提取液濾出，如此反復提取2次，合并提取液，濃縮得到浸膏198. 3g，將浸膏用I %碳酸氫鈉溶液分散，過濾，取濾液加硫酸酸化至pH4. 5，濃縮后所得浸膏再用こ酸こ酯反復萃取，濃縮，得到天葵子總內酯浸膏，與等量中性氧化鋁拌混均勻，再用新鮮的中性氧化鋁上柱，拌混氧化鋁裝于其上，以正己烷-甲醇(3 I)洗脫，收集洗脫液，回收試劑，得到格列風內酯濃縮液，將濃縮液置于結晶罐中靜置8小時使其結晶，離心，用ニ氯甲烷-甲醇(6 I)重結晶，得到95.6%的格列風內酯0.5化。
實施例3 取天葵子藥材5kg(格列風內酷含量0. 037%),粉碎成粗粉投入微波提取罐，加入85L70 %こ醇溶液提取40分鐘，提取液濾出，如此反復提取3次，合并提取液，濃縮得到浸膏480. 7g，將浸膏用0. 5%氫氧化鈉溶液分散，過濾，取濾液加鹽酸酸化至pH4，濃縮后所得浸膏再用こ酸こ酯反復萃取，濃縮，得到天葵子總內酯浸膏，與等量中性氧化鋁拌混均勻，再用新鮮的中性氧化鋁上柱，拌混氧化鋁裝于其上，以石油醚-ニ氯甲烷(10 I)洗脫雜質，再用ニ氯甲烷洗脫，最后用ニ氯甲烷-甲醇(4 I)洗脫，收集ニ氯甲烷-甲醇(4 I)洗脫液，回收試劑，得到格列風內酯濃縮液，將濃縮液置于結晶罐中靜置18小時使其結晶，離心，用ニ氯甲烷-甲醇(8 I)重結晶，得到96. 8%的格列風內酯I. lg。實施例4 取天葵子藥材IOkg(格列風內酯含量0.037% )，粉碎成粗粉投入微波提取罐，カロ入100L85%こ醇溶液提取10分鐘，提取液濾出，如此反復提取5次，合并提取液，濃縮得到浸膏98. 6g，將浸膏用2 %碳酸氫鈉溶液分散，過濾，取濾液加硫酸酸化至pH4，濃縮后所得浸膏再用こ酸こ酯反復萃取，濃縮，得到天葵子總內酯浸膏，與等量中性氧化鋁拌混均勻，再用新鮮的中性氧化鋁上柱，拌混氧化鋁裝于其上，以石油醚-ニ氯甲烷(10 I)洗脫雜質，再用ニ氯甲烷洗脫，最后用ニ氯甲烷-甲醇(4 I)洗脫，收集ニ氯甲烷-甲醇(4 I)洗脫液，回收試劑，得到格列風內酯濃縮液，將濃縮液置于結晶罐中靜置24小時使其結晶，離心，用ニ氯甲烷-甲醇(10 I)重結晶，得到96. 3%的格列風內酯2. 5g。實施例5 取天葵子藥材25kg(格列風內酯含量0. 037% )，粉碎成粗粉投入微波提取罐，カロ入375L75%こ醇溶液提取30分鐘，提取液濾出，如此反復提取4次，合并提取液，濃縮得到浸膏2396. 9g，將浸膏用I. 5%碳酸氫鈉溶液分散，過濾，取濾液加鹽酸酸化至pH5，濃縮后所得浸膏再用こ酸こ酯反復萃取，濃縮，得到天葵子總內酯浸膏，與等量中性氧化鋁拌混均勻，再用新鮮的中性氧化鋁上柱，拌混氧化鋁裝于其上，以正己烷-甲醇(3 I)洗脫，收集洗脫液，回收試劑，得到格列風內酯濃縮液，將濃縮液置于結晶罐中靜置15小時使其結晶，離心，用ニ氯甲烷-甲醇(7 I)重結晶，得到95. 7%的格列風內酯9. Sg。
權利要求
1.一種格列風內酯単體的分離純化方法，其特征在于包括以下步驟 (1)提取取天葵子藥材粉碎成粗粉，加60-85%こ醇微波提取10-60分鐘，提取2-5次，合并提取液，濃縮得浸膏； (2)堿溶酸沉將上述浸膏加堿水分散，攪拌均勻，過濾，濾液再加酸水調至PH4-5，用こ酸こ酯萃取，萃取液濃縮后得到天葵子總內酯浸膏； (3)氧化鋁柱層析將上述濃縮液與1-1.5倍150-200目中性氧化鋁拌混均勻，再用新鮮的中性氧化鋁上柱，拌混氧化鋁裝于其上，以混合有機溶劑洗脫，收集洗脫液，回收試劑，得到格列風內酯濃縮液； (4)重結晶將格列風內酯濃縮液置于結晶罐中靜置8-24小時使其結晶，離心使格列風內酯晶體與母液分離，用ニ氯甲烷-甲醇重結晶，得到純度為95%以上的格列風內酷。
2.如權利要求I所述的ー種格列風內酯単體的分離純化方法，其特征在于步驟(I)所述的こ醇用量為原料的10-20倍。
3.如權利要求I所述的ー種格列風內酯単體的分離純化方法，其特征在于步驟(2)所述的堿水為氨水、氫氧化鈉溶液或碳酸氫鈉溶液，濃度為O. 5-3%,堿水加入量為提取浸膏量的2-5倍。
4.如權利要求I所述的ー種格列風內酯単體的分離純化方法，其特征在于步驟(2)所述的酸水為鹽酸或硫酸。
5.如權利要求I所述的ー種格列風內酯単體的分離純化方法，其特征在于步驟(3)所述的混合溶劑為正己烷-甲醇溶液或石油醚-ニ氯甲烷-甲醇混合溶液，所述正己烷-甲醇溶液體積比為3 I ;所述石油醚-ニ氯甲烷-甲醇混合溶液洗脫為先以石油醚-ニ氯甲烷(10 I)洗脫雜質，再用ニ氯甲烷洗脫，最后用ニ氯甲烷-甲醇(4 I)洗脫。
6.如權利要求I所述的ー種格列風內酯単體的分離純化方法，其特征在于步驟(4)所述重結晶溶劑ニ氯甲烷-甲醇的體積比為10-6 I。
全文摘要
一種格列風內酯單體的分離純化方法，該方法為將天葵子用60-85％乙醇微波提取10-60分鐘，濃縮得浸膏，加堿水溶解、過濾，再加酸水還原，用乙酸乙酯萃取，萃取液濃縮、拌樣上中性氧化鋁柱，混合溶液洗脫，洗脫液回收試劑，二氯甲烷-甲醇重結晶得產品。采用該方法提取率高、制備過程簡單，產品純度高、晶型好，易于批量生產。
文檔編號C07D307/77GK102649781SQ20111004535
公開日2012年8月29日 申請日期2011年2月25日 優(yōu)先權日2011年2月25日
發(fā)明者劉東鋒, 李法慶 申請人:蘇州寶澤堂醫(yī)藥科技有限公司